【摘要】：背景與目的轉移,即惡性腫瘤細胞從原發(fā)部位到遠隔臟器的播散,其導致了90%的人類惡性腫瘤相關性死亡。從病理上講,轉移是一個包含了一系列離散生物學事件的多步驟過程。在該過程中,惡性腫瘤細胞的侵襲是最為關鍵的生物學步驟之一,它參與了從轉移起始發(fā)生到形成繼發(fā)腫瘤的轉移相關性級聯(lián)反應中的幾乎每一個階段。基質金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)是一類包含25個高度同源性家族成員的鈣離子依賴性含鋅肽鏈內切酶。傳統(tǒng)認為,基質金屬蛋白酶的主要功能是對細胞間粘附分子以及細胞外基質(Extracellular matrix, ECM)進行降解,從而為惡性腫瘤細胞的侵襲浸潤提供有利條件。最近,基質金屬蛋白酶又被證實具有獨立于其蛋白水解活性之外的增強細胞遷移能力的功能。基質金屬蛋白酶-14(Matrix metalloproteinase-14, MMP-14)是一種膜嵌入型基質金屬蛋白酶,它能夠通過降解細胞外基質以及基底膜蛋白、激活MMP-2前體以及MMP-13前體、誘導生長因子激活、增強細胞遷移能力,從而在惡性腫瘤侵襲轉移中扮演十分關鍵的角色。在表型上,MMP-14對于促進上皮細胞向可遷移的間充質樣細胞轉化(Epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)也發(fā)揮了至關重要的作用,該轉化被認為是轉移過程起始步驟的一個重要機制。然而,MMP-14在惡性腫瘤進展過程中的表達調控機制仍然有待進一步闡明。研究證實,轉錄因子Spl和Egr-1能夠上調MMP-14的表達水平。MMP-14還被證實能在轉錄水平上受到乏氧誘導因子-2α(Hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)的調節(jié)。MMP-14表達水平不但受到這些轉錄因子的正性調控,它還受到miRNA-9和miRNA-133a等microRNAs(miRNAs,miR)的負性調控。microRNAs(miRNAs或miR)為高度保守的非編碼小RNA,其被報道能夠通過轉錄后抑制、信使RNA降解或啟動子激活,負性或正性地調節(jié)轉移相關基因表達從而參與轉移過程。盡管miRNAs能夠通過與所調節(jié)基因的啟動子區(qū)域結合正性調節(jié)基因表達,但絕大多數(shù)niRNAs均被報道可抑制翻譯或通過與靶信使RNA的3'端非翻譯區(qū)(Three prime untranslated regions,3'UTR)相互作用誘導其發(fā)生序列特異性降解從而負性調節(jié)靶基因的表達。miRNAs首先被轉錄成大約70個核苷酸的前體,然后經過名為Dicer的核糖核酸酶-Ⅲ型酶(Nase-III type enzyme)處理,得到約為22個核苷酸的成熟產物。迄今為止,人類基因組已被鑒定出含有超過1500個niRNAs編碼基因,它們共同調控著大約30%的人類基因表達。與此同時,每個獨立的miRNA也被證實能夠調控數(shù)十至數(shù)百個基因的表達,從而對多種細胞通路進行高效的協(xié)調與整合。有趣的是,許多miRNAs以多成員家族的形式存在,表明了它們功能上的冗余。miR-181a-5p為miR-181s的家族成員,該家族包括了4個高度保守的成熟miRNA分子,分別為miR-18la、miR-181b、miR-181c和miR-181d.它們獨立來自6個miRNA前體,這些miRNA前體的編碼基因位于3條不同的染色體上。最近,這組新的基因被證實能在惡性轉化過程中發(fā)揮關鍵作用。另一方面,miR-181s家族成員也在許多腫瘤中表達下調從而發(fā)揮腫瘤抑制基因的功能。在本研究中,我們證實了miR-181a-5p能夠通過直接靶定MMP-14信使RNA的3'UTR從而負性調節(jié)MMP-14表達,造成細胞遷移能力、侵襲能力以及血管生成能力的顯著降低。我們的數(shù)據(jù)突出了miR-181a-5p在惡性腫瘤播散過程中的重要功能性角色,揭示了一個具有預后意義的潛在生物標志物以及預防惡性腫瘤轉移的潛在分子靶點。材料與方法在第一部分的研究中,我們采用基因芯片數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)挖掘技術、激光捕獲顯微切割技術、Real time PCR和免疫組織化學染色方法,對MMP-14在來自不同器官的不同惡性腫瘤中的表達水平以及MMP-14在惡性腫瘤組織(包括浸潤前緣的惡性腫瘤細胞)和癌旁正常組織中的表達情況進行了系統(tǒng)的檢測與分析,驗證了MMP-14在多種人類惡性腫瘤中的表達上調情況,闡明了MMP-14表達分布與惡性腫瘤細胞侵襲浸潤狀態(tài)之間的相關性。在第二部分的研究中,我們采用生物信息學分析、DNA構建體構建、慢病毒系統(tǒng)、Real time PCR、蛋白免疫印跡和雙熒光素酶實驗的方法,對MMP-14的潛在調節(jié)者進行了預測,證實了niR-181a-5p能夠干擾異位表達的MMP-14,且能夠通過直接靶定MMP-14信使RNA的3'UTR從而對MMP-14的表達發(fā)揮負性調節(jié)作用。在第三部分的研究中,我們采用DNA構建體構建、慢病毒系統(tǒng)、明膠酶譜分析、蛋白免疫印跡、Transwell小室細胞遷移實驗、基于圓點的2D細胞遷移實驗、基于圓點的3D細胞侵襲實驗、大體手工刮取技術、Real time PCR,細胞表面生物素�；瘜嶒�、雞胚絨毛尿囊膜侵襲實驗和雞胚絨毛尿囊膜血管生成實驗的方法,探索了miR-181a-5p對MMP-14功能的影響,證實了miR-181a-5p能夠抑制MMP-14介導的細胞遷移、細胞侵襲以及血管生成。結果1.MMP-14在多種人類惡性腫瘤中表達上調人類惡性腫瘤細胞中表達上調的MMP-14已被證實能夠促進腫瘤的生長和轉移。盡管MMP-14在多種惡性腫瘤中均被報道為表達上調,但迄今為止仍然沒有關于MMP-14在來自不同器官的不同惡性腫瘤中表達水平的系統(tǒng)分析。通過挖掘基因芯片數(shù)據(jù)庫Oncomine (癌癥分析數(shù)據(jù)庫),我們評估了MMP-14在人類惡性腫瘤標本中的表達水平。當P值被賦值限定在小于0.01時,相較于各自的非惡性對照組織,大量的惡性腫瘤展現(xiàn)出了MMP-14的顯著表達上調。為了驗證數(shù)據(jù)挖掘結果,我們檢測了MMP-14在人類乳腺癌標本中信使RNA與蛋白的表達水平。我們采用本課題組既往使用的激光捕獲顯微切割技術采集了乳腺癌細胞和癌旁正常上皮細胞,然后行Real time PCR檢測其中的MMP-14信使RNA水平。我們的數(shù)據(jù)表明,MMP-14選擇性地表達于人類乳腺導管原位癌和浸潤性導管癌中,而正常上皮則未見表達。MMP-14在浸潤性導管癌中的表達水平高于其在乳腺導管原位癌中的表達水平,盡管兩者之間的差別沒有統(tǒng)計學意義。為了確認這個現(xiàn)象,我們使用抗-MMP-14抗體對相應的人類乳腺癌標本進行了免疫組織化學染色。與Real time PCR的檢測數(shù)據(jù)相一致,MMP-14蛋白僅在人類乳腺癌細胞中被檢測到,而并未在鄰近的正常上皮細胞中被檢測出來。為了進一步證實我們數(shù)據(jù)挖掘結果所顯示的MMP-14表達上調是一個惡性腫瘤中的普遍現(xiàn)象,我們使用抗-MMP-14抗體對人類結腸癌標本進行了免疫組織化學染色。我們觀察到MMP-14在正常結腸粘膜細胞中表達量極少,而在位于浸潤前緣的惡性腫瘤細胞中卻呈現(xiàn)了顯著升高的染色強度。因此,我們的研究表明,MMP-14在人類惡性腫瘤中顯著表達上調,且其表達水平與惡性腫瘤的侵襲浸潤狀態(tài)密切相關。2. miR-181s被計算機預測為MMP-14的潛在調節(jié)者MMP-14在人類惡性腫瘤中呈現(xiàn)顯著表達上調,然而其表達上調的調節(jié)機制仍然有待進一步闡明。當我們將包含有MMP-143'UTR的MMP14-GFP嵌合體cDNA (MMP14-GFP/3'-UTR)瞬時轉染至低侵襲性人類乳腺癌細胞MCF-7和高侵襲性人類乳腺癌細胞MDA-MB-231時,我們注意到MMP 14-GFP在MCF-7細胞中的表達弱于在MDA-MB-231細胞中的表達。然而這種差異并沒有在瞬時轉染了不包含MMP-14 3'UTR的MMP14-GFP嵌合體cDNA的細胞中被觀察到。這個結果也可在人類前列腺癌細胞LNCaP(低侵襲性)、DU145和PC3(高侵襲性)中被重復出來,提示MMP-14信使RNA 3'UTR可能含有造成MMP-14在不同惡性腫瘤細胞系中差異表達的調控序列。眾所周知,3'UTR通常包含miRNA應答元件(miRNA response elements, MRE),這些元件正是rniRNAs能夠與3'UTR相結合的序列。為了識別MMP-14信使RNA 3'UTR上假定的miRNA應答元件,我們使用TargetScan搜尋其中潛在的miRNA應答元件。該分析顯示,MMP-14信使RNA 3'UTR上存在多個miRNA應答元件能夠潛在地與miR-22、miR-24、miR-26、miR-133、miR-150以及miR-181s相互作用。為了增加這些假定的niRNA應答元件存在于3'UTR上的概率,我們又使用了另一個miRNA預測算法miRanda.通過對TargetScan和miRanda所預測的miRNA應答元件進行對比分析,我們發(fā)現(xiàn)只有miR-133和miR-181s是同時被兩種計算機分析方法預測出來的共同結果。而在該3'UTR的第291個核苷酸至第297個核苷酸之間,niR-181的miRNA應答元件與miR-181 s相結合的預測得分最高,因此我們選擇了對miR-181s進行進一步研究。3.miR-181a-5p能夠干擾異位表達的MMP-14由于不同亞型的miR-181包含了可與MMP-14 3'UTR結合的相同種子序列,miR-181a-2連同其兩側含有140個堿基對的側翼區(qū)被我們從染色體DNA中擴增了出來,所獲得的DNA也被我們克隆至包含綠色熒光蛋白報告基因的MDH1-PGK-GFP 20逆轉錄病毒載體中。基于當下的miRNA命名原則(http://www.mirbase.org), 我們將包含hsa-miR-181a-2成熟序列的載體命名為miR-181a-5p/GFP。采用相似的方法,被預測為不能與MMP-143'UTR相結合的miR-128也被我們克隆至MDH1-PGK-GFP 2.0逆轉錄病毒載體中作為對照(miR-128/GFP)。我們通過瞬時轉染編碼miR-181a-5p/GFP的cDNAs和對照載體至不表達可檢測到的內源性MMP-14的COS-1細胞中,使miR-181a-5p在該細胞中異位表達。采用Real time PCR方法,我們檢測到成熟的miR-181a-5p和miR-128已在瞬時轉染的COS-1細胞中表達,且與對照載體相比,miR-181a-5p和miR-128的表達水平分別達到了5倍和7倍的升高,表明成熟的miR-181a-5p和miR-128已在受轉染細胞中被高效地生產。隨后, 我們將MMP-14/3'-UTR和miR-control、miR-81a-5p/GFP或miR-128/GFP分別共轉染至COS-1細胞中,檢測miR-181a-5p能否影響異位表達的MMP-14。為了增加miRNA和MMP-14/3'-UTR的表達效率,我們首先在COS-1細胞中穩(wěn)定表達各個miRNA,然后再瞬時轉染MMP-14/3'-UTR cDNAs和對照載體。異位表達的miR-181a-5p,而非miR-control或miR-128,導致了MMP-14信使RNA水平和蛋白水平的顯著降低,提示miR-181a-5p能夠下調MMP-14的信使RNA。為了進一步闡明miR-1 81 a-5p所致的MMP-14信使RNA水平和蛋白水平表達缺失是由于MMP-14 3'-UTR的存在,我們采用過去已合成的僅編碼MMP-14開放閱讀框架但缺少MMP-143'UTR的質粒DNA對COS-1細胞進行瞬時轉染。蛋白免疫印跡顯示,在過度表達miR-181 a-5p或miR-control的細胞中,MMP-14的異位表達水平并無顯著性差異,從而證實了MMP-143'UTR中miR-181應答元件的存在。為了進一步驗證miR-181a-5p對調節(jié)MMP-14表達水平的作用,我們合成了U6啟動子驅動的miRNA海綿以下調miR-181a-5p的表達。相較于對照海綿,當miR-181 a-5p海綿在表達高水平內源性miR-181a-5p的MCF-7細胞中穩(wěn)定表達時,我們發(fā)現(xiàn)它能高效地降低細胞中的miR-181a-5p表達水平。為了闡明miRNA海綿介導的內源性miR-181a-5p減少是否能夠導致MMP-14的表達水平升高,我們對內源性表達和異位表達的MMP-14進行了檢測。已有研究證實,乏氧環(huán)境能夠誘導MMP-14表達上調。當穩(wěn)定表達miRNA海綿的MCF-7細胞被置于乏氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時后,相較于表達對照海綿的細胞,內源性MMP-14在表達miR-181a-5 p海綿的細胞中被觀察到顯著上調。為了進一步驗證miR-181a-5p在調節(jié)MMP-14表達中的作用,我們檢測了miR-181a-5p對異位表達MMP-14的影響。我們使用MMP 14-GFP/3'-UTR對穩(wěn)定表達miRNA海綿的MCF-7細胞進行瞬時轉染,然后分析MMP14-GFP的信使RNA表達和蛋白表達。異位表達的miR-181a-5p海綿,而非miR-control海綿,導致了MMP14-GFP信使RNA水平和蛋白水平的顯著上調,進一步提示了MMP-14可被miR-181a-5p負性調節(jié)。4.miR-181 a-5p與MMP-143'-UTR的直接相互作用為了證實miR-181a-5p能夠直接靶定MMP-14 3'-UTR,我們將包含有預測的miR-181a-5p應答元件的MMP-14 3'UTR序列融合到了熒光素酶報告基因中(Luc/3'-UTR).使用定點突變方法,我們又將預測的miR-181a-5p應答元件(7個核苷酸)轉換成互補序列作為對照,以排除miR-181 a-5p的潛在結合(Luc/3'-UTRmu).miR-181a-5 p的表達顯著減少了Luc/3'-UTR的熒光素酶活性,而在表達miR-control或Luc/3'-UTRmu的細胞中則沒有觀察到這個現(xiàn)象。當報告基因Luc/3'-UTR被轉染至穩(wěn)定表達miR-181a-5p海綿的MCF-7細胞時,其熒光素酶活性相較于穩(wěn)定表達miR-control的細胞呈現(xiàn)顯著升高,而Luc/3'-UTRmu的熒光素酶活性則并沒有被miR-181a-5p所影響。因此,我們所觀察到的miR-181a-5p誘導的MMP-14表達下調直接依賴于MMP-14信使RNA 3'UTR上的一個單一同源識別位點。采用基于圖像的實驗研究方法,我們觀察到共表達MMP 14-GFP/3'UTR和miR-181a-5p(無GFP)的COS-1細胞相較于共表達MMP 14-GFP/3'UTR和miR-control(無GFP)的對照細胞,其熒光強度呈現(xiàn)顯者降低。相反地,相較于穩(wěn)定表達對照海綿的MCF-7細胞,MMP 14-GFP/3'-UTR的熒光強度在穩(wěn)定表達miR-181a-5p海綿的MCF-7細胞中呈現(xiàn)顯著升高。5.miR-181a-5p對功能性MMP-14的影響我們過去曾經報道,功能性MMP-14能夠增強蛋白水解活性和細胞遷移能力。MMP-2是一種分泌性的基質金屬蛋白酶,能夠促進惡性腫瘤的侵襲和轉移,且一直被視為功能性MMP-14的指示器。因此我們隨后檢測了miR-181a-5p誘導的MMP-14表達量減少是否會導致MMP-2活性和細胞遷移能力的降低。相較于表達MMP-14/3'-UTR和miR-control或miR-128的對照細胞,將MMP-14/3'-UTR和miR-181a-5p/GFP共轉染至COS-1細胞后能夠導致MMP-2前體的激活減少,這種激活減少可通過MMP-2中間產物和完全激活狀態(tài)MMP-2的減少以及伴隨的MMP-2前體增多來證明,且與MMP-14的表達水平降低密切相關�？紤]到TIMP-2是MMP-14的天然抑制劑,因此我們檢測了miR-181a-5p誘導的MMP-14功能降低是否由于TIMP-2上調所致。然而我們的蛋白免疫印跡結果排除了這種可能性,因為miR-181a-5p并沒有增強TIMP-2在MDA-MB-231細胞中的表達。與MMP-2的活性降低相一致,miR-181 a-5p/GFP和MMP-14/3'-UTR在COS-1細胞中的異位表達導致了細胞遷移能力的顯著降低。重要的是,miR-128未能在表達MMP-14/3'-UTR的COS-1細胞中抑制細胞遷移能力,提示miR-181a-5p是調控MMP-14表達的一個關鍵因素,這種MMP-14的表達下調能夠導致蛋白水解潛能和細胞遷移能力的顯著降低。6.人類惡性腫瘤細胞系和人類惡性腫瘤標本中miR-181a-5p與MMP-14表達水平的負性相關已有研究證實,MMP-14的表達上調可在侵襲性人類惡性腫瘤中被觀察到,且與人類惡性腫瘤細胞系的侵襲能力密切相關。為了探索內源性miR-181a-5p水平與MMP-14表達在人類惡性腫瘤細胞系中的相關性,我們采用Real time PCR和蛋白免疫印記方法對人類惡性腫瘤細胞系進行了研究。如我們所料,MMP-14在高侵襲性惡性腫瘤細胞系中呈現(xiàn)相對較高的表達水平,例如HT1080細胞、MDA-MB-231細胞和乳腺癌干細胞SK-3rd。有趣的是,相較于低侵襲性惡性腫瘤細胞系,例如MCF-7細胞和SK-BR3細胞,miR-181a-5p在高侵襲性惡性腫瘤細胞系中的表達則呈現(xiàn)為顯著降低。為了闡明該現(xiàn)象的臨床意義,我們又檢測了miR-181a-5p和MMP-14表達水平在人類惡性腫瘤標本中的相關性。由于MMP-14在正常結腸粘膜中的表達水平極低,但在位于浸潤前緣的惡性腫瘤細胞中能夠呈現(xiàn)顯著升高的染色強度,因此我們采用大體手工刮取技術,收集了人類結腸癌樣本中位于浸潤前緣的腫瘤細胞和癌旁正常上皮細胞,然后行Real time PCR檢測miR-181a-5p的表達水平。與在細胞系中觀察到的結果一致,相較于癌旁正常上皮細胞,miR-181a-5p在侵襲性惡性腫瘤細胞中呈現(xiàn)顯著表達降低。這些數(shù)據(jù)表明,MMP-14在侵襲性人類惡性腫瘤中的表達可被miR-181a-5p的表達水平所影響。為了進一步闡明miR-181a-5p與MMP-14表達水平在惡性腫瘤進展中的因果關系,我們使用MDA-MB-231細胞進行研究,因為相較于其他惡性腫瘤細胞系,該細胞系具有高侵襲性且表達較高水平的MMP-14。當MDA-MB-231細胞被瞬時轉染miR-181a-5p/GFP后,其內源性MMP-14表達在信使RNA水平和蛋白水平均呈顯著降低。這種相關性同樣也在高表達內源性MMP-14的HT1080細胞中被重復了出來。MMP-14表達水平的特異性下調被證實能夠顯著抑制惡性腫瘤細胞的遷移能力和侵襲能力,即使其他的基質金屬蛋白酶仍在持續(xù)表達。因此,我們不禁要問miR-181a-5p是否能夠影響惡性腫瘤細胞的細胞遷移能力。通過Transwell/(?)室細胞遷移實驗,我們發(fā)現(xiàn)在MDA-MB-231細胞中過度表達miR-181a-5p能夠導致該細胞的遷移能力顯著降低。而miR-181a-5p所致的細胞遷移能力降低也在異位表達miR-181a-5p的HT1080細胞中被進一步證實。由于細胞遷移是惡性腫瘤侵襲過程中至關重要的決定性步驟,因此我們采用了3D細胞侵襲實驗以闡明MDA-MB-231細胞和HT1080細胞中過度表達的miR-181a-5p是否能夠抑制細胞的侵襲能力。如我們所料,當miR-181a-5p過度表達時,兩種細胞的細胞侵襲能力均呈現(xiàn)為顯著降低。由于MMP-14為跨膜蛋白酶,因此我們接下來要探討niR-181a-5p誘導的惡性腫瘤細胞遷移能力和侵襲能力的降低是否為細胞表面的MMP-14丟失所致。通過細胞表面生物素�；瘜嶒�,我們發(fā)現(xiàn)在異位表達高水平2miR-181a-5p勺HT1080細胞中,細胞表面的MMP-14相較于對照細胞呈現(xiàn)顯著降低。7.過度表達miR-181a-5p能夠降低惡性腫瘤細胞的體內侵襲能力和血管生成能力MMP-14的表達與惡性腫瘤侵襲能力的增強常�；橄嚓P。為了直接檢測miR-181a-5p是否能夠抑制MMP-14介導的惡性腫瘤細胞穿透基底膜的體內侵襲能力,我們進行了雞胚絨毛尿囊膜(Chick chorioallantoic membrane, CAM)侵襲實驗。雞胚絨毛尿囊膜包含了絨毛膜上皮和下層的主要由IV型膠原構成的尿囊膜,該尿囊膜能夠模擬人類上皮細胞的基底膜。惡性腫瘤細胞穿透表層的雞胚絨毛尿囊膜的上皮細胞和基底膜進入結締組織的侵襲現(xiàn)象,可經蘇木素-伊紅染色后被觀察到。被加至雞胚絨毛尿囊膜上的表達niR-control的MDA-MB-231細胞能夠穿透已破壞的基底膜,侵襲進入到結締組織當中。相反的是,穩(wěn)定表達miR-181 a-5p 的 MDA-MB-231細胞則未能穿透該基底膜。另外,相較于表達miR-181a-5p的細胞,載有表達miR-control細胞的雞胚絨毛尿囊膜下能夠觀察到顯著增多的新生血管。這種體內侵襲能力和血管生成能力的降低,提示miR-181a-5p能夠有效地干擾高水平表達MMP-14的MDA-MB-231細胞的體內侵襲能力。為了進一步闡明miR-181a-5p通過下調MMP-14表達所發(fā)揮的抗血管生成功能,我們使用了HT1080細胞進行研究。由于HT1080細胞僅表達極少量的miR-181a-5p,因此我們在該細胞中穩(wěn)定過表達了miR-181a-5p,然后像我們過去報道的那樣,將吸附有細胞的明膠海綿置于絨毛尿囊膜表面。miR-181a-5p,而非miR-control,能夠顯著抑制HT1080細胞誘導的新生血管形成。綜上所述,我們的研究首次闡明了miR-181a-5p是MMP-14表達水平的重要調節(jié)者,而且能夠影響MMP-14介導的惡性腫瘤細胞遷移、侵襲和血管生成能力。結論本研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-181a-5p在高侵襲性人類乳腺癌以及人類結腸癌中表達水平下調,且與這些腫瘤的MMP-14表達水平呈負性相關。在臨床樣本中,相較于癌旁正常組織,我們發(fā)現(xiàn)MMP-14的表達水平在位于浸潤前緣區(qū)域內的腫瘤組織中顯著升高,而這些組織內的miR-181a-5p表達水平則顯著降低。通過生物信息學分析,我們在MMP-14的3'-非翻譯區(qū)內找到了潛在的miR-181a-5p應答元件,且在后續(xù)的報告基因實驗中被我們所證實。過量表達的miR-181a-5p可顯著降低MMP-14的表達水平,反之,干擾表達miR-181a-5p可造成MMP-14的表達水平顯著升高。在進一步研究這兩個基因間的相互關系時,我們發(fā)現(xiàn)miR-181a-5p介導的MMP-14表達下調,可使惡性腫瘤細胞的遷移能力、侵襲能力顯著降低,同時可減少潛活狀態(tài)基質金屬蛋白酶-2(pro-MMP-2)的激活。此外,在雞胚絨毛尿囊膜試驗中,miR-181a-5p介導的MMP-14表達下調被證實可顯著降低惡性腫瘤細胞的體內侵襲能力以及血管生成能力。綜上所述,我們的研究成果闡明了miR-181a-5p在轉錄后水平對惡性腫瘤中MMP-14表達的調控機制,揭示了通過增強表達miR-181a-5p從而實現(xiàn)預防惡性腫瘤轉移的新策略。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
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本文編號：2471834