【摘要】：目的:通過體外加藥誘導的方法建立耐化療藥物卡鉑(Ka)的人口腔鱗癌Tca8113細胞模型,觀察耐卡鉑(Ka)的人口腔鱗癌Tca8113細胞的耐藥相關(guān)基因P-gp、GST-π的表達變化,再用中藥青蒿素干預耐卡鉑(Ka)的口腔鱗癌Tca8113細胞,對比前后耐藥基因P-gp、GST-π的變化,以及相應蛋白表達的變化,從而探討青蒿素逆轉(zhuǎn)口腔鱗癌Tca8113細胞耐藥的相關(guān)性研究。方法:1、體外誘導人口腔鱗癌Tca8113細胞耐藥細胞株的建立。本次實驗采用的化療藥物為卡鉑(Ka),誘導方法采用小劑量長期間暴露法逐漸增加藥物的濃度。2、采用細胞免疫化學的方法檢測耐藥細胞株中耐藥相關(guān)基因P-gp、GST-π的表達變化。3、體外培養(yǎng)耐卡鉑(Ka)的Tca8113細胞,用不同濃度(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)的青蒿素作用于耐藥細胞(24、48、72小時)后,用CCK8法檢測各組中青蒿素對耐藥細胞增殖活性的影響;用RT-PCR技術(shù)檢測不同濃度青蒿素(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)作用于耐藥細胞中P-gp、GST-π在mRNA表達水平上的變化;用Western-blot技術(shù)檢測不同濃度青蒿素(0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)作用于耐藥細胞P-gp、GST-π在蛋白表達水平上的變化。結(jié)果:1、細胞免疫化學結(jié)果顯示,P-gp和GST-π在耐卡鉑(Ka)的Tca8113細胞的陽性表達率遠高于Tca8113細胞,可以認為耐卡鉑(Ka)的Tca8113細胞和Tca8113細胞相比,P-gp和GST-π的表達均升高(P=0.018,P=0.020,P0.05)。2、CCK8細胞增殖實驗結(jié)果顯示,青蒿素能夠抑制耐卡鉑(Ka)的Tca8113細胞的增殖,不同濃度的青蒿素干預組與不加藥物的對照組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000,P0.05);隨著青蒿素濃度的增加,細胞增殖抑制率也在增加,在青蒿素濃度為100μg/ml時抑制率達到最大值;同一青蒿素濃度作用下,隨著時間的增加,抑制率也在增加,在作用72小時時抑制率達到最大值(P=0.000,P0.05)。3、RT-PCR結(jié)果顯示,與耐藥組相比,加入青蒿素的逆轉(zhuǎn)組細胞P-gp和GST-π的mRNA表達水平均有下降(P0.05),二者的mRNA表達量隨著青蒿素濃度的不斷增加而逐漸減少,不同濃度的青蒿素逆轉(zhuǎn)組與不加藥物的耐藥組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P-gp基因F=5.670,P=0.000;GST-π基因F=2.108,P=0.000)。4、Western-blot結(jié)果顯示,與耐藥組相比,加入青蒿素的逆轉(zhuǎn)組細胞P-gp和GST-π的蛋白表達水平均有下降(P0.05),二者的蛋白表達量隨著青蒿素濃度的不斷增加而逐漸減少,不同濃度的青蒿素逆轉(zhuǎn)組與不加藥物的耐藥組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P-gp基因F=206.661,P=0.000;GST-π基因F=153.016,P=0.000)。結(jié)論:1、青蒿素對耐卡鉑(Ka)的人口腔鱗癌Tca8113細胞的增殖有抑制作用,其抑制率隨青蒿素濃度的增高而增高。2、青蒿素作用下,耐卡鉑(Ka)的人口腔鱗癌Tca8113細胞中P-gp和GST-π的表達降低,從而逆轉(zhuǎn)了耐藥細胞的耐藥性。3、青蒿素逆轉(zhuǎn)耐卡鉑(Ka)的人口腔鱗癌Tca8113細胞多藥耐藥,在人口腔鱗癌的治療方面可能具有潛在的臨床研究價值,可能對口腔鱗癌新型抗癌藥物及輔助化療藥物的種類開拓新的領(lǐng)域。
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【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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