【摘要】：目的：探索突觸融合蛋白6 (syntaxin6,STX6)在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其作用機(jī)制。方法：我們回顧性分析了216位食管癌病人的臨床資料,分析STX6的表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)間的關(guān)系。我們通過培養(yǎng)人源食管癌細(xì)胞ECA109和TE1,通過RNA抑制的方法將STX6在ECA109、TE1細(xì)胞中進(jìn)行基因沉默,經(jīng)過免疫組化及免疫印跡實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的基因沉默效果。通過細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期檢測實(shí)驗(yàn)、傷口愈合實(shí)驗(yàn)、體外遷移實(shí)驗(yàn)等方法對抑制STX6的人源食管癌細(xì)胞ECA109及TE1的細(xì)胞活性、生長速度、細(xì)胞周期、遷移能力進(jìn)行研究。在抑制了STX6后,我們了檢測P53蛋白水平的變化；同時在抑制了STX6表達(dá)的ECA109及TE1細(xì)胞中,通過抑制P53的表達(dá),探討了P53對STX6蛋白的調(diào)控作用。我們又通過流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)的方法檢測STX6蛋白沉默后對整合素在細(xì)胞中的分布的影響,探索STX6影響細(xì)胞遷移的機(jī)制。結(jié)果：結(jié)果顯示STX6在食管鱗狀細(xì)胞癌臨床樣本中過量表達(dá),其在食管癌病人腫瘤組織中遠(yuǎn)高于正常組織,這提示我們STX6可能在食管癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。STX6的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及深度顯著相關(guān),與年齡、性別無相關(guān)性,這表明STX6可能會加快食管癌進(jìn)展。STX6沉默抑制食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞的活性和增殖,STX6是一種原癌基因,抑制STX6后,細(xì)胞的生長、存活率均有顯著的下降,細(xì)胞的遷移能力減弱；細(xì)胞周期G0/G1期所占比例上升,S期受到抑制。STX6沉默抑制的食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞,其細(xì)胞生長依賴于P53,抑制了STX,P53蛋白水平上升；抑制了STX6后,抑制P53蛋白可以回復(fù)部分STX抑制產(chǎn)生的性狀。證明STX6的調(diào)控是依賴于P53蛋白的。STX6沉默能夠抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞遷移并影響癌細(xì)胞遷移過程中整合素運(yùn)輸：STX6調(diào)控整合素的轉(zhuǎn)運(yùn),抑制STX6后細(xì)胞表面整合素減少,多分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,揭示了STX6抑制后細(xì)胞遷移能力下降的部分機(jī)制。結(jié)論：我們認(rèn)為在食管癌樣本中STX6的表達(dá)上調(diào),與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期顯著相關(guān)。一方面,STX6沉默通過P53抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的活力和增殖。另一方面,STX6影響整合素的轉(zhuǎn)運(yùn),調(diào)節(jié)食管鱗狀癌細(xì)胞遷移。總之,我們的研究顯示,STX6在食管鱗癌進(jìn)展中具有致癌作用,可能是一個有價值的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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本文編號：2456591