發(fā)布時(shí)間：2019-04-08 17:32

【摘要】：目的：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 (transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及凋亡關(guān)系密切,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases, DNMTs)在腫瘤發(fā)生及耐藥中發(fā)揮重要作用,并伴隨SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)的表達(dá)下調(diào)。因此,本研究擬通過(guò)外源性TGF-β1及其受體阻斷劑作用肺腺癌細(xì)胞,以探究TGF-β1經(jīng)DNMT1調(diào)控肺腺癌A549細(xì)胞對(duì)順鉑化療敏感性的改變,進(jìn)一步闡述非小細(xì)胞肺癌對(duì)順鉑的耐受機(jī)制,為闡明肺腺癌對(duì)順鉑耐受的機(jī)制奠定基礎(chǔ),為肺癌化療藥物的研發(fā)提供新的靶點(diǎn)。方法：以對(duì)順鉑耐受的肺腺癌A549細(xì)胞(DDP-A549)為研究對(duì)象,通過(guò)外源TGF-β1作用DDP-A549細(xì)胞,觀察DDP-A549細(xì)胞增殖能力和對(duì)順鉑敏感性的變化；并利用RT-PCR(?)Western blot檢測(cè)在TGF-p1作用下DNMTs和SPARC mRNA水平和蛋白水平的變化。以對(duì)順鉑敏感的肺腺癌A549為研究對(duì)象,通過(guò)TGF-β1受體阻斷劑SB431542(10μM)作用A549細(xì)胞,觀察A549細(xì)胞增殖能力和對(duì)順鉑敏感性的變化。并利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)在SB431542作用下DNMTs和SPARC mRNA水平和蛋白水平的變化。結(jié)果：5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用后的DDP-A549細(xì)胞對(duì)順鉑的ICso均顯著低于空白對(duì)照組[(22.28±1.60)μmol/L vs (39.05±5.40) μmol/L, P0.05; (25.5±3.83)μmol/L vs(39.05±5.40)μmol/L,P0.01]; 5ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用后DDP-A549細(xì)胞在5 μmol/L順鉑環(huán)境中,其克隆數(shù)顯著低于空白對(duì)照組[(752.7±190.4)vs(1218±139.5), P 0.01; (650.3±144.7)vs(1218vs139.5),P0.01)]; 15μmol/L順鉑作用24h時(shí),5ng/mL、10 ng/mL TGF-β1組細(xì)胞凋亡分?jǐn)?shù)均顯著高于空白對(duì)照組[(42.01±3.24)% vs(35.5±1.94)%, P 0.05; (43.76±1.54)% vs (35.5±1.94)%, P0.05)]。5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1作用24 h后,DDP-A549細(xì)胞DNMT1 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)均顯著下調(diào),SPARC mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)均顯著上調(diào)。10μMSB431542作用A549細(xì)胞24 h后,A549細(xì)胞對(duì)順鉑的IC5α顯著高于空白對(duì)照組[(31.40±0.17) μmol/L vs (26.14±1.74)μmol/L, P 0.05]; 10μMSB431542作用后的A549細(xì)胞在0.5μmol/L順鉑環(huán)境中,其克隆數(shù)和空白對(duì)照組之間無(wú)顯著差異[(405.7±18.15) vs (423.7±24.58), P 0.05]; 10 μmol /L順鉑作用24 h后,10μMSB431542組和空白對(duì)照組之間的細(xì)胞凋亡分?jǐn)?shù)無(wú)顯著差異[(16.60±3.22)%vs(16.58±2.00)%, P0.05)]。10μMSB431542作用A549細(xì)胞24 h后,細(xì)胞DNMT1在mRNA水平上無(wú)顯著變化,在蛋白水平的表達(dá)顯著上調(diào)。SPARC在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)卻無(wú)顯著變化。5 ng/mL TGF-β1單獨(dú)或者聯(lián)合10μMSB431542作用A549細(xì)胞24h后,5ng/mL TGF-β1組A549細(xì)胞對(duì)順鉑的IC5α顯著低于空白對(duì)照組和聯(lián)合作用組[(15.18±1.46)vs (26.14±1.74)μmol/L, P 0.01; (15.18±1.46)μmol/L vs(24.20±1.78)μmol/L, P0.05]; 5ng/mL TGF-β1作用后的A549細(xì)胞在0.5μmol/L順鉑環(huán)境中,其克隆數(shù)顯著低于空白對(duì)照組和聯(lián)合作用組[(173.7±50.34) vs (423.7±24.58), P 0.05; (173.7±50.34)vs(491.0±25.94), P0.01]; 10 μmol/L順鉑作用24 h時(shí),5 ng/mL TGF-β1組細(xì)胞凋亡分?jǐn)?shù)顯著高于空白對(duì)照合和聯(lián)合作用組[(27.32±1.94)% vs (16.58±2.00)%, P 0.05;(27.32±1.94)% vs (19.66±3.43)%, P0.05]。5 ng/mL TGF-β1單獨(dú)或者聯(lián)合10μM SB431542作用A549細(xì)胞24 h后,5ng/mL TGF-β1組A549細(xì)胞DNMT1在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)顯著低于空白對(duì)照組和聯(lián)合作用組,SPARC在nRNA水平和蛋白水平的表達(dá)顯著上調(diào)高于空白對(duì)照組和聯(lián)合作用組。結(jié)論：TGF-β1能夠增強(qiáng)肺腺癌A549細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,TGF-B1→DNMT1→SPARC可能是TGF-β1調(diào)控肺腺癌對(duì)順鉑敏感性的通路之一,這有望為研究肺癌對(duì)順鉑化療耐受提供新的思路,有助于進(jìn)一步闡明肺癌對(duì)順鉑耐受的分子機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2454773