【摘要】：前列腺癌在全球范圍內(nèi)是男性最常見的癌癥之一,每年都有大量的新發(fā)病例和死亡病例,不僅危害人們的生命,還給家庭和社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在中國前列腺癌的發(fā)病率在逐年上升,且由于臨床癥狀隱匿,診斷時(shí)常已是中晚期前列腺癌。晚期前列腺癌經(jīng)內(nèi)分泌治療一段時(shí)間后常轉(zhuǎn)變成雄激素非依賴性和雄激素抵抗性前列腺癌,目前臨床上尚無有效的治療方法,預(yù)后差,因此迫切需要尋找新的治療藥物和治療方式來治療這類前列腺癌。中國的傳統(tǒng)中藥作為天然產(chǎn)物,歷史悠久,應(yīng)用范圍廣,療效溫和,在防治腫瘤方面取得了重大成就,具有不良反應(yīng)低、毒副作用小的特點(diǎn)。因此從中草藥或其天然產(chǎn)物及其衍生物中尋找具有高選擇性和低毒副作用的抗腫瘤藥物已經(jīng)成為目前研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。柴胡皂苷(Saikosaponin,SS)是從柴胡屬falcatum L.(傘形科植物)的根部提取出來的三萜皂苷。由于所有的柴胡皂苷均有一般類固醇樣結(jié)構(gòu),它們已經(jīng)被證實(shí)有一些類固醇相關(guān)的藥理學(xué)活性。柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SSd)被認(rèn)為是柴胡皂苷藥理活性最強(qiáng)的亞型。研究報(bào)道SSd具有抗腫瘤、抗炎、治療腎病及抗肝纖維化等多種藥理活性,是一種具有重要應(yīng)用價(jià)值的天然化合物。近年來,許多中藥研究者進(jìn)行了SSd在體內(nèi)外腫瘤篩選實(shí)驗(yàn)的研究,證實(shí)了SSd對多種腫瘤具有抑制作用。研究報(bào)道SSd可有效抑制乳腺癌、肝細(xì)胞癌、肺腺癌等細(xì)胞的增生,并誘導(dǎo)凋亡。然而SSd對人前列腺癌的作用還未見報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞系DU145細(xì)胞為研究對象,研究和探討SSd對DU145細(xì)胞的影響及相關(guān)作用機(jī)制。PI3K/AKT信號(hào)通路和MAPK/ERK信號(hào)通路作為掌控細(xì)胞命運(yùn)的信號(hào)通路,具有調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡的功能。我們同時(shí)研究了SSd對這兩個(gè)通路中的活性成分-磷酸化的AKT和ERK蛋白及共同下游蛋白叉頭框蛋白O3a(forkhead box protein O 3a,FOXO 3a)蛋白表達(dá)的影響。本實(shí)驗(yàn)將通過MTT法、形態(tài)學(xué)觀察和Ki67免疫細(xì)胞化學(xué)染色等方法觀察SSd對DU145細(xì)胞活力的影響;通過流式細(xì)胞術(shù)和Western blot測定SSd對細(xì)胞周期的影響;通過Hoechst 33258熒光染色、HE染色、流式細(xì)胞術(shù)和Western blot等方法測定SSd對細(xì)胞凋亡的影響;并探討細(xì)胞周期阻滯和凋亡誘導(dǎo)的相關(guān)作用機(jī)制。通過臺(tái)盼蘭染色觀察其對原代培養(yǎng)的小鼠脾細(xì)胞的毒性作用,以此評價(jià)它對正常細(xì)胞的毒性作用。研究結(jié)果如下:1.MTT法和Ki67免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法顯示SSd可抑制DU145細(xì)胞的活力并呈劑量依賴性;2.Hoechst 33258熒光染料染色、HE染色和流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示SSd可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,并呈劑量和時(shí)間依賴性;3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示SSd使DU145細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,并且呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性;4.在加入Caspase廣泛抑制劑Z-VAD-FMK后用SSd處理細(xì)胞顯示細(xì)胞周期沒有明顯改變,而細(xì)胞凋亡明顯受到抑制;5.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示SSd對DU145細(xì)胞內(nèi)ROS并無明顯變化;6.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示SSd使DU145細(xì)胞MMP下降,并呈濃度依賴性;7.Western blot分析顯示SSd顯著上調(diào)DU145細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白的表達(dá),下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá),增加細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Cyto c的水平,并誘導(dǎo)Caspase-3的活化;8.Western blot分析顯示SSd上調(diào)DU145細(xì)胞內(nèi)p53和p21蛋白的表達(dá),下調(diào)Cyclin D1及其CDK4、CDK6的表達(dá)水平;9.SSd以濃度依賴性的方式下調(diào)磷酸化的AKT和磷酸化的ERK蛋白的表達(dá),并下調(diào)FOXO3a蛋白磷酸化的水平。因此,我們得到以下結(jié)論:1.我們首次揭示了SSd可以抑制人前列腺癌DU145細(xì)胞的活力,此抑制作用是通過誘導(dǎo)凋亡和阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期來完成的,呈劑量和時(shí)間依賴性;2.SSd對DU145細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用是通過線粒體途徑來調(diào)控的,包括上調(diào)促凋亡蛋白Bax和下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),從而使MMP耗散、Cyto c的釋放增加,激活Caspase-3來實(shí)現(xiàn)的;3.SSd對DU145細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯作用與上調(diào)p21、p53蛋白的表達(dá),下調(diào)Cyclin D1和CDK4、CDK6蛋白的表達(dá)水平有關(guān);4.SSd誘導(dǎo)DU145細(xì)胞發(fā)生凋亡是抑制細(xì)胞活性的主要原因,細(xì)胞周期阻滯是抑制細(xì)胞活性的次要原因;5.SSd可減少磷酸化的ERK和AKT的表達(dá),抑制FOXO3a蛋白的磷酸化水平,而FOXO3a是抑癌基因,它作為轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡過程中發(fā)揮重要作用。因此推測SSd或許是通過調(diào)節(jié)FOXO3a蛋白的表達(dá)來發(fā)揮抑制作用。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了SSd對人前列腺癌DU145細(xì)胞的抑制作用,并研究了相關(guān)作用機(jī)制,為SSd發(fā)展成為可能的前列腺癌的有效治療藥物提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張朝霞;有關(guān)細(xì)胞凋亡基因水平的調(diào)控機(jī)制[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2005年08期

2 朱永宏,郭文怡;細(xì)胞凋零在心血管系統(tǒng)的生理和病理意義[J];國外醫(yī)學(xué)(心血管疾病分冊);1996年01期

3 孫俊,孫曼霽;mRNA差異顯示技術(shù)對硫芥誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的研究[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1997年04期

4 丁渭;侯慶生;王東陽;劉凱;夏海濱;石英;陳德喜;;異構(gòu)體ΔASPP2可拮抗ASPP2對p53(細(xì)胞)凋亡功能的增強(qiáng)作用[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年02期

5 鄭勇，袁泉;細(xì)胞凋亡基因Fas的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1996年03期

6 張寶紅,唐朝樞,杜軍保;鈣化血管細(xì)胞凋亡基因的變化[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

7 陳廷,陳莉,山長武;病毒調(diào)控細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的分子生物學(xué)研究[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

8 李華;方伯言;;細(xì)胞內(nèi)酸化與神經(jīng)元凋亡的關(guān)系及鈉氫離子交換蛋白的作用[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2009年05期

9 袁斐;白鋼鋼;苗筠杰;陳勇;陳建偉;李祥;;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的研究進(jìn)展[J];中草藥;2014年06期

10 李懷臣,王春霞,陶仲為,王洪云,牟曉燕;Fas細(xì)胞凋亡基因與其配體在肺癌組織中表達(dá)的意義[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2000年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 徐新云;丁利平;周麗;袁建輝;黃海燕;;MAPK抑制劑對鎘致NRK細(xì)胞凋亡基因表達(dá)水平的作用研究[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)第14屆學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文集[C];2009年

2 李晨;殷s，

本文編號(hào)：2453627