【摘要】：目的:miR-10b作為miRNA成員之一具有與乳腺癌復(fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌作為乳腺腺癌類型之一具有同樣特性,miR-10b在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中可能起到主要作用。較高的穩(wěn)定性是miR-10b作為一個良好的生物標志物的重要特征。經(jīng)過數(shù)年保存的福爾馬林固定石蠟包埋的標本中仍然可以有效的提取和定量。原位雜交技術(shù)具有費用低、操作簡單、臨床上具有可推廣性,可以檢測單個細胞的mi R-10b表達量,還可在不經(jīng)分類和分離的情況下,比較不同細胞系中的miR-10b表達水平,本研采用原位雜交方法檢測miR-10b表達情況。研究miR-10b在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達差異及其與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征關(guān)系;miR-10b與早期浸潤性導(dǎo)管癌的中位無瘤生存時間及其與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后之間的關(guān)系。對早期乳腺浸潤性導(dǎo)管組織行免疫組化檢測雌激素受體、孕激素受體、人類表皮生長因子受體-2后,根據(jù)第12屆St Gallen國際乳腺癌會議共識將早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌進行分型,研究早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中mi R-10b與ER-a、PR、HER-2之間的關(guān)系,miR-10b與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的ER-a、PR、HER-2及分子亞型的中位無瘤生存時間及其與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后之間的關(guān)系。最后通過靶基因預(yù)測軟件及文獻報道篩選出miR-10b靶基因Notch基因1、核受體共阻遏物-2、HOXD10基因、核受體亞家族4組A3、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1、過氧化物酶體增殖物激活型受體a、過氧化物酶體增殖物激活型受體β,經(jīng)實時熒光定量PCR實驗驗證miR-10b與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是否相關(guān)。為進一步研究miR-10b基因在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中的作用奠定基礎(chǔ)。方法:首先采用原位分子雜交技術(shù)檢測193例miR-10b在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌表達情況,通過臨床資料將其193例石蠟標本分為淋巴結(jié)陰性124例和淋巴結(jié)陽性69例;用免疫組化進行檢測早期浸潤性導(dǎo)管癌中的雌激素受體、孕激素受體、人類表皮生長因子受體-2的表達量,對早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌進行分子分型。最后將篩選出miR-10b靶基因Notch1、NCOR2、HOXD10、NR4A3、CREB1、PPARA、PPARGCB,經(jīng)實時熒光定量PCR實驗驗證是否與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)。統(tǒng)計學(xué)方法采用Pearson卡方檢驗分析miR-10b表達與各臨床指標之間差異性;采用Kaplan-Meier法計算累計無瘤生存時間;應(yīng)用log-rank檢驗進行中位無瘤生存時間分析;采用cox進行多因素分析。采用配對t檢驗的方法比較早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的癌和癌旁組織中靶基因的表達。檢驗水準α=0.05。結(jié)果:在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中mir-10b表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和有無腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有統(tǒng)計差異(p≤0.05);mir-10b表達陰性中位無瘤生存時間較mir-10b表達陽性時間長,兩者具有統(tǒng)計差異(p≤0.05);淋巴結(jié)陰性時mir-10b陰性表達的中位無瘤生存時間較陽性表達長,兩者具有統(tǒng)計差異(p≤0.05);mir-10b及內(nèi)分泌治療情況為早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌獨立預(yù)后因素(p≤0.05),mir-10b陽性表達為危險因素(or1),內(nèi)分泌治療為保護因素(or1)。mir-10b表達在淋巴結(jié)陽性中位無瘤生存時間無統(tǒng)計差異(p0.05);與月經(jīng)狀態(tài),年齡,er-α、pr、her-2的表達無顯著性差異(p0.05)。第二部分:在早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達率在不同er-α表達之間具有差異性(p≤0.05);在her-2(-)時mir-10b陽性表達率明顯高于her-2(+),具有統(tǒng)計學(xué)差異(p≤0.05)。依據(jù)免疫組化及fish檢測結(jié)果中er-α、pr、her-2的表達水平進行分型符合納入為139例,在四種不同分子亞型中mir-10b陽性表達率存在差異,luminalb中mir-10b陽性表達率顯著低于其他各組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p≤0.05);當er-α(+)、pr(+)、her-2(-)時,早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中位無瘤生存時間長,提示預(yù)后好,但中位無瘤生存分析顯示,mir-10b陽性表達對er-α(+)、pr(+)、her-2(-)的早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中位無瘤生存時間無明顯影響,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p≤0.05);分子亞型中的中位無瘤生存時間顯示,luminala型中位無瘤生存時間最長,luminalb型和basal-like型居中,her-2過表達型中位無瘤生存時間最短,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p≤0.05);多因素分析分子亞型為早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后獨立影響因素(p≤0.05),mir-10b陽性表達是早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后的危險因素(or1),但此結(jié)果經(jīng)多因素分析無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。第三部分:通過靶基因預(yù)測軟件和文獻檢索篩選出mir-10b靶基因notch1、ncor2、hoxd10、nr4a3、creb1、ppara、ppargcb,經(jīng)實時熒光定量pcr實驗驗證,mir-10b實時熒光擴增曲線拐點清楚,各樣本曲線平行性好,擴增效率相近,基線平直;擴增產(chǎn)物的熔解曲線均顯示單峰,證明引物合理,無非特異性擴增。mir-10b靶基因中notch1、ncor2及hoxd10在癌組織中較癌旁組織低表達,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p≤0.05)。而nr4a3、creb1和ppara在癌組織中較癌旁組織均上調(diào),沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。然而ppargcb在癌組織中較癌旁組織上調(diào),具有統(tǒng)計學(xué)意義(p≤0.05)。結(jié)論:mir-10b表達水平與早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān),特別在淋巴結(jié)陰性的早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達促進其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,中位無瘤生存時間降低,mir-10b陽性表達可以作為早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)后因素,是早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的預(yù)后指標。早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達與er-α、her-2呈具有相關(guān)性,在分子亞型之間表達存在明顯差異,在Luminal B型中陽性表達率明顯低于其他各型。ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)的中位無瘤生存時間長,提示預(yù)后較好,但miR-10b陽性表達對ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后無明顯影響;分子亞型中Luminal A、B型中位無瘤生存時間長,HER-2過表達型和Basal-like型中位無瘤生存時間短,提示預(yù)后差。多因素分析分子亞型是早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后獨立因素。mi R-10b陽性表達負調(diào)控Notch1、NCOR2、HOXD10靶基因,導(dǎo)致早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。miR-10b將作為早期乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的預(yù)后參考指標。
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【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：2450199