【摘要】：目的:miR-10b作為miRNA成員之一具有與乳腺癌復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌作為乳腺腺癌類型之一具有同樣特性,miR-10b在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中可能起到主要作用。較高的穩(wěn)定性是miR-10b作為一個(gè)良好的生物標(biāo)志物的重要特征。經(jīng)過數(shù)年保存的福爾馬林固定石蠟包埋的標(biāo)本中仍然可以有效的提取和定量。原位雜交技術(shù)具有費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單、臨床上具有可推廣性,可以檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的mi R-10b表達(dá)量,還可在不經(jīng)分類和分離的情況下,比較不同細(xì)胞系中的miR-10b表達(dá)水平,本研采用原位雜交方法檢測(cè)miR-10b表達(dá)情況。研究miR-10b在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中表達(dá)差異及其與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理特征關(guān)系;miR-10b與早期浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的中位無瘤生存時(shí)間及其與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后之間的關(guān)系。對(duì)早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管組織行免疫組化檢測(cè)雌激素受體、孕激素受體、人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2后,根據(jù)第12屆St Gallen國(guó)際乳腺癌會(huì)議共識(shí)將早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌進(jìn)行分型,研究早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中mi R-10b與ER-a、PR、HER-2之間的關(guān)系,miR-10b與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的ER-a、PR、HER-2及分子亞型的中位無瘤生存時(shí)間及其與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后之間的關(guān)系。最后通過靶基因預(yù)測(cè)軟件及文獻(xiàn)報(bào)道篩選出miR-10b靶基因Notch基因1、核受體共阻遏物-2、HOXD10基因、核受體亞家族4組A3、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1、過氧化物酶體增殖物激活型受體a、過氧化物酶體增殖物激活型受體β,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-10b與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是否相關(guān)。為進(jìn)一步研究miR-10b基因在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中的作用奠定基礎(chǔ)。方法:首先采用原位分子雜交技術(shù)檢測(cè)193例miR-10b在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌表達(dá)情況,通過臨床資料將其193例石蠟標(biāo)本分為淋巴結(jié)陰性124例和淋巴結(jié)陽性69例;用免疫組化進(jìn)行檢測(cè)早期浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的雌激素受體、孕激素受體、人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2的表達(dá)量,對(duì)早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌進(jìn)行分子分型。最后將篩選出miR-10b靶基因Notch1、NCOR2、HOXD10、NR4A3、CREB1、PPARA、PPARGCB,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證是否與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Pearson卡方檢驗(yàn)分析miR-10b表達(dá)與各臨床指標(biāo)之間差異性;采用Kaplan-Meier法計(jì)算累計(jì)無瘤生存時(shí)間;應(yīng)用log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行中位無瘤生存時(shí)間分析;采用cox進(jìn)行多因素分析。采用配對(duì)t檢驗(yàn)的方法比較早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的癌和癌旁組織中靶基因的表達(dá)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中mir-10b表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和有無腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有統(tǒng)計(jì)差異(p≤0.05);mir-10b表達(dá)陰性中位無瘤生存時(shí)間較mir-10b表達(dá)陽性時(shí)間長(zhǎng),兩者具有統(tǒng)計(jì)差異(p≤0.05);淋巴結(jié)陰性時(shí)mir-10b陰性表達(dá)的中位無瘤生存時(shí)間較陽性表達(dá)長(zhǎng),兩者具有統(tǒng)計(jì)差異(p≤0.05);mir-10b及內(nèi)分泌治療情況為早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌獨(dú)立預(yù)后因素(p≤0.05),mir-10b陽性表達(dá)為危險(xiǎn)因素(or1),內(nèi)分泌治療為保護(hù)因素(or1)。mir-10b表達(dá)在淋巴結(jié)陽性中位無瘤生存時(shí)間無統(tǒng)計(jì)差異(p0.05);與月經(jīng)狀態(tài),年齡,er-α、pr、her-2的表達(dá)無顯著性差異(p0.05)。第二部分:在早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達(dá)率在不同er-α表達(dá)之間具有差異性(p≤0.05);在her-2(-)時(shí)mir-10b陽性表達(dá)率明顯高于her-2(+),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p≤0.05)。依據(jù)免疫組化及fish檢測(cè)結(jié)果中er-α、pr、her-2的表達(dá)水平進(jìn)行分型符合納入為139例,在四種不同分子亞型中mir-10b陽性表達(dá)率存在差異,luminalb中mir-10b陽性表達(dá)率顯著低于其他各組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05);當(dāng)er-α(+)、pr(+)、her-2(-)時(shí),早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中位無瘤生存時(shí)間長(zhǎng),提示預(yù)后好,但中位無瘤生存分析顯示,mir-10b陽性表達(dá)對(duì)er-α(+)、pr(+)、her-2(-)的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中位無瘤生存時(shí)間無明顯影響,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05);分子亞型中的中位無瘤生存時(shí)間顯示,luminala型中位無瘤生存時(shí)間最長(zhǎng),luminalb型和basal-like型居中,her-2過表達(dá)型中位無瘤生存時(shí)間最短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05);多因素分析分子亞型為早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后獨(dú)立影響因素(p≤0.05),mir-10b陽性表達(dá)是早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素(or1),但此結(jié)果經(jīng)多因素分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第三部分:通過靶基因預(yù)測(cè)軟件和文獻(xiàn)檢索篩選出mir-10b靶基因notch1、ncor2、hoxd10、nr4a3、creb1、ppara、ppargcb,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,mir-10b實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增曲線拐點(diǎn)清楚,各樣本曲線平行性好,擴(kuò)增效率相近,基線平直;擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線均顯示單峰,證明引物合理,無非特異性擴(kuò)增。mir-10b靶基因中notch1、ncor2及hoxd10在癌組織中較癌旁組織低表達(dá),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05)。而nr4a3、creb1和ppara在癌組織中較癌旁組織均上調(diào),沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。然而ppargcb在癌組織中較癌旁組織上調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05)。結(jié)論:mir-10b表達(dá)水平與早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān),特別在淋巴結(jié)陰性的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達(dá)促進(jìn)其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,中位無瘤生存時(shí)間降低,mir-10b陽性表達(dá)可以作為早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)后因素,是早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的預(yù)后指標(biāo)。早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中mir-10b陽性表達(dá)與er-α、her-2呈具有相關(guān)性,在分子亞型之間表達(dá)存在明顯差異,在Luminal B型中陽性表達(dá)率明顯低于其他各型。ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)的中位無瘤生存時(shí)間長(zhǎng),提示預(yù)后較好,但miR-10b陽性表達(dá)對(duì)ER-α(+)、PR(+)、HER-2(-)早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后無明顯影響;分子亞型中Luminal A、B型中位無瘤生存時(shí)間長(zhǎng),HER-2過表達(dá)型和Basal-like型中位無瘤生存時(shí)間短,提示預(yù)后差。多因素分析分子亞型是早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后獨(dú)立因素。mi R-10b陽性表達(dá)負(fù)調(diào)控Notch1、NCOR2、HOXD10靶基因,導(dǎo)致早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。miR-10b將作為早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的預(yù)后參考指標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2450199