【摘要】：研究背景食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,我國是食管癌的高發(fā)地區(qū),發(fā)病總數(shù)占全球食管癌46.6%,其發(fā)病率及死亡率為惡性腫瘤的第4位。早期中下段食管癌可通過手術(shù)切除,尚有治愈的機會,但食管癌沒有特異的臨床癥狀,大部分患者就診時已經(jīng)失去了手術(shù)機會。對于不可手術(shù)切除的局部晚期及上段食管癌患者,放射治療是其主要治療手段,但食管癌患者耐受性較差,單純放療/放化療的局部控制率上不滿意。分子靶向藥物為提高放療的敏感性帶來新的希望。表皮生長因子受體(EGFR)是腫瘤研究中最為深入的一個靶點,EGFR通路的異常激活能促進正常細胞的轉(zhuǎn)化和惡性腫瘤放射抗拒的產(chǎn)生。食管鱗癌組織中EGFR的陽性率達40～80%。尼妥珠單抗是以EGFR為靶點的人源化單克隆抗體,能和EGFR胞外結(jié)構(gòu)域Ⅲ區(qū)特異性結(jié)合,EGFR與配體的結(jié)合被阻斷,下游信號通路的轉(zhuǎn)導也隨之被阻斷,增強了腫瘤細胞放射敏感性,提高放療療效及抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移及局部復發(fā)。目前臨床上尼妥珠單抗已開始用于鼻咽癌的放射增敏治療,食管癌放療增敏作用也有相應(yīng)研究。但臨床上尚無合適的療效預測分子標志物。本研究將對尼妥珠單抗對食管細胞的放射敏感性進行研究,并探討尼妥珠單抗的放療增敏機制。實驗方法我們用MTT方法檢測尼妥珠單抗對各細胞株增殖的影響。我們用克隆形成實驗來檢測尼妥珠單抗的放療增敏作用。用50ug/ml,100 ug/ml 200ug/ml三種不同濃度的尼妥珠單抗作用KYSE410,KYSE30,KYSE520食管細胞24小時,再分別給予0、1、2、4、6、8Gy劑量照射。對照組細胞普通培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時,然后相同方法照射相同劑量。我們對尼妥珠單抗對食管癌細胞增敏作用的機制做了研究。用Western blot檢測KYSE410,KYSE30,KYSE520三種食管癌細胞的EGFR表達,及其磷酸化程度。我們進一步檢測PI3K/AKT信號通路上的關(guān)鍵蛋白AKT及Ras/Rad/MEK/MAPK信號通路上的關(guān)鍵蛋白MAPK。實驗結(jié)果MTT實驗說明不同濃度的尼妥珠單抗對KYSE30,KYSE410,KYSE520細胞的增殖抑制不明顯。克隆形成實驗的結(jié)果提示濃度為200ug/ml尼妥珠單抗對KYSE30細胞有放射增敏作用,而低濃度的尼妥珠單抗對KYSE30細胞放療增敏作用不顯著。尼妥珠單抗對KYSE410,KYSE520細胞無明顯放射增敏作用。研究發(fā)現(xiàn)KYSE30食管癌細胞EGFR高表達,磷酸化程度較高;KYSE410食管癌細胞EGFR高表達,磷酸化程度較低;KYSE520食管癌細胞EGFR低表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR高表達并且磷酸程度較高KYSE30細胞的AKT蛋白經(jīng)尼妥珠單抗處理后其磷酸化受到抑制,而EGFR磷酸化程度較低的KYSE410細胞和EGFR低表達KYSE520細胞AKT蛋白的表達及磷酸化均無明顯變化。三株細胞的Ras/Rad/MEK/MAPK信號通路上的MAPK蛋白在尼妥珠單抗處理前后的表達及磷酸化程度均無明顯改變。本研究的實驗結(jié)果提示尼妥珠單抗的放療增敏機制可能與PI3K/AKT信號通路的抑制有關(guān)。結(jié)論尼妥珠單抗對EGFR高表達且磷酸化程度較高的食管癌細胞有放療增敏作用,增敏作用存在量效關(guān)系,增敏機制可能與其抑制EGFR下游信號傳導通路PI3K/AKT 有關(guān)。
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【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1
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本文編號：2449523