【摘要】：研究背景食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,我國(guó)是食管癌的高發(fā)地區(qū),發(fā)病總數(shù)占全球食管癌46.6%,其發(fā)病率及死亡率為惡性腫瘤的第4位。早期中下段食管癌可通過(guò)手術(shù)切除,尚有治愈的機(jī)會(huì),但食管癌沒有特異的臨床癥狀,大部分患者就診時(shí)已經(jīng)失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。對(duì)于不可手術(shù)切除的局部晚期及上段食管癌患者,放射治療是其主要治療手段,但食管癌患者耐受性較差,單純放療/放化療的局部控制率上不滿意。分子靶向藥物為提高放療的敏感性帶來(lái)新的希望。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是腫瘤研究中最為深入的一個(gè)靶點(diǎn),EGFR通路的異常激活能促進(jìn)正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和惡性腫瘤放射抗拒的產(chǎn)生。食管鱗癌組織中EGFR的陽(yáng)性率達(dá)40～80%。尼妥珠單抗是以EGFR為靶點(diǎn)的人源化單克隆抗體,能和EGFR胞外結(jié)構(gòu)域Ⅲ區(qū)特異性結(jié)合,EGFR與配體的結(jié)合被阻斷,下游信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)也隨之被阻斷,增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞放射敏感性,提高放療療效及抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)。目前臨床上尼妥珠單抗已開始用于鼻咽癌的放射增敏治療,食管癌放療增敏作用也有相應(yīng)研究。但臨床上尚無(wú)合適的療效預(yù)測(cè)分子標(biāo)志物。本研究將對(duì)尼妥珠單抗對(duì)食管細(xì)胞的放射敏感性進(jìn)行研究,并探討尼妥珠單抗的放療增敏機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法我們用MTT方法檢測(cè)尼妥珠單抗對(duì)各細(xì)胞株增殖的影響。我們用克隆形成實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)尼妥珠單抗的放療增敏作用。用50ug/ml,100 ug/ml 200ug/ml三種不同濃度的尼妥珠單抗作用KYSE410,KYSE30,KYSE520食管細(xì)胞24小時(shí),再分別給予0、1、2、4、6、8Gy劑量照射。對(duì)照組細(xì)胞普通培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí),然后相同方法照射相同劑量。我們對(duì)尼妥珠單抗對(duì)食管癌細(xì)胞增敏作用的機(jī)制做了研究。用Western blot檢測(cè)KYSE410,KYSE30,KYSE520三種食管癌細(xì)胞的EGFR表達(dá),及其磷酸化程度。我們進(jìn)一步檢測(cè)PI3K/AKT信號(hào)通路上的關(guān)鍵蛋白AKT及Ras/Rad/MEK/MAPK信號(hào)通路上的關(guān)鍵蛋白MAPK。實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)說(shuō)明不同濃度的尼妥珠單抗對(duì)KYSE30,KYSE410,KYSE520細(xì)胞的增殖抑制不明顯。克隆形成實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示濃度為200ug/ml尼妥珠單抗對(duì)KYSE30細(xì)胞有放射增敏作用,而低濃度的尼妥珠單抗對(duì)KYSE30細(xì)胞放療增敏作用不顯著。尼妥珠單抗對(duì)KYSE410,KYSE520細(xì)胞無(wú)明顯放射增敏作用。研究發(fā)現(xiàn)KYSE30食管癌細(xì)胞EGFR高表達(dá),磷酸化程度較高;KYSE410食管癌細(xì)胞EGFR高表達(dá),磷酸化程度較低;KYSE520食管癌細(xì)胞EGFR低表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR高表達(dá)并且磷酸程度較高KYSE30細(xì)胞的AKT蛋白經(jīng)尼妥珠單抗處理后其磷酸化受到抑制,而EGFR磷酸化程度較低的KYSE410細(xì)胞和EGFR低表達(dá)KYSE520細(xì)胞AKT蛋白的表達(dá)及磷酸化均無(wú)明顯變化。三株細(xì)胞的Ras/Rad/MEK/MAPK信號(hào)通路上的MAPK蛋白在尼妥珠單抗處理前后的表達(dá)及磷酸化程度均無(wú)明顯改變。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示尼妥珠單抗的放療增敏機(jī)制可能與PI3K/AKT信號(hào)通路的抑制有關(guān)。結(jié)論尼妥珠單抗對(duì)EGFR高表達(dá)且磷酸化程度較高的食管癌細(xì)胞有放療增敏作用,增敏作用存在量效關(guān)系,增敏機(jī)制可能與其抑制EGFR下游信號(hào)傳導(dǎo)通路PI3K/AKT 有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.1
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本文編號(hào)：2449523