發(fā)布時(shí)間：2019-03-28 15:49

【摘要】：目的:本課題以生物相容性材料殼聚糖(Chitosan,CS)為基本骨架,合成具有長循環(huán)和腫瘤主動靶向效果的兩親性聚合物葉酸-殼聚糖-磺酸甜菜堿納米顆粒(FA-CS-g-PSBMA nanoparticles),并以其為載體,包裹疏水性小分子化療藥物依托泊苷(Etoposide,VP-16),在體內(nèi)外均發(fā)揮了較好的腫瘤靶向和治療效果。方法:1.在可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合(Reversible Addition-Fragmentation Chain Transfer Polymerization RAFT)和大劑量γ射線的照射下,通過自由基的聚合接枝磺酸甜菜堿(SBMA),合成CS-g-PSBMA。2.在N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基類化合物(NHS)的催化下,以酰胺基化反應(yīng)接枝葉酸(FA),合成FA-CS-g-PSBMA。3.通過紅外光譜FT-IR、1H NMR、動態(tài)光散射(DLS)和掃描電鏡(SEM)對聚合物的結(jié)構(gòu)和形態(tài)進(jìn)行表征。4.用正常人皮膚成纖維細(xì)胞(HDF)通過MTT實(shí)驗(yàn)對載體的生物相容性進(jìn)行了初步評價(jià)。5.制備載藥納米顆粒FA-CS(VP-16)-g-PSBMA,通過紫外-可見光分光光度計(jì)測出不同濃度藥物的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算載體的載藥量和藥物的包封率。并通過考察FA-CS(VP-16)-g-PSBMA的粒徑分布、zeta電位及納米顆粒形態(tài)結(jié)構(gòu)等對其質(zhì)量進(jìn)行評價(jià);用透析袋法觀察FA-CS(VP-16)-g-PSBMA在不同p H環(huán)境下藥物的體外釋放情況。6.以人宮頸癌細(xì)胞Hela為體外細(xì)胞模型,采用MTT法考察VP-16、FA-CS-g-PSBMA、CS(VP-16)-g-PSBMA和FA-CS(VP-16)-g-PSBMA的細(xì)胞毒性;分別通過共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞儀定性、定量地考察Hela細(xì)胞對異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的膠束FA-CS(VP-16)-g-PSBMA和CS(VP-16)-g-PSBMA的攝取情況;以流式細(xì)胞儀測量不同VP-16劑型對Hela細(xì)胞凋亡的影響。7.通過尾靜脈注射的方式,給SD大鼠注射一定量的菁染料Cy5.5標(biāo)記的CS(VP-16)-g-PSBMA和FA-CS(VP-16)-g-PSBMA,在固定時(shí)間點(diǎn)用多功能酶標(biāo)儀測得大鼠血漿的熒光強(qiáng)度,由藥物的一級代謝動力學(xué)公式計(jì)算出其在體內(nèi)的半衰期。8.建立皮下腫瘤模型,利用近紅外小動物成像系統(tǒng)(IVIS),分別考察Cy5.5標(biāo)記的CS(VP-16)-g-PSBMA和FA-CS(VP-16)-g-PSBMA在荷瘤小鼠體內(nèi)的分布,并且根據(jù)一定時(shí)間內(nèi)腫瘤體積和重量考察VP-16和FA-CS(VP-16)-g-PSBMA的體內(nèi)抗腫瘤活性。結(jié)果:1.FT-IR和1H NMR譜結(jié)果表明FA和SBMA均成功嫁接到殼聚糖表面,得到了FA-CS-g-PSBMA兩親性納米顆粒。DLS測得FA-CS-g-PSBMA在pH=7.4的PBS中粒徑大小為163.9±32nm,zeta電位為-6.7±2.31mv,FA-CS(VP-16)-g-PSBMA在pH=7.4的PBS中其粒徑大小為200.5±17nm,zeta電位為-5.36±1.8mv;SEM觀察到兩種納米顆粒均形態(tài)圓整,分布均一。2.通過紫外-可見光分光光度計(jì)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算了載體的載藥量為27.3%,藥物的包封率為90%。體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示,在溫度為37℃條件下,藥物VP-16在酸性環(huán)境(pH=6.0)中的累計(jì)釋放量比在弱堿性性環(huán)境(pH=7.4)中的累計(jì)釋放量要多。3.MTT試驗(yàn)結(jié)果表明CS(VP-16)-g-PSBMA和VP-16對Hela細(xì)胞具有相同的細(xì)胞毒性,但是FA-CS(VP-16)-g-PSBMA對Hela細(xì)胞的毒性更強(qiáng),且呈現(xiàn)劑量依賴性特點(diǎn),流式細(xì)胞儀測得的細(xì)胞凋亡結(jié)果與其相符;共聚焦和流式細(xì)胞儀的結(jié)果表明,FA-CS(VP-16)-g-PSBMA進(jìn)入細(xì)胞的量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CS(VP-16)-g-PSBMA,FA修飾使得膠束更容易被細(xì)胞攝取。4.體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)試驗(yàn)表明,葉酸修飾膠束之后,并沒有影響其在體內(nèi)的長循環(huán)效果,兩種膠束在體內(nèi)的有效半衰期都要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于單純的藥物VP-16。5.體內(nèi)靶向試驗(yàn)結(jié)果顯示了FA-CS(VP-16)-g-PSBMA和CS(VP-16)-g-PSBMA對于皮下腫瘤都具有較好的腫瘤靶向性,但是前者的靶向性要更好;體內(nèi)藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)相對于VP-16,FA-CS(VP-16)-g-PSBMA能夠更好地抑制荷瘤小鼠皮下腫瘤的生長。結(jié)論:成功合成了具有主動和被動雙重靶向效果的兩親性聚合物材料FA-CS-g-PSBMA,該聚合物材料制備的載VP-16納米顆粒具有良好的體內(nèi)外靶向性和抗腫瘤效果,在腫瘤靶向治療領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5

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本文編號：2449011