【摘要】：目的:構(gòu)建高效的siRNA納米載體靶向SGC-7901胃癌細(xì)胞,并下調(diào)胃癌表達(dá)的程序性死亡配體1(PD-L1)。方法:檢測(cè)葉酸(FA)-PEG-SS-PEI-SPION納米載體與siRNA復(fù)合后的粒徑、電位等表征;體外實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)siRNA的結(jié)合能力、復(fù)合物細(xì)胞毒性、細(xì)胞攝入能力及轉(zhuǎn)染效率;磁共振(MR)成像檢測(cè)示蹤能力;檢驗(yàn)胃癌細(xì)胞PD-L1下調(diào)效應(yīng)及共培養(yǎng)T細(xì)胞的細(xì)胞因子水平。結(jié)果:N/P比值為10時(shí),FA-PEG-SS-PEI-SPION完全復(fù)合siRNA,形成電位為(9.14±0.80)m V、粒徑為(116.7±2.5)nm的多聚復(fù)合物。靶向組的轉(zhuǎn)染率為(95.06±0.44)%,與非靶向組的(93.87±1.05)%相當(dāng);平均熒光強(qiáng)度為1 892.67±81.51,高于非靶向組的1 324.33±186.58(P0.05)。普魯士藍(lán)染色和激光共聚焦顯微鏡成像證實(shí)了復(fù)合物的細(xì)胞攝入。體外MR成像驗(yàn)證了聚合物的MR造影成像能力。靶向組PD-L1的mRNA最低相對(duì)表達(dá)量為9.07%±0.79%,Western blot顯示PD-L1的表達(dá)顯著降低。共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示IFN-γ和TNF-α的分泌水平增加,IL-10的分泌水平降低(P0.05)。結(jié)論:本研究構(gòu)建了FA-PEG-SS-PEI-SPION納米載體,并證明了其體外靶向細(xì)胞及載siRNA下調(diào)PD-L1表達(dá)的能力和MR示蹤的能力,是一種高效和安全的靶向治療納米載體。
[Abstract]:Aim: to construct an efficient siRNA nano-carrier targeting SGC-7901 gastric cancer cells and down-regulate the expression of programmed death ligand 1 (PD-L1) in gastric cancer. Methods: the size and potential of folic acid (FA)-PEG-SS-PEI-SPION nano-carrier combined with siRNA were measured, and the binding ability, cytotoxicity, uptake ability and transfection efficiency of siRNA were tested in vitro. The down-regulation of PD-L1 in gastric cancer cells and the cytokine level of co-cultured T cells were detected by magnetic resonance (MR) imaging. Results: when the N / P ratio was 10:00, the FA-PEG-SS-PEI-SPION-siRNA, complex formed a polymeric complex with a potential of (9.14 鹵0.80) m V,) and a particle size of (116.7 鹵2.5) nm. The transfection rate of targeting group was (95.06 鹵0.44)%, which was similar to that of non-targeting group (93.87 鹵1.05)%, and the average fluorescence intensity was 1 892.67 鹵81.51, which was higher than that of non-targeting group (1 324.33 鹵186.58, P0.05). Prussian blue staining and laser confocal microscope imaging confirmed the cellular uptake of the complex. In vitro MR imaging demonstrated the ability of MR imaging of polymers. The lowest relative expression of mRNA in PD-L1 of target group was 9.07% 鹵0.79%. Western blot showed that the expression of PD-L1 was significantly decreased. Co-culture experiment showed that the secretion of IFN- 緯 and TNF- 偽 increased and the secretion of IL-10 decreased (P0.05). Conclusion: in this study, the FA-PEG-SS-PEI-SPION nano-carrier was constructed, and its ability to target cells in vitro, down-regulate the expression of PD-L1 with siRNA and the ability of MR tracer were proved to be an efficient and safe nano-carrier for targeted therapy.
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院消化內(nèi)科;中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院急診科;中山大學(xué)腫瘤防治中心胸外科;
【基金】：廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.201704020121)
【分類號(hào)】：R735.2

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