【摘要】：目的非肌肉肌球蛋白重鏈-9(MYH9)對腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要的調(diào)控作用,文中旨在探討MYH9在骨肉瘤組織中的表達(dá)及對骨肉瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)和侵襲能力的影響。方法收集52例骨肉瘤癌組織及距腫瘤邊緣5cm處的癌旁組織,RT-PCR和免疫組化檢測骨肉瘤癌組織和癌旁組織中MYH9的mRNA和蛋白表達(dá)水平。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染U2-OS細(xì)胞MYH9 shRNA表達(dá)質(zhì)粒,沉默MYH9表達(dá),轉(zhuǎn)染后將細(xì)胞分成3組:以正常的U2-OS細(xì)胞為對照組、以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的U2-OS細(xì)胞為空載組和以轉(zhuǎn)染MYH9 shRNA的U2-OS細(xì)胞為干擾組。采用RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后U2-OS細(xì)胞MYH9的mRNA水平,Western blot檢測U2-OS細(xì)胞轉(zhuǎn)染后MYH9以及EMT相關(guān)蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平變化,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力變化。結(jié)果 RT-PCR檢測結(jié)果表明,癌旁組織中MYH9 mRNA的相對表達(dá)量(1.526±0.148)較癌組織(3.547±0.195)明顯減少(P0.05);免疫組化檢測結(jié)果表明,MYH9蛋白在腫瘤組織中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中,且MYH9蛋白在癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁組織,其陽性表達(dá)率分別為59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果表明,沉默MYH9基因表達(dá)后,干擾組MYH9 mRMA相對表達(dá)量和蛋白水平較對照組和空載組明顯降低(P0.05)。與對照組相比較,干擾組骨肉瘤細(xì)胞U2-OS中E-cadherin蛋白明顯上調(diào),Vimentin蛋白出現(xiàn)下調(diào)。Transwell實(shí)驗(yàn)表明,48 h后各組均有穿出微孔濾膜的細(xì)胞,干擾組穿出微孔濾膜的細(xì)胞[(41.2±15.1)個]較對照組[(117.3±12.4)個]和空載組[(193.5±14.7)個]明顯減少(P0.05)。結(jié)論 MYH9蛋白在骨肉瘤組織中表達(dá)顯著高于癌旁組織,沉默MYH9可以通過降低骨肉瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換來降低骨肉瘤的侵襲能力。
[Abstract]:Aim non-muscular myosin heavy chain-9 (MYH9) plays an important role in regulating the tumorigenesis and development of osteosarcoma. The aim of this study was to investigate the expression of MYH9 in osteosarcoma and its effect on epithelial mesenchymal transition (EMT) and invasion ability of osteosarcoma cells. Methods the mRNA and protein expression of MYH9 in 52 cases of osteosarcoma and 5cm adjacent to the margin of tumor were detected by RT-PCR and immunohistochemistry. The MYH9 shRNA expression plasmid of U2-OS cells was transfected with lipofectamine and the expression of MYH9 was silenced. After transfection, the cells were divided into three groups: normal U2-OS cells as control group; U2-OS cells transfected with empty plasmid were used as control group and U2-OS cells transfected with MYH9 shRNA as interference group. The mRNA level of MYH9 in U2-OS cells transfected with RT-PCR was detected by, Western blot. The protein levels of MYH9, EMT-associated proteins E-cadherin and Vimentin in U2-OS cells were detected by, Western blot, and the invasive ability of U2-OS cells was detected by Transwell invasion assay. Results the results of RT-PCR showed that the relative expression of MYH9 mRNA in paracancerous tissues (1.526 鹵0.148) was significantly lower than that in cancer tissues (3.547 鹵0.195) (P0.05). The results of immunohistochemistry showed that MYH9 protein was mainly expressed in cytoplasm of tumor tissue, and the expression of MYH9 protein in cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous tissue. The positive rate of MYH9 gene expression was 59.6% (31 / 52) and 26.9% (14 / 52), respectively (P0.05). The results of RT-PCR and Western blot showed that after silencing the expression of MYH9 gene, the positive expression rate was 59.6% (31 / 52) and 26.9% (14 / 52). The relative expression and protein level of MYH9 mRMA in interference group were significantly lower than those in control group and control group (P0.05). Compared with the control group, the E-cadherin protein was up-regulated and the Vimentin protein was down-regulated in the osteosarcoma cells of the interference group. Transwell test showed that after 48 hours, the cells in each group penetrated the microporous membrane. (41.2 鹵15.1) cells in the interference group [(41.2 鹵15.1) cells] were significantly lower than those in the control group [(117.3 鹵12.4) cells] and the control group [(193.5 鹵14.7) cells] (P0.05). Conclusion the expression of MYH9 protein in osteosarcoma is significantly higher than that in paracancerous tissue. Silencing MYH9 can decrease the invasion ability of osteosarcoma by reducing the epithelial interstitial transition of osteosarcoma cells.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院骨科;
【分類號】：R738.1

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本文編號：2444321