發(fā)布時間：2019-02-16 00:22

【摘要】：第一部分ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義目的:檢測ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平,并分析其與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。方法:應(yīng)用q RT-PCR方法檢測159對結(jié)直腸癌組織及癌旁組織的ZFAS1表達(dá)量,比較兩者ZFAS1表達(dá)量的差異,同時檢測了12例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)腫瘤及轉(zhuǎn)移灶組織ZFAS1的表達(dá)。卡方檢驗(yàn)分析ZFAS1表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性;采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線,Log-Rank方法比較ZFAS1高表達(dá)組和低表達(dá)組之間的生存率;采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析,以確定校正多因素作用后ZFAS1對預(yù)后的影響。結(jié)果:159例結(jié)直腸癌組織及其配對正常組織ZFAS1的表達(dá)檢測結(jié)果顯示,ZFAS1在結(jié)直腸癌中表達(dá)顯著上調(diào)(P0.0001),其中有76例患者的ZFAS1表達(dá)在結(jié)直腸癌組織中較正常上調(diào)2倍以上;且肝轉(zhuǎn)移組織中ZFAS1的表達(dá)量明顯高于原發(fā)部位(P0.05)。結(jié)直腸癌組織中ZFAS1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.045)及TNM分期(P=0.003)呈正相關(guān)。與低表達(dá)ZFAS1的患者相比,ZFAS1高表達(dá)的患者表現(xiàn)出更差的預(yù)后,其無瘤生存時間(P=0.012)及總生存時間均更短(P=0.003)。多因素分析顯示,ZFAS1是結(jié)直腸癌患者無瘤生存時間(HR=2.132,95%CI=1.015-4.546,P=0.048)與總生存時間(HR=1.878,95%CI=1.006-3.529,P=0.0492)的獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論:ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá),并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高的TNM分期相關(guān)。ZFAS1是結(jié)直腸癌患者腫瘤復(fù)發(fā)和死亡的獨(dú)立預(yù)后因素。第二部分ZFAS1對結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移與侵襲的影響目的:研究ZFAS1對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲的影響。方法:檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞株中ZFAS1的表達(dá),選擇兩株表達(dá)量較高的細(xì)胞系,應(yīng)用si RNA技術(shù)干擾ZFAS1的表達(dá);采用CCK-8方法研究ZFAS1基因沉默后結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的變化;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell侵襲小室方法研究ZFAS1基因沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建ZFAS1sh RNA慢病毒表達(dá)載體,包裝病毒后感染結(jié)直腸癌細(xì)胞,構(gòu)建ZFAS1穩(wěn)定敲降細(xì)胞株;采用裸鼠尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),研究ZFAS1基因沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果:ZFAS1基因沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖沒有明顯影響;沉默ZFAS1能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的體外遷移與侵襲能力及裸鼠肺轉(zhuǎn)移。結(jié)論:ZFAS1能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。第三部分ZFAS1影響結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的初步研究目的:初步研究ZFAS1影響結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。方法:應(yīng)用q RT-PCR法及Western blot法檢測在ZFAS1穩(wěn)定敲降的結(jié)直腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)基因的表達(dá);應(yīng)用si RNA技術(shù)干擾ZEB1的表達(dá),驗(yàn)證ZEB1與E-鈣粘素(E-cad)及波形蛋白(VIM)的關(guān)系;雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ZEB1是否是mi R-150-5p的靶基因;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell侵襲小室方法研究mi R-150-5p與ZEB1對結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲小室方法研究ZFAS1與mi R-150-5p的關(guān)系。結(jié)果:ZFAS1敲降后,結(jié)直腸癌細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cad表達(dá)顯著上升,而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志VIM和ZEB1表達(dá)顯著下降;ZEB1能夠調(diào)節(jié)E-cad及VIM的表達(dá);mi R-150-5p通過靶向作用于ZEB1抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移與侵襲;ZFAS1與mi R-150-5p結(jié)合,封閉了mi R-150-5p的抑癌作用。結(jié)論:ZFAS1與mi R-150-5p結(jié)合,封閉了mi R-150-5p對其靶基因ZEB1的抑制作用,引起ZEB1表達(dá)上調(diào),加速EMT的進(jìn)程,從而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:The expression of the first part of the ZFAS1 in the colorectal cancer tissue and its clinical significance are to detect the expression level of the ZFAS1 in the colorectal cancer tissue and to analyze its relationship with the clinicopathological parameters and the prognosis. Methods: The expression of ZFAS1 in the tissues of colorectal cancer and the paracancerous tissues was detected by q-RT-PCR. The difference of the expression of ZFAS1 was compared, and the expression of ZFAS1 in the primary and metastatic lesions of 12 patients with colorectal cancer was detected. The relationship between the expression level of the ZFAS1 and the clinical pathological parameters was analyzed by the card-side test, the survival curve was drawn by the Kaplan-Meier method, the survival rate between the high-expression group of the ZFAS1 and the low-expression group was compared by the Log-Rank method, and the multi-factor analysis was carried out using the Cox proportional risk model. To determine the effect of the ZFAS1 on the prognosis after multi-factor correction. Results: The expression of ZFAS1 in 159 patients with colorectal cancer and its paired normal tissues showed that the expression of ZFAS1 in colorectal cancer was up-regulated (P <0001), of which 76 patients had more than 2-fold higher expression of ZF1in colorectal cancer. The expression of ZFAS1 in the liver metastasis was significantly higher than that of the primary site (P0.05). The expression of ZFAS1 in colorectal cancer was positively correlated with lymph node metastasis (P = 0.045) and TNM stage (P = 0. 003). Compared with patients with low expression of ZFAS1, the patients with high expression of ZFAS1 showed a worse prognosis with no tumor survival time (P = 0.012) and shorter overall survival time (P = 0.003). The multi-factor analysis showed that ZFAS1 was an independent prognostic factor for non-tumor survival time in patients with colorectal cancer (HR = 2.132, 95% CI = 1.015-4.546, P = 0.048) and total survival time (HR = 1.878, 95% CI = 1.006-3.529, P = 0.0492). Conclusion: ZFAS1 is highly expressed in colorectal cancer and is associated with lymph node metastasis and high TNM stage. ZFAS1 is an independent prognostic factor for tumor recurrence and death in patients with colorectal cancer. The effect of the second part of ZFAS1 on the migration and invasion of colorectal cancer cells is to study the effects of ZFAS1 on the proliferation, migration and invasion of colorectal cancer cells. Methods: The expression of ZFAS1 in colorectal cancer cell line was detected, two cell lines with higher expression were selected, and the expression of ZFAS1 was disturbed by the technique of si RNA. The effect of ZF1gene silencing on the cell migration and invasion ability of colorectal cancer cells was studied by using the cell scratch test and the Transwell invasion cell method. The lentiviral expression vector of the ZFAS1sh RNA was constructed by the molecular cloning technique. The effect of ZFAS1 gene silencing on the in vivo transfer of colorectal cancer cells was studied by using the experiment of lung transfer in the tail vein of nude mice. Results: The silencing of ZFAS1 gene has no significant effect on the proliferation of colorectal cancer cells, and the silencing of ZFAS1 can inhibit the in vitro migration and invasion ability of colon cancer cells and the lung metastasis of nude mice. Conclusion: ZFAS1 can inhibit the migration, invasion and metastasis of colorectal cancer cells. The third part of the study on the effect of ZFAS1 on the transfer mechanism of colorectal cancer is to study the mechanism of the effect of ZFAS1 on the transfer of colorectal cancer cells. Methods: The expression of EMT-related gene in colorectal cancer cells stabilized by ZFAS1 was detected by the method of q-RT-PCR and Western blot. The expression of ZEB1 was disturbed by the technique of si-RNA, and the relationship between ZEB1 and E-cadherin (E-cad) and VIM was verified. The results showed that ZEB1 is the target gene of mi R-150-5p, and the effect of mi R-150-5p and ZEB1 on the cell migration and invasion ability of colorectal cancer is studied by using cell scratch test and Transwell's invasion cell method. The relationship between ZFAS1 and mi R-150-5p was studied by cell scratch test and Transwell's invasion cell method. Results: The expression of E-cad in the cells of colorectal cancer was significantly increased after the knock-down of the ZFAS1, and the expression of VIM and ZEB1 in the interstitial cell markers decreased significantly; the expression of E-cad and VIM was regulated by ZEB1; and the expression of mi R-150-5p in the inhibition of colorectal cancer cells was inhibited by targeting the ZEB1; and the ZFAS1 was combined with mi R-150-5p. The anti-cancer effect of mi R-150-5p was closed. Conclusion: The binding of ZFl to mi R-150-5p and the inhibition of the expression of ZEB1 by mi R-150-5p, and the up-regulation of the expression of ZEB1, accelerate the process of EMT and promote the metastasis of the tumor.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：2423849