【摘要】：第一部分長(zhǎng)鏈非編碼RNA BCYRN1在胃癌組織中的表達(dá)情況及生物學(xué)功能研究目的:檢測(cè)胃癌組織中l(wèi)ncRNABCYRN1表達(dá)情況,并分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;體外調(diào)控BCYRN1基因的表達(dá)水平,進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),尋找下游靶基因,探究BCYRN1在胃癌中發(fā)揮的生物學(xué)功能和調(diào)控機(jī)制。方法:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法(qRT-PCR)檢測(cè)lncRNA BCYRN1在56例胃癌患者癌組織及癌旁組織中的表達(dá)水平,收集患者臨床病理資料,分析BCYRN1表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。2.采用脂質(zhì)體2000將含BCYRN1的質(zhì)粒和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到BGC-823和SGC-7901細(xì)胞,將si-BCYRN1或si-NC轉(zhuǎn)染到AGS細(xì)胞中。采用qRT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;采用CCK-8、細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡,檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移、凋亡等情況的變化。3.用qRT-PCR檢測(cè)胃癌患者癌組織中EpCAM的表達(dá)水平,分析與BCYRN1表達(dá)之間的相關(guān)性;過(guò)表達(dá)或低表達(dá)BCYRN1后,檢測(cè)EpCAM的mRNA和蛋白質(zhì)的含量變化。結(jié)果:1.lncRNABCYRN1在胃癌癌組織中表達(dá)量高于癌旁組織(P0.0001),其表達(dá)水平與腫瘤的TNM分期有關(guān),與年齡、性別、腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等其他臨床病理參數(shù)無(wú)關(guān)。2.在BGC-823和SGC-7901中,轉(zhuǎn)染pcDNA-BCYRN1組比轉(zhuǎn)染empty vector組的BCYRN1表達(dá)量明顯升高(P均0.0001);在AGS細(xì)胞系中,轉(zhuǎn)染si-BCYRN1組比si-NC組的BCYRN1表達(dá)量顯著降低(P0.01);CCK-8結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)了 BCYRN1的細(xì)胞在檢測(cè)的48小時(shí)、72小時(shí)增殖速度明顯增加(P均0.05);在進(jìn)行低表達(dá)的細(xì)胞中,si-BCYRN1組其增殖速度在檢測(cè)的第48、72小時(shí)較對(duì)照組有明顯降低(P均0.05);過(guò)表達(dá)BCYRN1的細(xì)胞形成的克隆數(shù)多于陰性對(duì)照組(BGC-823細(xì)胞中P0.01,SGC-7901細(xì)胞中P0.05),低表達(dá)目的基因的AGS細(xì)胞形成的克隆數(shù)目少于陰性對(duì)照組(P0.01);過(guò)表達(dá)BCYRN1的細(xì)胞其細(xì)胞周期G1/G0期出現(xiàn)明顯的降低(BGC-823:P0.001,SGC-7901:P0.01),S 期和 G2/M 期顯著增加(BGC-823:P0.01,SGC-7901:P0.05),在 AGS 細(xì)胞中,BCYRN1的低表達(dá)引起了 G2/M期的顯著降低(P0.0001)和G1/G0期的增加(P0.01);高表達(dá)了 BCYRN1的細(xì)胞在經(jīng)歷了無(wú)血清處理后其早期凋亡的細(xì)胞少于對(duì)照組(BGC-823:P0.001,SGC-7901:P0.01),干擾 BCYRN1 表達(dá)后,早期凋亡的AGS細(xì)胞比對(duì)照組有所增加(P0.01);在Transwell實(shí)驗(yàn)中,高表達(dá)了BCYRN1的細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)高于陰性組(P均0.05);抑制BCYRN1表達(dá)穿膜細(xì)胞數(shù)低于陰性對(duì)照(P0.01)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.BCYRN1和EpCAM在胃癌癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.468,P0.01)。在上調(diào)了 BCYRN1的BGC-823及SGC-7901兩種細(xì)胞中EpCAM的mRNA表達(dá)水平均顯著增高,抑制BCYRN1表達(dá)的AGS細(xì)胞中EpCAM的mRNA明顯降低;western blot實(shí)驗(yàn)提示蛋白變化與mRNA的變化趨勢(shì)一致。結(jié)論:lncRNABCYRN1在胃癌中高表達(dá),有促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移,增強(qiáng)細(xì)胞耐缺血清環(huán)境的能力,同時(shí)可調(diào)節(jié)EpCAM的表達(dá),在胃癌中發(fā)揮癌基因的作用。第二部分血清長(zhǎng)鏈非編碼RNA BCYRN1的檢測(cè)及其對(duì)胃癌診斷和預(yù)后價(jià)值的評(píng)估目的:檢測(cè)胃癌患者血清中長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)BCYRN1表達(dá)水平,分析其與患者臨床特征的關(guān)系,探討其在胃癌診斷中的價(jià)值。方法:1.采用病例對(duì)照研究方法。采用qRT-PCR對(duì)2014年11月至2015年7月山東大學(xué)齊魯醫(yī)院收治的124例胃癌患者、41例萎縮型胃炎患者、59名健康體檢者血清中的lncRNABCYRN1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。2.采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)血清中癌胚抗原(CEA)、糖類(lèi)抗原72-4(CA72-4)。3.對(duì)31例成功接受胃癌根治術(shù)的患者手術(shù)前及術(shù)后3、7、10、30、100 d血清lncRNABCYRN1水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。4.應(yīng)用ROC曲線(xiàn)分析lncRNABCYRN1、CEA及CA72-4診斷胃癌的敏感度和特異度。兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn),多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。結(jié)果:1.胃癌患者血清BCYRN1表達(dá)水平Ⅰ + Ⅱ期組[1.041(0.794,1.462)]及Ⅲ + Ⅳ期組[1.290(0.978,1.794)]較癌前病變組[0.969(0.699,1.219)]、健康對(duì)照組[0.801(0.556,1.599)]有明顯升高(H=54.68,P0.0001)。2.與術(shù)前[1.120(0.859,1.663)]相比,胃癌患者血清lncRNA BCYRN1表達(dá)水平在術(shù)后 10 d[0.903(0.724,1.182)](U=55.0,P0.0001)、30 d[0.759(0.671,1.037)](U=299.0,P=0.0261)、100 d[0.478(0.378,0.635)](U=41.0,P0.0001)均有顯著降低。3.血清lncRNA BCYRN1診斷胃癌的曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.865,高于CA72-4(AUC=0.699)及 CEA(AUC=0.807)。三者聯(lián)合檢測(cè) AUC 為 0.934。結(jié)論:胃癌患者血清中l(wèi)ncRNA BCYRN1表達(dá)水平明顯升高,lncRNA BCYRN1有望作為胃癌診斷及療效監(jiān)測(cè)的潛在生物標(biāo)志物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2422424