【摘要】：第一部分長鏈非編碼RNA BCYRN1在胃癌組織中的表達情況及生物學功能研究目的:檢測胃癌組織中l(wèi)ncRNABCYRN1表達情況,并分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;體外調(diào)控BCYRN1基因的表達水平,進行相關(guān)細胞功能實驗,尋找下游靶基因,探究BCYRN1在胃癌中發(fā)揮的生物學功能和調(diào)控機制。方法:1.采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法(qRT-PCR)檢測lncRNA BCYRN1在56例胃癌患者癌組織及癌旁組織中的表達水平,收集患者臨床病理資料,分析BCYRN1表達水平與患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。2.采用脂質(zhì)體2000將含BCYRN1的質(zhì)粒和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到BGC-823和SGC-7901細胞,將si-BCYRN1或si-NC轉(zhuǎn)染到AGS細胞中。采用qRT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染效率;采用CCK-8、細胞平板克隆形成實驗、transwell實驗以及流式細胞術(shù)檢測細胞周期和凋亡,檢測細胞增殖、遷移、凋亡等情況的變化。3.用qRT-PCR檢測胃癌患者癌組織中EpCAM的表達水平,分析與BCYRN1表達之間的相關(guān)性;過表達或低表達BCYRN1后,檢測EpCAM的mRNA和蛋白質(zhì)的含量變化。結(jié)果:1.lncRNABCYRN1在胃癌癌組織中表達量高于癌旁組織(P0.0001),其表達水平與腫瘤的TNM分期有關(guān),與年齡、性別、腫瘤大小、遠處轉(zhuǎn)移等其他臨床病理參數(shù)無關(guān)。2.在BGC-823和SGC-7901中,轉(zhuǎn)染pcDNA-BCYRN1組比轉(zhuǎn)染empty vector組的BCYRN1表達量明顯升高(P均0.0001);在AGS細胞系中,轉(zhuǎn)染si-BCYRN1組比si-NC組的BCYRN1表達量顯著降低(P0.01);CCK-8結(jié)果顯示,與陰性對照組相比,過表達了 BCYRN1的細胞在檢測的48小時、72小時增殖速度明顯增加(P均0.05);在進行低表達的細胞中,si-BCYRN1組其增殖速度在檢測的第48、72小時較對照組有明顯降低(P均0.05);過表達BCYRN1的細胞形成的克隆數(shù)多于陰性對照組(BGC-823細胞中P0.01,SGC-7901細胞中P0.05),低表達目的基因的AGS細胞形成的克隆數(shù)目少于陰性對照組(P0.01);過表達BCYRN1的細胞其細胞周期G1/G0期出現(xiàn)明顯的降低(BGC-823:P0.001,SGC-7901:P0.01),S 期和 G2/M 期顯著增加(BGC-823:P0.01,SGC-7901:P0.05),在 AGS 細胞中,BCYRN1的低表達引起了 G2/M期的顯著降低(P0.0001)和G1/G0期的增加(P0.01);高表達了 BCYRN1的細胞在經(jīng)歷了無血清處理后其早期凋亡的細胞少于對照組(BGC-823:P0.001,SGC-7901:P0.01),干擾 BCYRN1 表達后,早期凋亡的AGS細胞比對照組有所增加(P0.01);在Transwell實驗中,高表達了BCYRN1的細胞穿膜細胞數(shù)高于陰性組(P均0.05);抑制BCYRN1表達穿膜細胞數(shù)低于陰性對照(P0.01)。差異均有統(tǒng)計學意義。3.BCYRN1和EpCAM在胃癌癌組織中的表達呈正相關(guān)(r=0.468,P0.01)。在上調(diào)了 BCYRN1的BGC-823及SGC-7901兩種細胞中EpCAM的mRNA表達水平均顯著增高,抑制BCYRN1表達的AGS細胞中EpCAM的mRNA明顯降低;western blot實驗提示蛋白變化與mRNA的變化趨勢一致。結(jié)論:lncRNABCYRN1在胃癌中高表達,有促進細胞增殖、遷移,增強細胞耐缺血清環(huán)境的能力,同時可調(diào)節(jié)EpCAM的表達,在胃癌中發(fā)揮癌基因的作用。第二部分血清長鏈非編碼RNA BCYRN1的檢測及其對胃癌診斷和預(yù)后價值的評估目的:檢測胃癌患者血清中長鏈非編碼RNA(lncRNA)BCYRN1表達水平,分析其與患者臨床特征的關(guān)系,探討其在胃癌診斷中的價值。方法:1.采用病例對照研究方法。采用qRT-PCR對2014年11月至2015年7月山東大學齊魯醫(yī)院收治的124例胃癌患者、41例萎縮型胃炎患者、59名健康體檢者血清中的lncRNABCYRN1的表達水平進行檢測。2.采用電化學發(fā)光免疫分析法檢測血清中癌胚抗原(CEA)、糖類抗原72-4(CA72-4)。3.對31例成功接受胃癌根治術(shù)的患者手術(shù)前及術(shù)后3、7、10、30、100 d血清lncRNABCYRN1水平進行動態(tài)監(jiān)測。4.應(yīng)用ROC曲線分析lncRNABCYRN1、CEA及CA72-4診斷胃癌的敏感度和特異度。兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗,多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗。結(jié)果:1.胃癌患者血清BCYRN1表達水平Ⅰ + Ⅱ期組[1.041(0.794,1.462)]及Ⅲ + Ⅳ期組[1.290(0.978,1.794)]較癌前病變組[0.969(0.699,1.219)]、健康對照組[0.801(0.556,1.599)]有明顯升高(H=54.68,P0.0001)。2.與術(shù)前[1.120(0.859,1.663)]相比,胃癌患者血清lncRNA BCYRN1表達水平在術(shù)后 10 d[0.903(0.724,1.182)](U=55.0,P0.0001)、30 d[0.759(0.671,1.037)](U=299.0,P=0.0261)、100 d[0.478(0.378,0.635)](U=41.0,P0.0001)均有顯著降低。3.血清lncRNA BCYRN1診斷胃癌的曲線下面積(AUC)為0.865,高于CA72-4(AUC=0.699)及 CEA(AUC=0.807)。三者聯(lián)合檢測 AUC 為 0.934。結(jié)論:胃癌患者血清中l(wèi)ncRNA BCYRN1表達水平明顯升高,lncRNA BCYRN1有望作為胃癌診斷及療效監(jiān)測的潛在生物標志物。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

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