【摘要】：背景胃癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率排名第三的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展與信號(hào)通路的失調(diào)密切相關(guān)。Hippo-Yap信號(hào)通路與消化系統(tǒng)的器官發(fā)育、組織修復(fù)有關(guān),而且對(duì)胃癌細(xì)胞的生存、轉(zhuǎn)移等具有抑制作用,其效應(yīng)元件Yap是治療胃癌的重要靶點(diǎn)。Fat4是Fat鈣黏蛋白家族成員,作為一種單跨膜蛋白受體,與哺乳動(dòng)物的細(xì)胞分化、組織發(fā)育有關(guān)。Fat4可以作為Hippo-Yap通路的上游信號(hào)分子轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào),其低表達(dá)會(huì)造成哺乳動(dòng)物腎臟、神經(jīng)管以及內(nèi)耳等的發(fā)育缺陷。有研究發(fā)現(xiàn),Fat4還能夠作為腫瘤抑制因子抑制胃癌細(xì)胞的增殖與遷移,但是Fat4在許多腫瘤包括胃癌中都存在基因突變導(dǎo)致的蛋白缺失。因此Fat4的缺失有可能與胃癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移能力的改變以及胃癌患者預(yù)后有關(guān),并且可能與其參與Hippo-Yap信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān),但是其相關(guān)性及發(fā)生機(jī)制尚未闡明。目的研究Fat4的低表達(dá)與胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、耐藥性等生物學(xué)行為的相關(guān)性;探討Fat4的表達(dá)異常對(duì)胃癌細(xì)胞中Hippo-Yap信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制;明確Fat4的表達(dá)與胃癌組織的臨床病理學(xué)特征及患者預(yù)后之間的相關(guān)性。方法1.1)通過(guò)基因干擾技術(shù)(Fat4-shRNA)敲低Fat4在胃癌細(xì)胞中的表達(dá),應(yīng)用Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Fat4低表達(dá)對(duì)Yap、p-Yap、LATS、p-LATS、CyclinD1及c-Myc蛋白表達(dá)的影響;2)采用MTT、平板克隆及裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Fat4敲低對(duì)胃癌細(xì)胞增值能力的影響;3)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析Fat4敲低對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響：4)采用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察Fat4敲低對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響。2.1)通過(guò)Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Fat4敲低的胃癌細(xì)胞(shFat4細(xì)胞)的胞漿蛋白與胞核蛋白中的Yap、p-Yap,β-catenin的蛋白表達(dá)水平,以及Yap敲低的胃癌細(xì)胞(shYap細(xì)胞)中胞漿p-Yap與β-catenin蛋白的表達(dá)水平;2)通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Fat4敲低及Yap敲低的胃癌細(xì)胞中Fat4、Yap、 P-catenin的mRNA相對(duì)表達(dá)水平;3)將Fat4全長(zhǎng)基因克隆至胃癌細(xì)胞使其過(guò)表達(dá)(Fat4細(xì)胞),或克隆至Fat4細(xì)胞(shFat4+Fat4細(xì)胞)或shCtrl細(xì)胞(shCtrl+Fat4細(xì)胞)中,并通過(guò)Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Fat4、p-Yap Yap CyclinD1及MMP-7的蛋白表達(dá);同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析上述胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期;4)通過(guò)MTT法檢測(cè)Fat4敲低的胃癌細(xì)胞在接受5-FU、順鉑、奧沙利鉑和紫杉醇處理后的存活率。3.1)收集122例接受過(guò)胃癌D2根治術(shù)治療的患者的蠟塊組織及臨床病理資料：2)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Fat4和Yap蛋白在122例胃癌組織及85例正常胃黏膜組織的表達(dá)情況;3)通過(guò)Pearson X2檢驗(yàn)探討Fat4表達(dá)量與胃癌臨床病理特征之間的相關(guān)性;4)采用Kaplan-Meier法及Cox回歸風(fēng)險(xiǎn)比例模型分析研究Fat4的表達(dá)量與胃癌患者累積生存率的相關(guān)性。結(jié)果1.1) shFat4細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組胃癌細(xì)胞(shCtrl細(xì)胞),其Fat4蛋白表達(dá)水平顯著降低,同時(shí)p-Yap及p-LATS的蛋白表達(dá)也降低,但是Yap及LATS的蛋白表達(dá)沒(méi)有改變;2) p-Yap與Yap蛋白水平的比值(p-Yap/Yap)和p-LATS與LATS蛋白水平的比值(p-LATS/LATS)在shFat4胃癌細(xì)胞中顯著低于shCtrl細(xì)胞：3) shFat4細(xì)胞的細(xì)胞相對(duì)于shCtrl細(xì)胞,其細(xì)胞活性升高(P0.05),克隆形成數(shù)目增加(P0.05),裸鼠皮下瘤的體積增大、生長(zhǎng)速度增快(P0.05)：4) shFat4細(xì)胞的細(xì)胞相對(duì)于shCtrl細(xì)胞,其在G1期的比例下降(50.69% vs.30%,P0.05),在G2/M期的比例升高(49.31% vs.70%,P0.05),而且細(xì)胞周期蛋白CyclinDl及c-Myc的蛋白表達(dá)顯著增加;5) Transwell小室中Fat4敲低的胃癌細(xì)胞吸光度值高于shCtrl細(xì)胞(1.57 vs.0.65,P0.05); Fat4敲低的胃癌細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組胃癌細(xì)胞,其遷移相關(guān)蛋白MMP-7、Cyr61增加而E-cadherin降低。2.1)Fat4敲低的胃癌細(xì)胞相對(duì)于shCtrl細(xì)胞中,胞漿p-Yap蛋白水平降低,胞核Yap蛋白水平升高,但是胞漿Yap蛋白水平不變;2)相對(duì)于shCtrl細(xì)胞,shFat4細(xì)胞或shYap細(xì)胞的胞漿蛋白中的p-Yap表達(dá)水平降低但P-catenin表達(dá)水平升高;shFat4細(xì)胞或shYap細(xì)胞中的P-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組沒(méi)有差異;3) shFat4細(xì)胞相對(duì)于shCtrl細(xì)胞,其Fat4、p-Yap蛋白表達(dá)降低,CyclinD1及MMP-7蛋白表達(dá)升高,但是全長(zhǎng)Fat4過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染使上述蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)逆轉(zhuǎn);shFat4細(xì)胞相對(duì)于shCtrl細(xì)胞,其S/G2/M期的胃癌細(xì)胞比例增加,但是可以被全長(zhǎng)Fat4過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染所逆轉(zhuǎn)。4)胃癌細(xì)胞接受5-FU、順鉑、奧沙利鉑和紫杉醇處理后,shFat4細(xì)胞的細(xì)胞生存率高于shCtrl細(xì)胞。3.1)胃癌組織中Fat4蛋白的陰性染色顯著高于鄰近非胃癌組織(69% vs.33%,P0.05); Fat4在胃癌組織的陽(yáng)性表達(dá)與胞核Yap的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(x2=24.0484,P=0.0000);2)Fat4的陰性染色與胃癌的淋巴管侵犯(P=0.0011)、腫瘤浸潤(rùn)深度(P=0.00166)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.0007)呈正相關(guān)：3)Fat4的陰性染色與胃癌患者的累積生存率呈負(fù)相關(guān)(P=0.004)。結(jié)論1.Fat4蛋白低表達(dá)會(huì)導(dǎo)致胃癌細(xì)胞內(nèi)p-Yap蛋白減少,并使胃癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程加快,以及遷移能力增強(qiáng);2.Fat4蛋白低表達(dá)通過(guò)促進(jìn)Yap及β-catenin蛋白的核轉(zhuǎn)位增加而發(fā)揮增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移及化療耐藥的能力。3.Fat4蛋白低表達(dá)與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移正相關(guān),與胃癌患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于成功,李敏,莫?jiǎng)χ?蕭樹東;胃癌細(xì)胞垂體腺苷環(huán)化酶激活肽相關(guān)受體分析[J];胃腸病學(xué);2000年02期

2 薛英威,耿敬姝,劉曉民,劉立人,高小敏,陳國(guó)林,張豈凡,趙家宏;胃癌細(xì)胞的流式分析及臨床意義[J];腫瘤防治研究;2000年03期

3 陳堅(jiān),林庚金,錢立平,程建,施冬云,張亞?wèn)|,劉珊林;內(nèi)源性活性氧水平及錳型超氧化物歧化酶的表達(dá)與胃癌細(xì)胞分化、增殖相關(guān)[J];生物物理學(xué)報(bào);2003年02期

4 李瑩,藥立波,韓炯,王立峰,韓月恒,劉新平,林樹新,俞強(qiáng);胃癌細(xì)胞抗脫落凋亡的分子機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

5 羅和生,王維,包鵬輝,張翼;核因子-κB活性增強(qiáng)參與胃癌細(xì)胞長(zhǎng)春新堿耐藥[J];中華消化雜志;2004年08期

6 劉冀紅,曹偉新,紀(jì)玉寶,張軼,劉炳亞,朱正綱,燕敏,林言箴;右旋甲硫氨酸對(duì)胃癌細(xì)胞作用初探[J];腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);2005年01期

7 齊元玲;于皆平;劉啟勝;鄧全軍;曹俊;于紅剛;;抑癌基因PTEN在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年03期

8 何必立;呂賓;徐毅;苗青;范一宏;;溫郁金對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用及其對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2006年09期

9 郭強(qiáng);李榮;李慶芳;夏紹友;杜曉輝;王立生;;高表達(dá)鞘氨醇激酶對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年12期

10 陳先來(lái);肖曉旦;楊榮;劉建平;;基于誤差反向傳播神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的胃癌細(xì)胞識(shí)別研究[J];中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 韓霜;雷婷;韓者藝;劉杰;郭雪艷;丁睿;吳開春;丁杰;樊代明;;分化抑制因子1對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

2 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對(duì)胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對(duì)胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

4 李娜;郭瑞芳;李文梅;邵建敏;汪浩;趙康;李書婷;王敬強(qiáng);王融;徐寧志;劉斯奇;呂有勇;;大蒜素處理在胃癌細(xì)胞中引發(fā)的蛋白質(zhì)表達(dá)響應(yīng)[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

5 ;多西紫杉醇對(duì)胃癌細(xì)胞作用及其機(jī)制的研究[A];第四屆中國(guó)腫瘤大會(huì)中國(guó)藥理學(xué)會(huì)腫瘤藥理專業(yè)委員會(huì)分會(huì)場(chǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

6 樓儷泓;;15-羥基前列腺素脫氫酶對(duì)胃癌細(xì)胞周期影響的試驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

7 朗瑋;;中藥方劑1號(hào)對(duì)胃癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)及細(xì)胞粘附分子的影響[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化專業(yè)第八次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

8 鞏龍靜;馬君;周涵婧;鄭榮兒;;胃癌細(xì)胞的表面增強(qiáng)拉曼光譜研究[A];中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2011年

9 謝少茹;沈洪;趙崧;張國(guó)新;郝波;劉增巍;施瑞華;;黃芪多糖對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十九次全國(guó)脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2007年

10 劉文超;任軍;張學(xué)庸;劉智廣;張曉楠;;防御素對(duì)胃癌細(xì)胞殺傷的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前8條

1 記者 陸葉清;發(fā)現(xiàn)抑制胃癌細(xì)胞的重要基因[N];上�？萍紙�(bào);2010年

2 衣曉峰　喬蕤琳 記者 趙宇清;抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)研究有新發(fā)現(xiàn)[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2010年

3 記者 衣曉峰　通訊員 喬蕤琳;維生素E衍生物能抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)[N];健康報(bào);2010年

4 王振嶺;我國(guó)抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)研究有重要發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

5 王振嶺;抗癌藥抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)研究獲重要發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

6 王振嶺;7種抗癌藥體外抑制胃癌細(xì)胞的研究有新發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

7 張中橋;胃癌細(xì)胞MDR機(jī)制研究取得新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

8 吳一福 蘇玉軍;白藜蘆醇可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞脫落凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李雙玲;IGF-1通過(guò)抑制Fox01核保留促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 胡偉國(guó);腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中Thy-1激活誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 周韻斕;應(yīng)激條件下胃癌細(xì)胞高表達(dá)線粒體活性氧和前梯度蛋白2促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 徐同鵬;SP1誘導(dǎo)的長(zhǎng)非編碼RNA TINCR通過(guò)調(diào)控KLF2 mRNA穩(wěn)定性影響胃癌細(xì)胞的增殖與凋亡[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王暢;miR-34a通過(guò)miR-34a-c-myc/Bmi-1負(fù)反饋通路負(fù)調(diào)控胃癌干細(xì)胞樣特性[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 羅貫虹;MGr1-Ag/37LRP參與PrP~C介導(dǎo)的胃癌細(xì)胞多藥耐藥[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

7 默董亮;人類解旋酶RecQL4調(diào)控胃癌細(xì)胞耐藥性分子機(jī)制研究[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2016年

8 劉皎婧;PI3K/Akt/GSK3β/p190ARhoGAP/RhoA信號(hào)通路在Wnt5a誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞遷移中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

9 Muhammad Kamran（卡姆拉）;[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王瑛;PKGⅡ?qū)PA誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞徖移及RhoA和Rac1激活的影響[D];江蘇大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林光錟;CyclinA/CDK2介導(dǎo)BAG3 Ser291位點(diǎn)的磷酸化并影響胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 蔡洙哲;p12-LOX對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-28的增殖和遷移的影響[D];延邊大學(xué);2015年

3 李龍;Her-2高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2015年

4 趙婷婷;GPIbα對(duì)胃癌細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制的初步探討[D];蘭州大學(xué);2015年

5 謝瑞霞;盤狀結(jié)構(gòu)域受體1調(diào)控上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響胃癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 王東倉(cāng);NM23-H2通過(guò)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞的侵襲遷移[D];蘭州大學(xué);2015年

7 朱瑞雪;NDRG2基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性表型的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

8 董凱楠;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 單爭(zhēng)爭(zhēng);二甲雙胍在IL-6誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

10 田莉;NM23-H2通過(guò)誘導(dǎo)自噬抑制胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生[D];蘭州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2421472