【摘要】：目的抗HER2靶向藥物如曲妥珠單抗、拉帕替尼、帕妥珠單抗等聯(lián)合化學(xué)治療極大改善了HER2陽(yáng)性乳腺癌患者的預(yù)后和生存。但是即便同為HER2陽(yáng)性,不同乳腺癌患者對(duì)抗HER2治療的敏感性卻不盡相同,而且治療后的耐藥現(xiàn)象難以避免。因而,尋找一種能夠準(zhǔn)確、便捷的藥物療效預(yù)測(cè)方法,是克服耐藥現(xiàn)象這一腫瘤治療難題需要首先解決的問(wèn)題,這不僅能夠提高患者預(yù)后還能節(jié)約醫(yī)療資源。目前認(rèn)為基因組突變是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因,因而基因檢測(cè)被認(rèn)為是最佳的療效預(yù)測(cè)手段。為了克服腫瘤組織學(xué)檢測(cè)的時(shí)空異質(zhì)性,我們應(yīng)用更為特異、相對(duì)無(wú)創(chuàng)、實(shí)時(shí)反映腫瘤基因組信息的循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA,ct DNA)檢測(cè)技術(shù),探究其在HER2陽(yáng)性復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌靶向治療療效相關(guān)生物標(biāo)志物篩選中的應(yīng)用價(jià)值。方法2014年3月6日至2014年12月10日,入組就診于我院乳腺腫瘤科,擬接受或接受抗HER2治療的晚期乳腺癌患者20例,采用二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)患者血漿循環(huán)游離DNA(circulating-free DNA,cf DNA)在50個(gè)腫瘤原癌和抑癌基因熱點(diǎn)區(qū)域上的突變情況,篩選出腫瘤相關(guān)基因的體細(xì)胞突變。共檢測(cè)了24例血液樣本,其中有8例血樣采集自患者一線抗HER2治療(即含曲妥珠單抗的聯(lián)合治療)療前且后期隨訪證實(shí)在該線治療中獲益(療效為CR、PR或SD超過(guò)6個(gè)月),故將這8例定義為抗HER2治療敏感組;16例樣本采集自患者至少一次抗HER2靶向治療進(jìn)展后,故定義為抗HER2治療耐藥組。采集24例血液樣本中耐藥組有4例患者在治療中采集了2次血樣,其采集時(shí)間點(diǎn)分別為二線抗HER2藥物拉帕替尼治療前和進(jìn)展后。收集患者臨床資料,將臨床資料與腫瘤相關(guān)基因突變情況進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果1、共入組20例女性患者,中位確診年齡45歲(27-71歲)。24例血樣,15例激素受體陽(yáng)性(62.5%),9例激素受體陰性(37.5%)。24例樣本采集后均接受抗HER2靶向治療,其中15例接受曲妥珠單抗聯(lián)合治療,7例接受拉帕替尼的聯(lián)合治療,另2例分別接受曲妥珠單抗聯(lián)合拉帕替尼的雙靶向治療和T-DM1的靶向治療。2、24例血細(xì)胞和血漿DNA樣本在50個(gè)基因的目標(biāo)區(qū)域檢測(cè)覆蓋度為100%。血細(xì)胞DNA平均測(cè)序深度為1870×(1340~2640×),血漿DNA平均測(cè)序深度為10800×(4910~12860×)。24例樣本血漿DNA樣本文庫(kù)的中位濃度為14.95ng/μL(3.45~45.44 ng/μL),血細(xì)胞DNA樣本文庫(kù)的中位濃度為2.22 ng/μL(0.59~6.53ng/μL)。3、24個(gè)樣本中共檢測(cè)到46個(gè)腫瘤相關(guān)基因上的486個(gè)非同義單核苷酸變異,未檢測(cè)到GNA11,CSF1R,ALK和NPM1四個(gè)基因上的單核苷酸變異(single nucleotide variants,SNV),其中26個(gè)基因的SNV個(gè)數(shù)少于10,這26個(gè)基因分別為FGFR1,GNAQ,RB1,ABL1,BRAF,FGFR3,GNAS,HRAS,FLT3,AKT,RET,CDH1,CDKN2A,ERBB2,EZH2,IDH1,IDH2,MET,MLH1,NRAS,CTNNB1,JAK2,NOTCH1,PEPN11,JAK2和MPL。4、所有樣本至少能夠檢測(cè)到1個(gè)SNV(中位20個(gè),1~51個(gè)),平均突變頻率(mutation allele frequency,MAF)為3.9%(2~31.66%)。本研究24例樣本在50個(gè)腫瘤相關(guān)基因的熱點(diǎn)區(qū)域的突變率由100%至0%不等,其中PIK3CA、KIT、TP53三個(gè)基因?yàn)楸狙芯繕颖局型蛔兟首罡叩娜齻�(gè)基因,24例HER2陽(yáng)性晚期乳腺癌患者cf DNA在50個(gè)基因上的突變率具有顯著的基因組差異,反映出“長(zhǎng)尾效應(yīng)”的現(xiàn)象。5、通過(guò)對(duì)比,發(fā)現(xiàn)7個(gè)耐藥組特有的突變基因,這些基因在敏感組均未檢測(cè)到突變。該7個(gè)耐藥組特有突變基因分別為EGFR,GNAS,HRAS,MLH1,CDH1,NRAS和NOTCH1。這些突變包括:11個(gè)分別在7號(hào)外顯子、18號(hào)外顯子、19號(hào)和21號(hào)外顯子上的EGFR突變;7個(gè)分別在7號(hào)外顯子和8號(hào)外顯子上的GNAS突變;7個(gè)發(fā)生在2號(hào)外顯子和3號(hào)外顯子上的HRAS的突變;4個(gè)在8號(hào)外顯子和3號(hào)外顯子上的CDH1突變;4個(gè)11號(hào)外顯子上的MHL1突變;3個(gè)分別為26號(hào)外顯子和27號(hào)外顯子上NOTHC1基因上的突變;以及4個(gè)在2號(hào)外顯子和3號(hào)外顯子上NRAS基因突變。6、另外,在4例樣本的cf DNA中檢測(cè)到HER2基因突變,其中兩例樣本存在一個(gè)共同的HER2 p.S855I突變,查閱資料發(fā)現(xiàn)該突變目前還無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。并且這兩例共同存在HER2 p.S855I突變的患者,在抗HER2靶向治療中獲益明顯,無(wú)進(jìn)展生存期(free-progress survival,PFS)分別為48個(gè)月和35個(gè)月。7、將本研究cf DNA中檢測(cè)的46個(gè)腫瘤相關(guān)基因突變信息與患者臨床治療資料進(jìn)行相關(guān)性分析顯示,ATM、KDR、PDGFRA三個(gè)基因突變與患者后一線抗HER2靶向治療的PFS顯著相關(guān)。12例血樣存在ATM基因的SNV,突變率為50%,Kaplan-Meier生存分析顯示ATM突變與患者更長(zhǎng)的PFS顯著相關(guān),突變型患者中位PFS為10.5個(gè)月,野生型患者中位PFS為6.5個(gè)月(P=0.04,HR 0.33,95%CI0.11-0.97)。另外,分別有8例和7例血漿樣本具有KDR和PDGFRA基因突變,突變率分別為33.3%和29%,Kaplan-Meier生存分析顯示這兩個(gè)基因的突變與患者更短的PFS顯著相關(guān)。KDR突變型和野生型的中位PFS時(shí)間分別為5.5和12.0個(gè)月(P=0.015,HR 4.56,95%CI 1.34~15.53);PDGFRA突變型和野生型中位PFS時(shí)間為5.0和9.0個(gè)月(P=0.036,HR 3.77,95%CI 1.09~13.05)。結(jié)論1、擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)游離DNA,測(cè)序深度高、敏感性高,檢測(cè)可信度好,可用于乳腺癌的循環(huán)腫瘤DNA的檢測(cè)。由于僅檢測(cè)與腫瘤相關(guān)的50個(gè)基因的熱點(diǎn)突變區(qū)域,故檢測(cè)成本大幅降低,有利于臨床推廣。2、HER2陽(yáng)性復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的cf DNA在50個(gè)腫瘤相關(guān)基因熱點(diǎn)區(qū)域上的突變差異顯著,基因組的突變譜顯示出“長(zhǎng)尾效應(yīng)”現(xiàn)象。PIK3CA、TP53、KIT是這一類別最常發(fā)生突變的三個(gè)基因。另有26個(gè)基因突變發(fā)生率低,可能是HER2陽(yáng)性乳腺癌治療中潛在的驅(qū)動(dòng)基因。3、EGFR,GNAS,HRAS,MLH1,CDH1,NRAS和NOTCH1可能與HER2陽(yáng)性乳腺癌靶向治療的耐藥相關(guān)。HER2基因p.S855I突變能夠預(yù)示患者HER2治療的長(zhǎng)期獲益。循環(huán)腫瘤DNA檢測(cè)在監(jiān)測(cè)HER2靶向治療期間生物標(biāo)記物的改變具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。4、ATM、KDR、PDGFRA三個(gè)基因能夠預(yù)測(cè)HER2陽(yáng)性乳腺癌靶向治療的敏感性,未來(lái)可能指導(dǎo)抗HER2治療臨床實(shí)踐。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Effect of Trastuzumab on Notch-1 Signaling Pathway in Breast Cancer SK-BR3 Cells[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年03期

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本文編號(hào)：2419804