【摘要】：背景腫瘤血管的生成對乳腺癌等腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移有至關(guān)重要的作用。根據(jù)本課題組前期研究,核殼結(jié)構(gòu)的雙層納米顆�？梢宰鳛榘邢蚬策f送化療藥物和抗血管生成藥物的載體。腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞總是相互依存,相互促進。抗腫瘤血管生成治療與放療或化療聯(lián)同治療,能夠同時靶向腫瘤細胞和腫瘤上的血管內(nèi)皮細胞,具有協(xié)同抗腫瘤的效果[1]。隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展及其與醫(yī)學領(lǐng)域的結(jié)合,這種新型的雙層納米體系可能為未來腫瘤的治療開辟了新的途徑。目的1.探索新制備的多功能雙層控緩釋納米粒制劑作為基因治療與聯(lián)合化療藥物載體的可行性;2.闡明雙層納米粒靶向抑制腫瘤血管及乳腺癌的作用,發(fā)揮系統(tǒng)抑制腫瘤的體內(nèi)外作用機制。方法1.納米粒的制備及理化性質(zhì)表征。使用透析法以及乳液溶劑揮發(fā)法制備合成單、雙層納米粒。通過粒徑分析儀測量納米粒的粒徑和表面Zeta電位,通過TEM觀察納米粒的形態(tài),通過HPLC測定載藥納米粒的藥物含量及藥物的體外釋放量。2.納米粒體外細胞毒實驗。通過體外細胞毒評價空白和載藥納米粒對細胞活力的影響;通過激光共聚焦與流式細胞分析儀定性、定量分析細胞攝取納米粒情況。3.納米粒體內(nèi)靶向抑瘤實驗。通過納米粒的急毒實驗進行納米粒體內(nèi)安全性評價;通過活體成像儀考察納米粒進入荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥物分布及代謝情況;通過荷瘤裸鼠體內(nèi)生物發(fā)光成像以及免疫組化考察體內(nèi)抑瘤效應。4.載基因/化療藥物雙層納米粒的制備及其體內(nèi)外抑瘤作用。通過瓊脂糖凝膠電泳阻滯實驗、細胞轉(zhuǎn)染實驗等研究單層納米粒作為DNA載體的可行性;通過體外細胞毒實驗研究雙層納米粒作為si RNA載體的可行性;通過荷瘤裸鼠腫瘤體積的變化研究體內(nèi)抑瘤效應。結(jié)果1.雙層納米粒呈核殼形狀均勻的球形,且具有相對均勻的分布。與單層納米粒相比,雙層載藥納米粒的綜合包封率和載藥量均有所提高。雙層載藥納米粒體外釋放結(jié)果顯示兩種藥物的釋放呈現(xiàn)不同的釋放速率,外層先釋放,內(nèi)層后釋放。2.三種空白納米粒對細胞的增殖沒有顯著影響,即空白納米粒在本研究中使用的濃度范圍內(nèi)無明顯細胞毒性。共聚焦圖像和流式細胞術(shù)結(jié)果表明,納米粒能夠被這些細胞高效攝取。3.納米粒的急毒實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,實驗組體重、食量無顯著差異,臨床體征也無明顯的差異。藥物分布及代謝情況表明三種納米粒均可以延長體內(nèi)循環(huán)時間,具有一定的靶向性,且雙層納米粒效果最佳。雙層載藥納米粒與單層載藥納米粒相比,抗腫瘤和抗血管生成作用增強,血液中循環(huán)時間延長,腫瘤分布增加,且腫瘤組織中的微血管密度(MVD)顯著降低。4.m PEG-g-CS能有效地與p DNA結(jié)合形成穩(wěn)定的復合物。細胞轉(zhuǎn)染實驗表明,納米粒可以成功轉(zhuǎn)染MCF-7和HUVEC細胞,并穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白。雙層納米粒可作為si RNA載體,且在本研究中si RNA濃度為100 n M為最佳轉(zhuǎn)染濃度,N/P為20為最佳轉(zhuǎn)染比例。體內(nèi)抑瘤實驗結(jié)果顯示,治療組均顯示出一定的抑瘤效果,比較而言,基因治療與化療相結(jié)合的雙層納米粒可顯著抑制腫瘤生長。結(jié)論1.制備的雙層納米粒表現(xiàn)出良好的藥物緩釋性,長循環(huán)性和腫瘤靶向性,可作為基因治療與聯(lián)合化療藥物載體;化療和抗血管生成基因治療聯(lián)合作用在乳腺癌等癌癥治療上具有協(xié)同作用;2.提供了用于藥物緩控釋放的新方法,具有良好的開發(fā)應用前景,有望成為一種新的藥物輸送體系。
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【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：2419562