發(fā)布時(shí)間：2019-01-26 14:32

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建攜帶有NM23基因的重組腺病毒載體并加以鑒定,包裝腺病毒并感染人胃癌細(xì)胞株BGC-823,觀(guān)察其對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823細(xì)胞凋亡的影響,從而建立表達(dá)NM23基因的人胃癌細(xì)胞株BGC-823。方法:(1)以質(zhì)粒NM23-PIRES2-EGFP為模版,采用PCR法擴(kuò)增出NM23基因,克隆至腺病毒載體p CMV-MCS-IRES-EGFP上,形成重組腺病毒載體p CMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鑒定及基因測(cè)序;(2)包裝病毒并檢測(cè)其滴度,確定腺病毒感染人胃癌細(xì)胞株BGC-823的最佳MOI值。(3)將人胃癌細(xì)胞株BGC-823分為實(shí)驗(yàn)組(NM23-OE組,感染p CMV-NM23-IRES-EGFP)、空白組(Ctrl組),陰性對(duì)照組(NC組,感染p CMV-MCS-IRES-EGFP);(4)分別用Real Time PCR和Western Blot檢測(cè)3組細(xì)胞中NM23基因m RNA和蛋白表達(dá);(5)通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組胃癌細(xì)胞株BGC-823的凋亡率。結(jié)果:(1)經(jīng)酶切鑒定和基因測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建重組腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP;(2)經(jīng)擴(kuò)增后,重組腺病毒的滴度為4.0x1010ifu/m L;(3)Real Time PCR和Western Blot結(jié)果顯示:陰性對(duì)照組與空白組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而實(shí)驗(yàn)組的NM23的m RNA和蛋白表達(dá)顯著高于其他兩組(P0.05);(4)實(shí)驗(yàn)組BGC-823細(xì)胞的凋亡率也顯著高于其他兩組(P0.05)。結(jié)論:(1)成功構(gòu)建了過(guò)表達(dá)NM23基因的重組腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP載體;(2)成功構(gòu)建了腺病毒介導(dǎo)的表達(dá)NM23基因的人胃癌細(xì)胞株BGC-823;(3)通過(guò)上調(diào)NM23基因的表達(dá),可觀(guān)察到胃癌細(xì)胞株BGC-823的凋亡水平有明顯升高。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of adenovirus vector carrying NM23 gene on apoptosis of human gastric cancer cell line BGC-823 by packaging adenovirus and infecting human gastric cancer cell line BGC-823,. Thus, a human gastric cancer cell line BGC-823. expressing NM23 gene was established. Methods: (1) using plasmid NM23-PIRES2-EGFP as template, NM23 gene was amplified by PCR and cloned into adenovirus vector p CMV-MCS-IRES-EGFP to form recombinant adenovirus vector p CMV-NM23-IRES-EGFP. (2) package the virus and detect its titer, and determine the best MOI value of adenovirus infected human gastric cancer cell line BGC-823. (3) the BGC-823 of human gastric cancer cell line was divided into experimental group (NM23-OE group, infected with p CMV-NM23-IRES-EGFP). Blank group (Ctrl group), negative control group (NC group, infected with p CMV-MCS-IRES-EGFP); (4) the expression of m RNA and protein of NM23 gene was detected by Real Time PCR and Western Blot, and the apoptosis rate of BGC-823 was detected by flow cytometry. Results: (1) after amplification of recombinant adenovirus p CMV-NM23-IRES-EGFP; (2), the titer of recombinant adenovirus was confirmed to be 4.0x1010ifu/m L by restriction enzyme digestion and gene sequencing. (3) the results of) Real Time PCR and Western Blot showed that there was no significant difference between the negative control group and the blank group (P0.05), while the expression of m RNA and protein of NM23 in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.05). (4) the apoptosis rate of BGC-823 cells in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.05). Conclusion: (1) the recombinant adenovirus p CMV-NM23-IRES-EGFP vector expressing NM23 gene was successfully constructed; (2) the adenovirus mediated expression of NM23 gene in human gastric cancer cell line BGC-823; was successfully constructed. (3) by upregulating the expression of NM23 gene, the apoptotic level of gastric cancer cell line BGC-823 was significantly increased.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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