【摘要】：癌癥是威脅人類生命的罪魁禍?zhǔn)字?并且往往是致命的,而對(duì)于癌癥,我們目前還是主要以預(yù)防為主。關(guān)于癌癥的研究雖然起步很早,但是重大的突破治療成果不多,所以癌癥相關(guān)研究依然緊迫。據(jù)前人報(bào)道,TGF-β信號(hào)通路在癌癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。在腫瘤發(fā)生初期,TGF-β能夠抑制腫瘤的發(fā)生、抑制癌癥細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡;但是在惡性腫瘤的發(fā)展中,TGF-β能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逃脫生長(zhǎng)抑制和逃避機(jī)體免疫監(jiān)控,對(duì)腫瘤的形成起促進(jìn)作用;后期更能促進(jìn)細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵潤(rùn)以及血管新生,促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。TGF-β信號(hào)通路扮演了雙刃劍的角色,所以對(duì)這一信號(hào)通路作用的機(jī)制研究非常關(guān)鍵,是找尋新的癌癥治療靶點(diǎn)的機(jī)會(huì)。再者,蛋白質(zhì)的泛素化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式,目前被廣泛研究,發(fā)現(xiàn)其對(duì)于蛋白質(zhì)的降解、活性、定位以及代謝等具有十分重要的作用,參與各種生理活動(dòng),如細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、生長(zhǎng)、增殖、凋亡、遷移以及免疫反應(yīng)。因此,對(duì)于蛋白質(zhì)泛素化修飾的研究具有重要的意義,研究其在TGF-β信號(hào)通路中的作用,可以在揭示癌癥的發(fā)生發(fā)展機(jī)理起到一定的作用。在本研究中,我們通過分析癌癥病人數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)E3泛素連接酶TRIM21在不同的癌癥中有不同程度的異常擴(kuò)增、缺失或突變,在不同的癌癥中扮演不同角色。接下來,我們通過下調(diào)TRIM21發(fā)現(xiàn)TGF-β信號(hào)通路的下游因子或者報(bào)告基因能夠明顯下調(diào),過表達(dá)野生型TRIM21則能夠上調(diào)TGF-β信號(hào)通路,同時(shí)構(gòu)建TRIM21活性缺失型發(fā)現(xiàn)其并無此種作用;其也能夠增強(qiáng)TGF-β抑制的細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞凋亡。然后,我們?yōu)榱诉M(jìn)一步深究TRIM21是如何上調(diào)TGF-β信號(hào)通路,我們與TRIM21同時(shí)過表達(dá)TGF-β信號(hào)通路中的核心因子,通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)TRIM21可與Smad4相結(jié)合,在體外pull down實(shí)驗(yàn)以及內(nèi)源水平下也發(fā)現(xiàn)了這一現(xiàn)象。接下來,通過變性泛素化方法,發(fā)現(xiàn)過表達(dá)野生型TRIM21能夠促進(jìn)Smad4泛素化水平,而活性缺失型則不能促進(jìn)。TGF-β信號(hào)通路在傳遞過程中,Smad4與Smad2/3形成復(fù)合體一起穿梭入核,啟動(dòng)下游基因,我們發(fā)現(xiàn)TRIM21能夠促進(jìn)這一過程,下調(diào)TRIM21的表達(dá)Smad4與Smad2/3的結(jié)合減弱,而且Smad4在細(xì)胞核中的積累減少。另外,我們通過質(zhì)譜的方法,發(fā)現(xiàn)了能夠影響TRIM21泛素化水平的去泛素化酶USP15。我們過表達(dá)USP15與TRIM21發(fā)現(xiàn)兩者能夠相互作用,在兩者表達(dá)均豐富的細(xì)胞中,通過內(nèi)源免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),USP15也能夠與TRIM21結(jié)合,利用體外蛋白質(zhì)相互作用方法發(fā)現(xiàn)兩者也可相互作用。然后,通過構(gòu)建缺失突變體的方法,鑒定出兩者負(fù)責(zé)相互作用的結(jié)構(gòu)域,進(jìn)一步確定了兩者的相互作用。最后,通過內(nèi)外去泛素化相結(jié)合的方式,確定了去泛素化酶USP15依賴其去泛素化酶活性下調(diào)TRIM21的泛素化水平�？偠灾�,在本項(xiàng)研究中,我們發(fā)現(xiàn)TRIM21能夠上調(diào)TGF-β信號(hào)通路,并且能夠與Smad4相互作用上調(diào)其泛素化水平,影響Smad4/2/3復(fù)合體的形成及入核。另外,鑒定出TRIM21的一種去泛素化酶USP15,能夠與其相互作用并且下調(diào)其泛素化水平,關(guān)于USP15能夠影響TRIM21的何種功能發(fā)揮,我們還在探究中。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.2

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本文編號(hào)：2414947