【摘要】：目的構(gòu)建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表達載體,感染乳腺癌細胞MB231,建立穩(wěn)定表達miR-205的MB231細胞株,觀察其增殖能力的變化。方法酶切慢病毒載體GV369,設(shè)計并合成miR-205引物,通過PCR擴增目的基因連接到慢病毒載體上。對重組質(zhì)粒雙酶切鑒定,進行慢病毒hsa-miR-205的包裝和滴度測定。用構(gòu)建好的慢病毒感染MB231細胞,定量PCR檢測細胞中miR-205表達水平的變化,MTT和劃痕實驗觀察過表達miR-205后MB231細胞增殖和遷移能力的變化。結(jié)果測序顯示,目的基因連接慢病毒載體成功。慢病毒穩(wěn)定感染了MB231,定量PCR結(jié)果顯示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表達明顯提高,MTT和劃痕實驗結(jié)果顯示感染后MB231的細胞增殖和遷移能力受到抑制。結(jié)論成功構(gòu)建了miR-205慢病毒表達載體,并建立了穩(wěn)定表達miR-205的細胞株MB231,顯示其可能負調(diào)控乳腺癌細胞的惡性生物學行為,為后期進一步研究miR-205的功能和機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct micoRNA-205 (miR-205) lentivirus expression vector, and to establish a stable MB231 cell line expressing miR-205 stably in breast cancer cell MB231, and to observe the change of its proliferative ability. Methods miR-205 primers were designed and synthesized by enzyme digested lentivirus vector GV369,. The target gene was ligated to lentivirus vector by PCR amplification. The recombinant plasmid was digested with double enzyme, and the packaging and titer determination of lentivirus hsa-miR-205 were carried out. MB231 cells were infected with constructed lentivirus and the changes of miR-205 expression were detected by quantitative PCR. The proliferation and migration of MB231 cells after miR-205 expression were observed by MTT and scratch assay. Results sequencing showed that the target gene was successfully linked to lentivirus vector. Stable infection of lentivirus with MB231, quantitative PCR results showed that the expression of miR-205 in MB231 infected with hsa-miR-205 was significantly increased, and MTT and scratch test showed that the proliferation and migration of MB231 cells were inhibited after infection. Conclusion the expression vector of miR-205 lentivirus was successfully constructed, and the cell line MB231, expressing miR-205 stably showed that it might negatively regulate the malignant biological behavior of breast cancer cells. It lays a foundation for further study on the function and mechanism of miR-205.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院;皖西衛(wèi)生職業(yè)學院;
【基金】：國家自然科學基金(編號:81302319) 安徽省自然科學基金(編號:1308085MH121) 國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(編號:201510366013)
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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1 董偉;劉媛媛;陳志軍;姜玉;朱其蘋;汪思應(yīng);;hsa-miR-100-3p抑制劑慢病毒表達載體穩(wěn)定感染BEAS-2B細胞株的建立[J];中華疾病控制雜志;2016年02期

2 侯新新;趙萌;張貴宇;;miR-205與腫瘤[J];國際腫瘤學雜志;2012年10期

【共引文獻】

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2 陳志軍;徐陌;姜玉;任海風;趙榮榮;楊帆;汪思應(yīng);;以Has-miR-100-3p抑制劑慢病毒表達載體建立穩(wěn)定感染A549細胞株[J];安徽醫(yī)科大學學報;2017年01期

3 張靖;胡麗娟;楊栓雀;楊雪梅;;miR-205對卵巢癌細胞SKOV-3侵襲遷移力的影響[J];臨床醫(yī)學研究與實踐;2016年19期

【二級參考文獻】

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1 崔花芹;汪心怡;陳吉;陳卓;趙華;瞿成奎;汪思應(yīng);;環(huán)境污染物As及SHP2~(D61G/+)激活對小鼠成纖維母細胞miRNA表達譜的影響[J];中國比較醫(yī)學雜志;2013年07期

2 付海龍;徐廣峰;史春梅;季晨博;郭錫熔;趙亞萍;;hsa-miR-100的生物信息學分析[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2012年18期

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3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年03期

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1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

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3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導(dǎo)凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

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1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

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1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復(fù)旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

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1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：2404885