目的腫瘤一直威脅著人類(lèi)健康,由于其發(fā)病率和致死率較高,因此加深對(duì)腫瘤的發(fā)生機(jī)制和免疫學(xué)的研究有利于開(kāi)發(fā)出有效的治療手段。通過(guò)注射疫苗來(lái)提高機(jī)體免疫力是預(yù)防疾病的手段之一,但傳統(tǒng)疫苗免疫原性弱,相對(duì)較難引起免疫反應(yīng)。天麻和黃芩是兩種中藥材,其有效成分天麻素和黃芩素有多種藥理作用,并且在《本草綱目》中有天麻素?zé)o毒的記載。但其是否可以作為免疫佐劑來(lái)增強(qiáng)免疫原性還未見(jiàn)報(bào)道,所以,我們主要通過(guò)天麻素的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)來(lái)研究天麻素是否具有增強(qiáng)免疫原性的作用;并將黃芩素作為佐劑來(lái)評(píng)價(jià)黃芩素對(duì)抗原提呈細(xì)胞的免疫增強(qiáng)作用。從實(shí)驗(yàn)室的角度為促進(jìn)臨床腫瘤免疫治療的發(fā)展和進(jìn)步提供一條可行的思路。方法在體外,檢測(cè)天麻素和黃芩素素對(duì)DC2.4和RAW264.7細(xì)胞的刺激活性,在體內(nèi),檢測(cè)天麻素和黃芩素對(duì)抗原提呈細(xì)胞的免疫增強(qiáng)活性,并建立小鼠黑色素瘤模型,檢測(cè)天麻素作為佐劑對(duì)荷瘤小鼠CTL的作用。在體外實(shí)驗(yàn)中,我們將LPS作為陽(yáng)性對(duì)照,不同濃度的天麻素和黃芩素分別刺激DC2.4細(xì)胞系和RAW264.7細(xì)胞系,培養(yǎng)48h后用抗體進(jìn)行染色,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種細(xì)胞表面蛋白CD80,CD86,MHC I和MHC II的表達(dá)量變化;在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們分別做了天麻素作為佐劑對(duì)黑色素瘤小鼠CTL的作用研究和黃芩素作為佐劑對(duì)抗原提呈細(xì)胞的作用研究,在天麻素作為佐劑的研究中,我們將C57BL/6小鼠分為6組,每組10只,以弗式完全佐劑與滅活的B16F10腫瘤細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照,以滅活的B16F10腫瘤細(xì)胞為陰性對(duì)照,以天麻素與滅活的腫瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫,免疫3d后對(duì)其天然免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià),并建立小鼠黑色素瘤模型,對(duì)T細(xì)胞的殺傷功能進(jìn)行評(píng)價(jià),最后,綜合小鼠的腫瘤大小及存活率來(lái)評(píng)價(jià)天麻素作為佐劑的效果;在黃芩素作為佐劑的研究中,我們將C57BL/6小鼠分為8組,每組10只,以黃芩素與滅活的腫瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫,免疫3d后對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞中的抗原提呈細(xì)胞表面蛋白及分泌的細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè),綜合體外結(jié)果,評(píng)價(jià)黃芩素對(duì)抗原提呈細(xì)胞的激活作用。結(jié)果體外流式檢測(cè)結(jié)果顯示,天麻素和黃芩素有較強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞激活作用;體內(nèi)結(jié)果顯示,天麻素和黃芩素對(duì)抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志物和胞內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)有增強(qiáng)作用,并且天麻素能激活CD4+T細(xì)胞,并使其高表達(dá)細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ,激活CD8+T細(xì)胞,使其高表達(dá)細(xì)胞因子perforin,TNFa和IFN-γ。結(jié)論天麻素能夠提高T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,并顯著提高了荷瘤小鼠的存活時(shí)間;天麻素因其在體外和體內(nèi)都有較強(qiáng)的免疫激活作用,具有作為腫瘤疫苗佐劑的潛質(zhì);黃芩素作為佐劑對(duì)抗原提呈細(xì)胞有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R730.51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2402336