【摘要】：食管癌是最常見的惡性腫瘤之一,我國是食管癌發(fā)病率以及死亡率最高的國家,最常見的病理類型是食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC),每年的新發(fā)病例占全世界的50%。最近的研究表明,同一腫瘤的多個(gè)區(qū)域的DNA測序和染色體分析發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)異質(zhì)性(ITH)普遍存在于ESCC中。ITH是抗藥性和治療失敗的主要原因,ESCC手術(shù)后5年生存率約30%,分析ESCC患者的基因組多樣性,識(shí)別新的靶標(biāo),篩選早期診斷標(biāo)記物以及設(shè)計(jì)個(gè)體化治療策略是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。目的:探討食管鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性及ZNF750,EP300,MTOR,KMT2D的表達(dá)對患者預(yù)后的影響。方法:1回顧性分析2008年1月至2010年12月間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院組織病理學(xué)診斷為食管鱗狀細(xì)胞癌并隨即進(jìn)行手術(shù)的1782例患者,隨訪成功共1550例ESCC患者,失訪232例,隨訪率為86.9%。對全部1550例患者的HE染色切片進(jìn)行閱片,篩選了106例具有腫瘤內(nèi)異質(zhì)性的ESCC患者,每個(gè)病例HE染色切片下均有2個(gè)病灶區(qū)域有顯著組織學(xué)或形態(tài)學(xué)的差異。106例患者手術(shù)前均未接受任何治療,無其他腫瘤病史,并且都有完整的臨床資料。2使用免疫組織化學(xué)(IHC)HRP法,分別檢測106例患者的ZNF750,KMT2D,EP300及MTOR的蛋白表達(dá)水平及不同病灶間的表達(dá)差異。標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)取材,石蠟包埋制片,HE染色及免疫組織化學(xué)染色,光鏡觀察。免疫組化判定方法為:根據(jù)所觀察到的陽性染色腫瘤細(xì)胞的百分比及染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分,高表達(dá)組為總分為4?9的標(biāo)本。低表達(dá)組包括陰性表達(dá)或低表達(dá),總分為0至3。3使用一種新穎的基于RNA原位雜交的方法(RNA scope),從106例ESCC患者中隨機(jī)選取12例患者福爾馬林固定石蠟包埋組織,使用特異的RNA探針分別檢測ZNF750,KMT2D,EP300及MTOR的m RNA轉(zhuǎn)錄水平及不同病灶區(qū)域間的表達(dá)差異。在m RNA高表達(dá)的癌細(xì)胞中信號(hào)數(shù)較多(3~4分),在m RNA低表達(dá)的癌細(xì)胞中信號(hào)數(shù)較少(0~2分)。4運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.00對所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩個(gè)獨(dú)立樣本比較采用卡方檢驗(yàn),Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素生存分析,COX回歸進(jìn)行多因素分析,組間比較使用Log-rank檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),P0.05則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1臨床病理特征2008-2010年間1550例ESCC患者男性1038例,女性512例,106例具有異質(zhì)性的ESCC患者,男性80例,女性26例;兩組病例比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.071)。1550例ESCC患者的發(fā)病年齡為18~81歲,中位年齡60歲,平均年齡59.93歲,腫瘤發(fā)生部位上段205例,中段1092例,下段253例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率38.58%(598/1550),脈管瘤栓陽性率為25.61%(397/1550),組織學(xué)病理分級(jí)G1為121例,G2為1161例,G3為268例,臨床分期Ⅰ期236例,Ⅱ期747例,Ⅲ期549例,Ⅳ期18例,腫瘤浸潤深度T1為281例,T2為259例,T3為1010例,生存期為1~108個(gè)月,5年生存率為48.30%,中位生存期為57個(gè)月;106例具有異質(zhì)性的ESCC患者發(fā)病年齡為39-76歲,中位年齡59歲,平均年齡為59.28歲,發(fā)病部位上段15例,中段62例,下段29例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為55.67%(59/106),脈管瘤栓陽性率為36.79%(39/106組織學(xué)病理分級(jí)G1為5例,G2為73例,G3為28例,臨床分期Ⅰ期7例,Ⅱ期39例,Ⅲ期60例,浸潤深度T1為9例,T2為27例,T3為70例,生存期為4~105個(gè)月,5年生存率為34.00%,中位生存期為30個(gè)月。兩組病例比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。22免疫組織化學(xué)結(jié)果2.1 ZNF750蛋白的表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析106例食管鱗癌組織中58例(54.72%)ZNF750高表達(dá),48例(45.28%)低表達(dá)。ZNF750蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、浸潤深度、脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P均0.05)。ZNF750表達(dá)和腫瘤發(fā)生部位、性別和年齡之間未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。ZNF750低表達(dá)組較高表達(dá)組具有更差的預(yù)后(χ2=25.821,P=0.000)。本研究所篩選的106例ESCC患者中,ZNF750在44例(41.51%)患者中顯示異質(zhì)性表達(dá),由于兩個(gè)病灶不都高表達(dá),ZNF750在212個(gè)病灶區(qū)域中的高表達(dá)率為33.96%(72/212),低于106例ESCC患者中的高表達(dá)率(54.72%)。2.2 EP300蛋白的表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析106例食管鱗癌組織中66例(62.26%)EP300高表達(dá),40例(37.72%)低表達(dá)。EP300蛋白表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P均0.05)。EP300表達(dá)和腫瘤發(fā)生部位、浸潤深度、性別和年齡之間未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。EP300高表達(dá)組較低表達(dá)組具有更差的預(yù)后(χ2=14.037,P=0.000)。本研究所篩選的106例ESCC患者中,EP300在37例(34.90%)患者中顯示異質(zhì)性表達(dá),由于兩個(gè)病灶不都高表達(dá),EP300在212個(gè)病灶區(qū)域中的高表達(dá)率為44.81%(95/212),低于106例ESCC患者中的高表達(dá)率(62.26%)。2.3 MTOR蛋白的表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析106例食管鱗癌組織中75例(70.75%)MTOR高表達(dá),31例(29.25%)低表達(dá)。MTOR蛋白表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P均0.05)。MTOR高表達(dá)和腫瘤發(fā)生部位、浸潤深度、性別和年齡之間未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。MTOR高表達(dá)組較低表達(dá)組具有更差的預(yù)后(χ2=29.856,P=0.000)。多因素分析顯示MTOR是預(yù)后的獨(dú)立影響因素(χ2=12.166,P=0.000)。MTOR在39例(36.79%)患者中顯示異質(zhì)性表達(dá),由于兩個(gè)病灶不都高表達(dá),MTOR在212個(gè)病灶區(qū)域中的高表達(dá)率為52.36%(111/212),低于106例ESCC患者中的高表達(dá)率(70.75%)。2.4 KMT2D蛋白的表達(dá)情況106例食管鱗癌組織中免疫組織化學(xué)檢測KMT2D不表達(dá)。3 RNAScope實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 ZNF750的mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析根據(jù)RNAScope染色評(píng)分指南顯示,12例食管鱗癌組織中,66.67%的ZNF750高表達(dá):6例評(píng)分為4分,2例評(píng)分為3分;33.33%的ZNF750低表達(dá):4例評(píng)分為1分。ZNF750高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡密切相關(guān)(P均0.05)。ZNF750高表達(dá)和腫瘤發(fā)生部位、性別未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。8例患者ZNF750 mRNA顯示異質(zhì)性表達(dá),其中6例異質(zhì)性表達(dá)與免疫組化一致。3.2 EP300的mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析12例食管鱗癌組織中,83.33%的EP300高表達(dá):2例評(píng)分為4分,8例評(píng)分為3分;16.67%的EP300低表達(dá):2例評(píng)分為2分。EP300表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、性別、腫瘤發(fā)生部位密切相關(guān)(P均0.05)。EP300表達(dá)和腫瘤年齡、浸潤深度、脈管瘤栓未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。8例患者EP300 mRNA顯示異質(zhì)性表達(dá),其中6例異質(zhì)性表達(dá)與免疫組化一致。3.3 MTOR的mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析12例食管鱗癌組織中,33.33%的MTOR高表達(dá):2例評(píng)分為4分,2例評(píng)分為3分,66.67%的MTOR低表達(dá):6例評(píng)分為2分。MTOR高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、脈管瘤栓、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡密切相關(guān)(P均0.05)。MTOR高表達(dá)和腫瘤發(fā)生部位、性別未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。4例患者M(jìn)TOR mRNA顯示異質(zhì)性表達(dá),其中4例異質(zhì)性表達(dá)與免疫組化一致。3.4 KMT2D的mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)及腫瘤異質(zhì)性的相關(guān)性分析12例食管鱗癌組織中,50%的KMT2D高表達(dá):6例評(píng)分為3分;50%的KMT2D低表達(dá):4例評(píng)分為2分,2例評(píng)分為1分。KMT2D高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、脈管瘤栓、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、腫瘤發(fā)生部位、性別未發(fā)現(xiàn)顯著的相關(guān)性。4例患者KMT2D m RNA顯示異質(zhì)性表達(dá)。結(jié)論:1具有異質(zhì)性的食管鱗狀細(xì)胞癌患者具有更差的生存與預(yù)后。2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中,ZNF750、EP300及MTOR的蛋白表達(dá)與腫瘤異質(zhì)性相關(guān)。3 ZNF750蛋白表達(dá)與ESCC患者的預(yù)后呈正相關(guān),EP300、MTOR蛋白表達(dá)與ESCC患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān),臨床分期和MTOR蛋白的表達(dá)是ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。4 RNAscope檢測方法具有很好的穩(wěn)定性與敏感性,是探索新的腫瘤標(biāo)志物及檢測腫瘤內(nèi)異質(zhì)性更可靠的檢測手段。ZNF750、EP300、KMT2D以及MTOR原位m RNA檢測可作為提示食管癌基因突變候選基因,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 曹巍;吳偉;閆明;田夫;劉寒松;王進(jìn)武;張全武;李玉杰;李敏;;食管鱗狀細(xì)胞癌癌內(nèi)異質(zhì)性的初步研究[J];中華腫瘤雜志;2016年09期

2 趙藝嘩;劉紅剛;;鼻腔鼻竇非角化性鱗狀細(xì)胞癌的臨床病理學(xué)特征[J];中華病理學(xué)雜志;2016年09期

3 ;Genomic and molecular characterization of esophageal squamous cell carcinoma[J];Science Foundation in China;2014年02期

，

本文編號(hào)：2396057