發(fā)布時間：2018-12-28 19:10

【摘要】：研究背景結(jié)直腸癌是我國最常見的高危害消化系惡性腫瘤,它具有以下臨床特點:早期發(fā)病隱襲,并且無特殊的臨床不適表現(xiàn),早期患者可有高達90%以上的5年生存率,然而大多數(shù)患者去醫(yī)院就診時,檢查到結(jié)腸癌已經(jīng)為進展期,5年生存率只有65%左右,手術(shù)及放化療后對其預(yù)后改善不肯定,復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移其致死的主要原因,因此探求結(jié)直腸癌高危個體的早期識別、早期診斷、早期治療顯得尤其重要。研究證明低氧是實體腫瘤組織內(nèi)部普遍存在的現(xiàn)象,且腫瘤細胞的缺氧可能是惡性腫瘤進展的啟動因子之一,低氧使癌細胞更具轉(zhuǎn)移性、侵襲性,而EMT(epithelial mesenchymal transition,上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化)決定并參與了多種腫瘤上皮細胞表型的轉(zhuǎn)變,因此在腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移和侵襲過程中發(fā)揮著核心的作用。上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)變是這樣的一個過程:原發(fā)灶中靜止的腫瘤上皮細胞表型發(fā)生改變,失去細胞與細胞的黏著狀態(tài),向具有運動遷移傾向的間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)變,從而賦予了腫瘤上皮細胞能夠轉(zhuǎn)移并且遠處侵襲的能力。近年研究表明EMT的發(fā)生與腫瘤所處的微環(huán)境密切相關(guān),缺氧是結(jié)直腸癌最重要的微環(huán)境特點之一,HIF-1α是缺氧反應(yīng)最關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子。相關(guān)研究表明HIF-1α在腫瘤早期便有異常表達,不僅如此HIF-1α的異常表達和患者的術(shù)后生存率有關(guān)。所以,HIF-1α能夠作為有效的腫瘤篩查和預(yù)后標(biāo)記物,并且能夠在決定腫瘤的發(fā)生以及進展中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。此外,我們通過對腫瘤基因中非編碼小RNA的了解,發(fā)現(xiàn)它也參與了EMT相關(guān)進程,不僅如此,非編碼小RNA在EMT不同進程中起到了重要的作用。MicroRNA-200家族已經(jīng)作為一類典型的抑癌基因被廣泛關(guān)注。其特點是在惡性腫瘤組織中表達下調(diào),能夠作為EMT進程、腫瘤細胞粘附、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制物。最近的報道稱:mi R-200b能夠直接抑制VEGFR(vascular endothelial growth factor receptor,血管內(nèi)皮生長因子受體)和VEGF(vascular endothelial growth factor,血管內(nèi)皮生長因子相關(guān)基因的表達,抑制腫瘤內(nèi)微小血管的生成,進而對腫瘤細胞的侵襲以及轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生影響。此外,腫瘤血管生成的另外一個關(guān)鍵原癌基因是轉(zhuǎn)錄因子Ets-1同樣受mi R-200b的負性調(diào)控,而在低氧環(huán)中mi R-200b表達顯著下調(diào),從而促進低氧誘導(dǎo)的血管生成過程。前期我們已經(jīng)在結(jié)腸癌組織中證實Micro RNA-200家族在癌組織表達明顯低于正常組織,而大量文獻表明HIF-1α在癌組織中異常高表達。關(guān)于Micro RNA-200家族調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子及靶蛋白的研究有大量文獻報道,但其本身在轉(zhuǎn)錄水平如何被調(diào)控缺乏深入研究。因此我們檢測了結(jié)直腸癌和癌旁組織中HIF-1α和mi R-200b的表達,并且檢測不同缺氧條件下結(jié)直腸癌細胞中HIF-1α和mi-200b的表達來探討結(jié)腸癌中HIF-1α和mi R-200b之間的聯(lián)系,為確立HIF-1α-mi R-200b腫瘤調(diào)節(jié)通路提供依據(jù)。方法:實時定量PCR檢測50例結(jié)腸癌患者的結(jié)直腸癌組織及其癌旁組織中HIF-1α與mi RNA-200b的表達。利用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。利用Co Cl2構(gòu)建結(jié)腸癌細胞系的缺氧誘導(dǎo)模型,通過實時定量PCR和Western blot分別測定缺氧的Caco-2細胞中HIF-1α和mi RNA-200b基因表達并確立兩者相關(guān)性。結(jié)果:在癌癥組織中HIF-1αmRNA的表達量明顯高于癌旁組織中其基因的表達量,而mi RNA-200b基因的表達量與正好相反,其在癌旁組織中的表達明顯高于癌組織中的表達。通過對細胞模擬缺氧處理后發(fā)現(xiàn):缺氧2h的HIF-1α蛋白水平升高,而后隨缺氧時間的延長HIF-1α蛋白表達緩慢下降(2~12)h,最后HIF-1α在16h表達量最高,mi RNA-200b在缺氧2h的caco-2細胞中表達量最低,2~12小時表達逐漸上升,16h的表達量下降至2h水平。Real-time PCR和Western blot聯(lián)合檢測發(fā)現(xiàn),HIF-1α和mi RNA-200b表達呈相反的趨勢。結(jié)論:在結(jié)直腸癌組織HIF-1α與Mi RNA-200b的表達呈負性相關(guān),在缺氧的結(jié)直腸細胞中HIF-1α與Mi RNA-200b也呈現(xiàn)負性相關(guān),HIF-1α可能通過直接或間接的調(diào)控機制抑制mi RNA-200b的表達從而參與結(jié)直腸癌上皮細胞EMT的過程,但深入的調(diào)控機制需要進一步的研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.3

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本文編號：2394316