【摘要】：本論文涵蓋以下兩方面內(nèi)容:1、新型水溶性半乳糖酞菁光敏劑光動(dòng)力診斷結(jié)腸癌動(dòng)物模型的研究目的:惡性腫瘤已經(jīng)嚴(yán)重危害到人類(lèi)健康,其中結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率呈明顯的上升趨勢(shì),引起了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。結(jié)腸癌的早期可無(wú)任何表現(xiàn),晚期才可能出現(xiàn)大便性狀改變等癥狀。對(duì)于結(jié)腸癌的診斷常用方法有:氣鋇雙重造影、內(nèi)窺鏡、CT、核磁等但均有其局限性。而光動(dòng)力診斷憑借其無(wú)輻射、對(duì)正常組織損傷小、病人耐受性強(qiáng)、可對(duì)腫瘤早期進(jìn)行實(shí)時(shí)診斷的優(yōu)點(diǎn)脫穎而出成為近年來(lái)研究熱點(diǎn)。光敏劑是光動(dòng)力診斷的關(guān)鍵,因此越來(lái)越多的學(xué)者開(kāi)始對(duì)光敏劑進(jìn)行研究和優(yōu)化。本課題采用的是經(jīng)半乳糖基修飾的4種酞菁類(lèi)光敏劑(T1~T4),通過(guò)研究其光譜學(xué)特性、脂水分布系數(shù)、細(xì)胞吸收特性、亞細(xì)胞定位、生物安全性等確定最適合應(yīng)用于診斷的光敏劑并且應(yīng)用于結(jié)腸癌原位模型的診斷,以期為臨床診斷提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法:對(duì)光敏劑T1~T4進(jìn)行紫外光譜和熒光光譜檢測(cè);用反向薄層色譜法檢測(cè)T1~T4的脂水分布系數(shù);利用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)T1~T4的濃度和孵育時(shí)間對(duì)結(jié)腸癌CT-26細(xì)胞吸收量的影響;利用激光共聚焦顯微鏡觀察T1~T4的亞細(xì)胞定位情況,MTT法檢測(cè)在有無(wú)激光照射的情況下,T1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞(LOVO、CT-26)和正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用的差異,并計(jì)算IC50值;利用光譜分析儀在結(jié)腸癌原位模型的基礎(chǔ)上研究光敏劑T1的診斷作用。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行后續(xù)處理,均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)或方差分析(ANOVA S-N-K)檢驗(yàn),以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:T1~T4的紫外吸收最大波長(zhǎng)在680nm左右,熒光發(fā)射波長(zhǎng)在690nm左右,這符合作為光敏劑紫外吸收光譜和熒光光譜在近紅外區(qū)(600~800)的特征;脂水分布系數(shù)結(jié)果顯示,用半乳糖修飾的酞菁具有較好的水溶性并且隨著取代基數(shù)目的增加其水溶性會(huì)增強(qiáng);結(jié)腸癌細(xì)胞CT-26對(duì)T1的吸收量和吸收速率最高最快,T2、T3次之,對(duì)T4幾乎無(wú)吸收;化合物的細(xì)胞定位結(jié)果顯示在同一濃度下,T1進(jìn)入細(xì)胞的量最多,熒光信號(hào)最強(qiáng)并且在溶酶體內(nèi)分布較多,線粒體內(nèi)分布較少;在有無(wú)光照條件下,T1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用比對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用強(qiáng);動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,正常結(jié)腸組織、腫瘤組織和激光光動(dòng)力診斷腫瘤組織在吸收光譜上有差異。(p0.05)結(jié)論:T1憑借其脂溶性最強(qiáng)、吸收速率最快、熒光強(qiáng)度最強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)可用于結(jié)腸癌熒光成像診斷,并且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)T1介導(dǎo)的光動(dòng)力熒光成像有一定的應(yīng)用價(jià)值和前景。2、新型水溶性半乳糖酞菁光敏劑抗腫瘤特性及其相關(guān)機(jī)制研究目的:在研究半乳糖酞菁光敏劑T1對(duì)結(jié)腸癌光動(dòng)力診斷效果的同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)此類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤有一定的抑制作用,因此本課題對(duì)新型光敏劑半乳糖酞菁對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了研究,為光動(dòng)力治療結(jié)腸癌提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:利用MDC染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)在IC50濃度時(shí),TI-PDT對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的自噬、凋亡和壞死情況;利用掃描電鏡和透射電鏡觀察在IC50濃度時(shí),TI-PDT對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的影響;RT-PCR檢測(cè)在IC50濃度時(shí),T1-PDT對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax、Beclin1基因表達(dá)的影響。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行后續(xù)處理,均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)或方差分析(ANOVA S-N-K)檢驗(yàn),以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:T1-PDT可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生自噬,對(duì)細(xì)胞的凋亡影響較小。掃描電鏡和透射電鏡結(jié)果表明T1-PDT可引起細(xì)胞自噬,產(chǎn)生自噬小體。對(duì)線粒體的破壞不明顯,可引起細(xì)胞膜的皺縮、偽足消失,甚至破裂。RT-PCR結(jié)果證明,T1-PDT對(duì)Bcl-2、Bax基因的表達(dá)影響小,可增強(qiáng)Beclin-1基因的表達(dá)。(P0.05)結(jié)論:T1介導(dǎo)的光動(dòng)力治療結(jié)腸癌的主要機(jī)制是引起腫瘤細(xì)胞自噬。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35;R730.49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2390470