【摘要】：【研究背景與目的】胃癌在世界范圍內(nèi)屬于常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率位列惡性腫瘤的第二位,我國胃癌患者中主要以進(jìn)展期胃癌患者為主。雖然目前治療胃癌的策略方案逐漸提升,然而進(jìn)展期胃癌患者接受相關(guān)胃癌標(biāo)準(zhǔn)根治術(shù)后的五年生存率仍無較大改觀,究其原因可能在于胃癌發(fā)生的具體病因及發(fā)病機制尚未闡明。因而,進(jìn)一步研究胃癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子生物學(xué)基礎(chǔ),闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的發(fā)病機理將有助于提高胃癌的診斷準(zhǔn)確性、提供新穎有效的治療手段和改善胃癌患者的預(yù)后等。micro RNA(mi RNA)是一類長度為20~24nt的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA,通過與靶基因m RNA 3’端非翻譯區(qū)(3’UTR)以完全或不完全方式結(jié)合從而導(dǎo)致靶基因m RNA發(fā)生降解和/或抑制靶基因m RNA翻譯,進(jìn)而對靶基因編碼的蛋白進(jìn)行調(diào)控。近年研究表明,mi RNA可以參與調(diào)控包括細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移等腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為。Micro RNA在胃癌中的表達(dá)情況及其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制目前尚未完全闡明。前期研究中,采用mi RNA芯片和定量RT-PCR的方法,分析了180例胃癌病人和80例健康對照的血漿標(biāo)本,發(fā)現(xiàn)胃癌病人血漿中mi R-199a-3p的含量顯著高于健康對照。同時我們檢測分析了9株胃癌細(xì)胞株與6例正常胃黏膜上皮mi RNA表達(dá)譜的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn):mi R-199a-3p在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)均顯著高于其在正常胃黏膜上皮中的表達(dá)。mi R-199a-3p在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)明顯上調(diào),提示其可能作為促癌性mi RNA參與促進(jìn)胃癌的發(fā)展過程。然而,其在胃癌中的表達(dá)及其具體生物學(xué)功能和機制尚不明確。因此,本研究旨在進(jìn)一步研究mi R-199a-3p與胃癌生物學(xué)特性之間的關(guān)系,闡明其在胃癌發(fā)病中的作用機制�！静牧吓c方法】(1)應(yīng)用q RT-PCR方法對mi R-199a-3p在6株胃癌細(xì)胞株與永生化胃黏膜細(xì)胞GES-1中的表達(dá)水平進(jìn)行驗證后,進(jìn)一步采用q RT-PCR檢測其在52例胃癌及其相對應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)水平,分析其與胃癌臨床病理特點之間的關(guān)系。(2)采用mi R-199a-3p mimics與mi R-199a-3p逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體上調(diào)胃癌細(xì)胞株SGC-7901中mi R-199a-3p的表達(dá)水平,以及mi R-199a-3p inhibitors下調(diào)NCI-N87細(xì)胞株mi R-199a-3p的表達(dá)水平,觀察其對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;(3)應(yīng)用生物信息學(xué)預(yù)測mi R-199a-3p靶基因,進(jìn)而結(jié)合雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測,q RT-PCR和免疫印跡的方法,篩選并驗證mi R-199a-3p作用的靶基因,初步闡明mi R-199a-3p的參與胃癌發(fā)展的相關(guān)生物學(xué)分子機制。【結(jié)果】q RT-PCR檢測結(jié)果顯示,mi R-199a-3p在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)明顯高于其在GES-1中的表達(dá)水平。mi R-199a-3p在52例胃癌組織中的平均表達(dá)水平顯著高于其配對癌旁組織,且胃癌組織mi R-199a-3p表達(dá)水平與腫瘤組織侵襲程度及TNM分期存在顯著相關(guān)性。上調(diào)mi R-199a-3p表達(dá)水平可顯著提高胃癌細(xì)胞株SGC-7901、NCI-N87體外增殖、克隆形成及體內(nèi)成瘤能力,同時抑制細(xì)胞凋亡發(fā)生;下調(diào)mi R-199a-3p可以逆轉(zhuǎn)上述生物學(xué)行為。生物信息學(xué)預(yù)測分析提示轉(zhuǎn)錄抑制因子ZHX1的m RNA的3’UTR含有mi R-199a-3p直接作用靶基因序列,雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測進(jìn)一步證實了ZHX1為mi R-199a-3p直接靶基因,q RT-PCR及免疫組化證實mi R-199a-3p對ZHX1蛋白表達(dá)的調(diào)控發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平�！窘Y(jié)論】mi R-199a-3p在胃癌細(xì)胞和組織中表現(xiàn)為高表達(dá)狀態(tài),其表達(dá)水平與腫瘤組織侵襲范圍及TNM分期成正相關(guān);上調(diào)mi R-199a-3p表達(dá)水平能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性表型表達(dá),反之亦然;mi R-199a-3p通過對其靶基因ZHX1的調(diào)控參與了胃癌增殖發(fā)展過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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1 王振強;miR-199a-3p通過抑制ZHX1的表達(dá)調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的研究[D];上海交通大學(xué);2015年

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本文編號：2381889