【摘要】：【研究背景與目的】胃癌在世界范圍內(nèi)屬于常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率位列惡性腫瘤的第二位,我國胃癌患者中主要以進展期胃癌患者為主。雖然目前治療胃癌的策略方案逐漸提升,然而進展期胃癌患者接受相關胃癌標準根治術后的五年生存率仍無較大改觀,究其原因可能在于胃癌發(fā)生的具體病因及發(fā)病機制尚未闡明。因而,進一步研究胃癌發(fā)生發(fā)展的相關分子生物學基礎,闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的發(fā)病機理將有助于提高胃癌的診斷準確性、提供新穎有效的治療手段和改善胃癌患者的預后等。micro RNA(mi RNA)是一類長度為20~24nt的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA,通過與靶基因m RNA 3’端非翻譯區(qū)(3’UTR)以完全或不完全方式結(jié)合從而導致靶基因m RNA發(fā)生降解和/或抑制靶基因m RNA翻譯,進而對靶基因編碼的蛋白進行調(diào)控。近年研究表明,mi RNA可以參與調(diào)控包括細胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移等腫瘤細胞生物學行為。Micro RNA在胃癌中的表達情況及其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制目前尚未完全闡明。前期研究中,采用mi RNA芯片和定量RT-PCR的方法,分析了180例胃癌病人和80例健康對照的血漿標本,發(fā)現(xiàn)胃癌病人血漿中mi R-199a-3p的含量顯著高于健康對照。同時我們檢測分析了9株胃癌細胞株與6例正常胃黏膜上皮mi RNA表達譜的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn):mi R-199a-3p在胃癌細胞株中的表達均顯著高于其在正常胃黏膜上皮中的表達。mi R-199a-3p在胃癌細胞株中的表達明顯上調(diào),提示其可能作為促癌性mi RNA參與促進胃癌的發(fā)展過程。然而,其在胃癌中的表達及其具體生物學功能和機制尚不明確。因此,本研究旨在進一步研究mi R-199a-3p與胃癌生物學特性之間的關系,闡明其在胃癌發(fā)病中的作用機制�！静牧吓c方法】(1)應用q RT-PCR方法對mi R-199a-3p在6株胃癌細胞株與永生化胃黏膜細胞GES-1中的表達水平進行驗證后,進一步采用q RT-PCR檢測其在52例胃癌及其相對應癌旁組織中的表達水平,分析其與胃癌臨床病理特點之間的關系。(2)采用mi R-199a-3p mimics與mi R-199a-3p逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體上調(diào)胃癌細胞株SGC-7901中mi R-199a-3p的表達水平,以及mi R-199a-3p inhibitors下調(diào)NCI-N87細胞株mi R-199a-3p的表達水平,觀察其對胃癌細胞生物學行為的影響;(3)應用生物信息學預測mi R-199a-3p靶基因,進而結(jié)合雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測,q RT-PCR和免疫印跡的方法,篩選并驗證mi R-199a-3p作用的靶基因,初步闡明mi R-199a-3p的參與胃癌發(fā)展的相關生物學分子機制�！窘Y(jié)果】q RT-PCR檢測結(jié)果顯示,mi R-199a-3p在胃癌細胞株中的表達明顯高于其在GES-1中的表達水平。mi R-199a-3p在52例胃癌組織中的平均表達水平顯著高于其配對癌旁組織,且胃癌組織mi R-199a-3p表達水平與腫瘤組織侵襲程度及TNM分期存在顯著相關性。上調(diào)mi R-199a-3p表達水平可顯著提高胃癌細胞株SGC-7901、NCI-N87體外增殖、克隆形成及體內(nèi)成瘤能力,同時抑制細胞凋亡發(fā)生;下調(diào)mi R-199a-3p可以逆轉(zhuǎn)上述生物學行為。生物信息學預測分析提示轉(zhuǎn)錄抑制因子ZHX1的m RNA的3’UTR含有mi R-199a-3p直接作用靶基因序列,雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測進一步證實了ZHX1為mi R-199a-3p直接靶基因,q RT-PCR及免疫組化證實mi R-199a-3p對ZHX1蛋白表達的調(diào)控發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平�！窘Y(jié)論】mi R-199a-3p在胃癌細胞和組織中表現(xiàn)為高表達狀態(tài),其表達水平與腫瘤組織侵襲范圍及TNM分期成正相關;上調(diào)mi R-199a-3p表達水平能促進胃癌細胞的惡性表型表達,反之亦然;mi R-199a-3p通過對其靶基因ZHX1的調(diào)控參與了胃癌增殖發(fā)展過程。
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【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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1 王振強;miR-199a-3p通過抑制ZHX1的表達調(diào)控胃癌細胞增殖和凋亡的研究[D];上海交通大學;2015年

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本文編號：2381889