發(fā)布時(shí)間：2018-12-15 19:46

【摘要】：目的用Has-miR-100-3p抑制劑的慢病毒來(lái)建立穩(wěn)定感染人非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)A549細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究miR-100在NSCLC細(xì)胞中的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法用has-miR-100-3p抑制劑的重組慢病毒液,以其最適濃度感染A549細(xì)胞,獲得穩(wěn)定感染慢病毒的A549細(xì)胞株。熒光顯微鏡觀察細(xì)胞感染效率,實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈鎖反應(yīng)(qRT-PCR)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測(cè)穩(wěn)定感染慢病毒的A549細(xì)胞株中miR-100的表達(dá)量和細(xì)胞株中綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)情況。結(jié)果熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光在細(xì)胞中表達(dá)。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,感染抑制劑的A549細(xì)胞中miR-100的表達(dá)量顯著減少;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染組細(xì)胞中均有GFP的表達(dá)。結(jié)論獲得了has-miR-100-3p抑制劑的慢病毒穩(wěn)定感染的A549細(xì)胞株,該細(xì)胞株中內(nèi)源性miR-100的表達(dá)下調(diào)。
[Abstract]:Objective to establish a stable (NSCLC) A549 cell line infected with human non-small cell lung cancer (NSCLC) by lentivirus with Has-miR-100-3p inhibitor, and to lay a foundation for further study of the mechanism of miR-100 in NSCLC cells. Methods A549 cells were infected with the recombinant lentivirus solution of has-miR-100-3p inhibitor and the stable lentivirus-infected A549 cell line was obtained. The efficiency of cell infection was observed by fluorescence microscope. Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) and flow cytometry (FCM) were used to detect the expression of miR-100 in stable lentivirus A549 cell line and the expression of green fluorescent protein (GFP) in the cell line. Results the expression of green fluorescence was observed in A549 cells under fluorescence microscope. The results of qRT-PCR assay showed that the expression of miR-100 was significantly decreased in A549 cells with infection inhibitor, and the expression of GFP was detected by flow cytometry. Conclusion Lentivirus stable infected A549 cell line with has-miR-100-3p inhibitor was obtained, and the expression of endogenous miR-100 was down-regulated in this cell line.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81572749)
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2381191