【摘要】：研究背景及目的:腫瘤的細(xì)胞治療屬于腫瘤生物治療范疇,旨在通過應(yīng)用免疫學(xué)原理和方法,調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)從而達(dá)到治療腫瘤的目的。按照不同機(jī)制可分為主動性和過繼性免疫治療兩大類,被認(rèn)為是繼手術(shù)、放化療之后的又一腫瘤綜合治療方法。原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer,PLC)是指發(fā)生于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤,主要包括原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)和肝細(xì)胞癌-肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌混合型等不同病理類型,其中HCC約占原發(fā)性肝癌的90%。HCC是我國發(fā)生率最高的惡性腫瘤之一,惡性程度較高,發(fā)病一般非常隱匿,確診時大多數(shù)患者已達(dá)BCLC中晚期,從而失去了根治性治療的機(jī)會,預(yù)后較差。因此HCC的免疫治療已成為醫(yī)學(xué)界的研究熱點。本研究采用多靶點抗原肽自體免疫細(xì)胞治療技術(shù)(multiple antigen stimulating cellular therapy,MASCT)誘導(dǎo)成熟樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)和細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),將成熟DC和CTL回輸?shù)交颊唧w內(nèi),旨在探索MASCT治療HCC誘導(dǎo)患者體內(nèi)免疫應(yīng)答研究及聯(lián)合TACE的臨床療效。研究方法:1.MASCT誘導(dǎo)原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)免疫應(yīng)答研究分離HCC患者PBMC,貼壁細(xì)胞培養(yǎng)分化為非成熟DC,并負(fù)載14種抗原肽,加入促成熟因子培養(yǎng)分化為抗原提呈的成熟DC,成熟DC與非貼壁細(xì)胞共培養(yǎng),分化形成抗原特異性CTL。用免疫熒光的方法分析抗原肽是否能被DC內(nèi)化以及進(jìn)入胞內(nèi)的分布情況,并對回輸?shù)腄C及CTL進(jìn)行細(xì)胞表型及細(xì)胞因子檢測。用HLA-A2+患者 CTL 和 HCC 細(xì)胞系 HepG2 細(xì)胞(HLA-A2+)、HuH-7 細(xì)胞(HLA-A2-)分別作為效靶細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞殺傷實驗,分析CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的HLA限制性。前瞻性納入13例HCC根治術(shù)后患者,每個患者預(yù)計接受3個療程MASCT治療,治療期間按時隨訪,患者被診斷腫瘤進(jìn)展,立即終止研究,轉(zhuǎn)為傳統(tǒng)治療�；颊唠S訪期間,采集患者PBMC,分析治療前后體內(nèi)免疫應(yīng)答情況,分別進(jìn)行(1).T細(xì)胞亞群檢測;(2).抗原特異性T細(xì)胞增殖(Edu染色)及IFN-y水平測定;(3).各抗原單肽特異性免疫應(yīng)答檢測。2.MASCT聯(lián)合TACE治療原發(fā)性肝細(xì)胞癌的臨床療效研究回顧性分析2010-15年南方醫(yī)院肝病中心收治的66例接受TACE治療的HCC患者,按是否聯(lián)合MASCT治療分為聯(lián)合治療組(32例)和單純TACE組(34例),單純TACE組采用TACE治療,聯(lián)合治療組在TACE間歇期進(jìn)行MASCT治療。主要觀察指標(biāo)為兩組患者的無進(jìn)展生存期(PFS)和總生存期(OS)。探索聯(lián)合MASCT治療能否提高TACE的療效,延長PFS和OS。研究結(jié)果:1.MASCT成功誘導(dǎo)培養(yǎng)mDC和CTL,多次治療后可改善HCC患者體內(nèi)免疫抑制狀況,誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答經(jīng)過上述MASCT細(xì)胞培養(yǎng)過程,患者每次接受皮下注射的DC平均2.23 ×107,這些細(xì)胞高表達(dá)DC成熟信號分子,表現(xiàn)出完整的免疫功能性質(zhì)。此外,這些DC分泌高水平促炎因子IL12,低水平免疫抑制因子IL10。免疫熒光試驗顯示,抗原長肽能有效地被imDC內(nèi)化,主要定位于細(xì)胞質(zhì)而非溶酶體�；颊呙看谓邮芑剌�?shù)腃TL平均6.63 × 109,這些細(xì)胞幾乎全是CD3+T細(xì)胞,大部分為CD8+T細(xì)胞,小部分為CD4+和CD3+CD56+(NKT)細(xì)胞,極少量的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)。此外CTL上清中檢測到一定量的IFN-y和TNF-α,極少量免疫抑制因子IL10和IL4。產(chǎn)生于HLA-A2+患者的CTL對HepG2細(xì)胞(HLA-A2+)表現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞殺傷活性相對于HuH-7細(xì)胞(HLA-A2-)。MASCT治療后患者不良反應(yīng)少,多次MASCT治療后,患者外周血NKT細(xì)胞,CD56+NKG2D+細(xì)胞,和效應(yīng)T細(xì)胞比例上調(diào),Treg細(xì)胞比例持續(xù)下調(diào)。此外,T細(xì)胞特異性增殖及分泌IFN-γ的能力均顯著提高,T細(xì)胞對HCC抗原肽庫及多種抗原單肽產(chǎn)生了特異性免疫應(yīng)答,且未復(fù)發(fā)患者PBMC的特異性免疫應(yīng)答水平顯著高于復(fù)發(fā)患者。2.MASCT治療可以顯著提高TACE的療效,延長PFS和OS。聯(lián)合治療組和單純TACE組中位PFS分別為9.5個月和5.5個月,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.001);聯(lián)合治療組和單純TACE組中位OS分別為19.5個月和10.5個月,兩組對比有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.033)。是否接受MASCT治療、治療前AFP水平、門靜脈侵犯、ECOG評分是影響HCC患者PFS的獨立預(yù)后因素;而是否接受MASCT治療、治療前總膽紅素水平、門靜脈侵犯是影響OS的獨立預(yù)后因素。研究結(jié)論:1.本研究表明MASCT技術(shù)可成功誘導(dǎo)培養(yǎng)mDC及CTL,并可改善HCC患者體內(nèi)免疫抑制狀態(tài),誘導(dǎo)針對腫瘤抗原肽的特異性免疫應(yīng)答,且.會隨著治療次數(shù)的增加而增強(qiáng)應(yīng)答。2.MASCT治療可以顯著提高TACE的療效,延長PFS和OS。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2372941