【摘要】：乳腺癌是中國女性所患的惡性腫瘤中發(fā)病率最高的癌癥。目前乳腺癌的綜合治療明顯提高了乳腺癌的臨床療效,但很多病人仍因癌癥的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療抵抗而死亡。戰(zhàn)勝乳腺癌,尤其是進(jìn)展期乳腺癌的最終目標(biāo)是克服治療抵抗和避免癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。所以尋找乳腺癌的增殖、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及治療抵抗等生物學(xué)特征的相關(guān)因素和機(jī)制成為首要任務(wù)。乳腺癌干細(xì)胞(BCSCs)是乳腺腫瘤中的一部分細(xì)胞群,具有干細(xì)胞特性,如自我更新、高度增殖和多向分化等。大量證據(jù)表明BCSCs是癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療抵抗的原因。各種干細(xì)胞相關(guān)通路調(diào)控BCSCs的生物學(xué)功能。其中最主要的Wnt/β-catenin在乳腺癌組織,尤其在BCSCs中異�；罨�,能啟動多種與乳腺癌起始、發(fā)展相關(guān)基因的表達(dá),且是維持BCSCs增殖的關(guān)鍵因素。β-catenin是調(diào)節(jié)細(xì)胞附著或脫離的細(xì)胞動力學(xué)粘著連接的一個重要組成部分,既是Wnt信號通路的主要調(diào)控因子,又是細(xì)胞間聯(lián)系的一種接合蛋白。實驗證明誘導(dǎo)Wnt-l及β-catenin的高表達(dá)能提高小鼠乳腺腫瘤中BCSCs的比例。已發(fā)現(xiàn)β-catenin和其下游目標(biāo)基因如cyclin D1和c-my在乳腺癌中異常表達(dá)。因此,特異性阻斷BCSCs中Wnt/β-catenin和其相關(guān)基因?qū)χ委熑橄侔┚哂兄匾獌r值。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是長度約22 nt的內(nèi)源性短鏈RNA,可通過與目標(biāo)m RNA的3’UTR互補(bǔ)結(jié)合后調(diào)節(jié)靶基因的翻譯和表達(dá)。所以,micro RNA和編碼結(jié)構(gòu)性和調(diào)節(jié)性蛋白的目標(biāo)m RNA所組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò),調(diào)控個體發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖及凋亡以及腫瘤的形成。鑒于Wnt/β-catenin是BCSCs的重要調(diào)控途徑,目前已發(fā)現(xiàn)一些micro RNA可通過抑制β-catenin的表達(dá),調(diào)控Wnt/β-catenin活性,進(jìn)而調(diào)節(jié)BCSCs。目前尚未見mi R-1對BCSCs中Wnt/β-catenin的調(diào)控研究。鑒于此,本課題研究mi R-1通過調(diào)控Wnt/β-catenin,影響B(tài)CSCs干細(xì)胞特性的作用機(jī)制以及乳腺癌相關(guān)基因與乳腺癌生物學(xué)行為的關(guān)系。具體工作如下:本實驗首先通過mi RNA基因芯片研究了BCSCs和非CSC腫瘤細(xì)胞中與VI Wnt/β-catenin相關(guān)的mi RNA表達(dá)譜,得出相比于非CSC腫瘤細(xì)胞,在BCSCs中有14個mi RNAs表達(dá)上調(diào),13個mi RNAs表達(dá)下調(diào)。其中mi R-1在BCSCs中低表達(dá)。然后通過定量RT-PCR分析了mi R-1在不同亞型乳腺癌組織及血清樣本中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)mi R-1表達(dá)與乳腺癌的侵襲力呈負(fù)相關(guān)。為了進(jìn)一步研究mi R-1在BCSCs的功能,我們在MCF-7和SKBR3細(xì)胞和其中分選出的CSCs中轉(zhuǎn)染mi R-1mimic和mi R-1inhibitor,增強(qiáng)或抑制mi R-1的表達(dá)。流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)MCF-7和SKBR3細(xì)胞中,增強(qiáng)mi R-1的表達(dá)降低了SKBR3/CSCs的百分比,抑制mi R-1的表達(dá)增加了MCF-7/CSCs的百分比,可見mi R-1的過表達(dá)降低了乳腺癌細(xì)胞系中CSC的比例。mi R-1在Wnt/β-catenin中的可能目標(biāo)用生物信息分析和熒光素酶分析明確。雙熒光素酶報告基因檢測和western blot結(jié)果表明,增強(qiáng)mi R-1的表達(dá)明顯減少了293T細(xì)胞中Frizzled 7、TNKS2(Tankyrase-2)調(diào)控的熒光素酶活性,并降低了體外BCSCs中Frizzled7,TNKS2,c-Myc,Oct4(Octamer Binding Transcription Factor 4)和Nanog的表達(dá),同時降低了β-catenin的核質(zhì)比和β-catenin-依賴的螢光素活性,明確了mi R-1抑制Wnt/β-catenin,從而降低BCSCs的干細(xì)胞性。細(xì)胞增殖和遷移實驗明確mi R-1抑制體外乳腺腫瘤干細(xì)胞的增殖,遷移能力。移植瘤乳腺癌模型顯示增強(qiáng)mi R-1的表達(dá)抑制了植入MCF-7/CSCs的生長,而抑制mi R-1的表達(dá)促進(jìn)了體內(nèi)植入MCF-7/CSCs的生長。這些數(shù)據(jù)(實驗研究1.1)表明,mi R-1通過靶向Frizzled 7及TNKS2抑制了Wnt/β-catenin,從而下調(diào)了BCSCs的干細(xì)胞性、增殖和遷移。鑒于BCSCs是乳腺癌發(fā)生,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源,基于mi R-1的阻斷療法有望在預(yù)防和阻斷乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中起到重要作用。我們進(jìn)一步研究了Wnt/β-catenin關(guān)鍵因子β-catenin、cyclin D1、c-myc表達(dá)與乳腺癌生物學(xué)行為的相關(guān)性(實驗研究1.2)。發(fā)現(xiàn)乳腺癌組的β-catenin異常表達(dá)率、cyclin D1和c-myc陽性表達(dá)率均明顯高于乳腺增生組的對應(yīng)指標(biāo)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與cyclin D1、c-myc的表達(dá)有關(guān)。乳腺癌β-catenin異常表達(dá),與cyclin D1和c-myc陽性表達(dá)有相關(guān)。Western blot檢測方法明確與乳腺癌增生組織相比,乳腺癌組織、乳腺癌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的β-catenin表達(dá)水平明顯升高,乳腺癌組織細(xì)胞核中β-catenin的蛋白水平高于細(xì)胞質(zhì)。這些數(shù)據(jù)提示乳腺癌的發(fā)生可能與β-catenin異常表達(dá),cyclin D1和c-myc陽性表達(dá)有關(guān),并且cyclin D1、c-myc可能被β-catenin激活。Lipase member H蛋白與Wnt/β-catenin一樣是重要的腫瘤調(diào)控因素。在人類中Lipase member H蛋白是LIPH基因編碼的酶,參與多種生物學(xué)過程,包括血小板凝集,平滑肌收縮,細(xì)胞增殖的刺激。雖現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)LIPH m RNA在腸、肺和胰腺特異性表達(dá),但在乳腺癌中的表達(dá)尚不明確。我們研究了Lipase member H與乳腺癌生物學(xué)行為的關(guān)系(實驗研究1.3),尋找阻斷乳腺癌增殖的新靶點。發(fā)現(xiàn)與癌旁組織相比,乳腺癌組織高表達(dá)Lipase member H蛋白,明顯相關(guān)于組織學(xué)分級,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步分析后Lipase member H蛋白的表達(dá)被認(rèn)定為是乳腺癌的獨立預(yù)后因子。表明Lipase member H蛋白的表達(dá)是不良預(yù)后預(yù)測因素,Lipase member H蛋白有望成為乳腺癌的治療目標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2369761