【摘要】：目的：研究異鼠李素對非小細胞肺癌(NSCLC)細胞生長的抑制作用及相關分子機制。方法：用異鼠李素處理非小細胞肺癌(NSCLC)細胞系A549,通過MTT和單克隆形成實驗研究細胞生長和增殖。肺癌細胞的凋亡可通過annexin V FITC/PI流失細胞儀檢測。線粒體膜電位可通過JC-1試驗檢測。EGFP-LC3易位和MDC染色用來評估細胞自噬的發(fā)生。結果：用異鼠李素處理非小細胞肺癌(NSCLC)細胞能顯著抑制細胞增殖和克隆的形成,異鼠李素處理也能誘導A549細胞中凋亡細胞死亡數(shù)目在時間和劑量依賴的方式下顯著增加。更進一步的研究表明：發(fā)現(xiàn)通過線粒體依賴途徑的細胞凋亡過程是通過改變線粒體膜跨膜電位,釋放細胞色素C和激活半胱天冬酶來進行的,值得注意的是,用異鼠李素處理A549細胞時誘導自噬體形成和LC3-II蛋白的表達。更有甚者,與自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)和羥基氯喹(CQ)共處理能顯著抑制異鼠李素誘導的自噬,并且在體內(nèi)和體外都能顯著增加異鼠李素誘導的凋亡細胞中死細胞的數(shù)目。結論：本課題的研究結果表明：異鼠李素是一個潛在的抗肺癌藥物,另外,研究結果揭示出：抑制自噬也許是提高異鼠李素對非小細胞肺癌(NSCLC)化學療效一個行之有效的策略!
[Abstract]:Aim: to study the inhibitory effect of isorhamnetin on the growth of (NSCLC) cells in non small cell lung cancer (NSCLC) and its molecular mechanism. Methods: Non-small cell lung cancer cell line A549 was treated with isorhamnetin. The growth and proliferation of A549 cells were studied by MTT and Monoclonal formation. Apoptosis of lung cancer cells can be detected by annexin V FITC/PI loss cell analyzer. Mitochondrial membrane potential can be detected by JC-1 assay. EGFP-LC3 translocation and MDC staining are used to evaluate autophagy. Results: treatment with isorhamnetin could significantly inhibit cell proliferation and clone formation in (NSCLC) cells of non-small cell lung cancer, and isorhamnetin treatment could significantly increase the number of apoptotic cells in A549 cells in a time-and dose-dependent manner. Further studies have shown that the process of cell apoptosis through mitochondrial dependent pathway is carried out by changing mitochondrial membrane transmembrane potential, releasing cytochrome C and activating cysteinase. Autophagy formation and LC3-II protein expression were induced in A549 cells treated with isorhamnetin. Moreover, co-treatment with autophagy inhibitor 3-methyladenine (3-MA) and hydroxychloroquine (CQ) significantly inhibited isorhamne-induced autophagy. Both in vivo and in vitro, the number of dead cells in isorhamne-induced apoptotic cells was significantly increased. Conclusion: the results of this study indicate that isorhamnetin is a potential anti-lung cancer drug, in addition, The results suggest that inhibition of autophagy may be an effective strategy to improve the chemical effect of isorhamnetin on (NSCLC) in non-small cell lung cancer (NSCLC).
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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本文編號：2368308