【摘要】：研究目的：食管鱗癌是一種常見的預(yù)后較差的胃腸道惡性腫瘤,盡管目前手術(shù)、放療及化療等手段不斷改進,食管鱗癌患者的5年生存率仍不足30%。食管鱗癌預(yù)后主要與腫瘤侵犯的深度、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目、遠處轉(zhuǎn)移與否等有明顯相關(guān)性。除了這些臨床病理因素外,目前用于預(yù)測食管鱗癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有關(guān)的分子標(biāo)記物研究也取得了很大進展,食管癌分子標(biāo)記物可以進行食管癌早期檢測或者區(qū)分食管鱗癌高風(fēng)險及低風(fēng)險病人以得到最佳治療。PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)又名TEP1或者MMAC1,位于染色體10q23.3, PTEN蛋白的脂類磷酸酶活性主要作用機制是可將3,4,5-三磷酸鹽(PIP3)去磷酸化形成4,5-二磷酸鹽(PIP2),進而抑制PIP3與PDK1/Akt的絲蘇氨酸位點結(jié)合,此作用導(dǎo)致了Akt及其下游通路的激活受抑制。PTEN蛋白通過此拮抗PI3K/Akt信號通路而起到了腫瘤抑制作用,因此其被認為是重要的抑癌基因。目前很多研究表明PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)與前列腺癌、乳腺癌及腦惡性膠質(zhì)瘤等有明顯相關(guān)性,但是PTEN在食管鱗癌中的表達情況及其與食管鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系研究仍存在矛盾的結(jié)論,仍需進一步的研究證實其相關(guān)性。除此之外,PTEN失表達與食管鱗癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)關(guān)系目前仍無任何報道。PTEN基因啟動子上具有富含CpG島的區(qū)域,為DNA甲基化提供了一種可能。目前多項研究表明PTEN啟動子的甲基化與多種腫瘤組織中的PTEN蛋白低表達有明顯相關(guān)性,例如低分化的腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤及肺癌等中均發(fā)現(xiàn)PTEN啟動子甲基化是參與PTEN表達降低的一種機制。但是目前關(guān)于PTEN甲基化在食管鱗癌中的報道較少,僅有Pan研究了哈薩克斯坦族的食管鱗癌病人的甲基化情況,其發(fā)現(xiàn)PTEN甲基化水平在食管鱗癌病人(中位甲基化率10%)中明顯高于正常人(中位甲基化率6.0%),男性食管鱗癌病人的PTEN甲基化水平明顯高于女性,同時PTEN甲基化水平與食管鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度有關(guān)(p0.05),但是目前仍無食管鱗癌中PTEN甲基化與PTEN表達水平相關(guān)性的研究。針對以上仍未解決的問題,本論文旨在探討并明確食管鱗癌中PTEN的表達情況及其與食管鱗癌患者預(yù)后、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)及PTEN啟動子甲基化之間的相關(guān)性。研究方法：本研究主要納入了2006年1月-2007年12月期間在山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院胸外科行胸中段食管鱗癌切除的74例患者。利用免疫組化及實時定量PCR (qRT-PCR)測定了食管鱗癌及癌旁正常食管上皮PTEN的表達情況(蛋白及mRNA水平),研究了食管鱗癌中PTEN蛋白表達情況與各臨床病理因素的相關(guān)性,評估了PTEN蛋白陰性表達與食管鱗癌患者生存率及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。為了驗證我們的臨床結(jié)論,我們以慢病毒為載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染食管鱗癌細胞系(Eca109),以穩(wěn)定抑制PTEN的表達水平。然后分析不同處理組的細胞增殖實驗、細胞遷移實驗、細胞侵襲實驗等體外實驗的變化情況；同時我們將不同處理組的食管鱗癌細胞系注射入裸鼠皮下組織中形成移植瘤生長模型,分析觀察了不同組中裸鼠移植瘤的生長速度變化情況。我們還利用Western Blot研究了可能參與PTEN作用的下游指標(biāo)(FAK及p-FAK)的表達變化情況。在甲基化研究方面,我們利用甲基化特異性PCR(MSP)分析了74例食管鱗癌樣本及四種食管鱗癌細胞系中的PTEN甲基化情況,檢測了PTEN甲基化在食管鱗癌患者預(yù)后及各臨床病理因素中的關(guān)系。在臨床樣本水平,我們對PTEN的甲基化狀態(tài)及其與PTEN表達情況的關(guān)系進行了詳細分析；同時在食管鱗癌細胞系水平,我們還利用5-氮雜胞苷處理PTEN甲基化陽性的食管鱗癌細胞系(Eca9706),分析了經(jīng)5-氮雜胞苷處理后PTEN表達情況的變化及甲基化狀態(tài)的變化情況。結(jié)果：食管鱗癌組織中的PTEN mRNA水平明顯低于癌旁正常食管上皮組織(p0.001),41例(55.4%)的食管鱗癌組織呈PTEN mRNA低表達(相比于癌旁正常食管上皮),38例(51.4%)的食管鱗癌組織呈PTEN蛋白陰性表達；臨床病理因素分析中,PTEN蛋白陰性表達與腫瘤的侵犯深度(T分期)及淋巴結(jié)侵犯情況(N分期)有明顯相關(guān)性(p=0.005及p=0.021)；單因素分析表明PTEN蛋白陰性表達與患者5年生存率及3年淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率明顯相關(guān)(p=0.001及p=0.019),但多因素回歸分析表明PTEN蛋白陰性表達并不是食管鱗癌患者5年生存率及3年淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率的獨立預(yù)后因素(p0.05)；慢病毒穩(wěn)定抑制PTEN表達的食管鱗癌細胞系相比于陰性對照組細胞系的細胞增殖速度、細胞遷徙、細胞侵襲能力明顯增強(p0.05),裸鼠體內(nèi)移植瘤生長實驗表明穩(wěn)定抑制PTEN表達后移植瘤的生長速度明顯增強(p0.05)。機制研究方面,Western Blot提示不同處理組中FAK及p-FAK均無明顯表達變化,表明FAK及p-FAK不是參與PTEN機制的主要指標(biāo),可能其他通路或者因子參與PTEN在食管鱗癌中的作用機制,仍需進一步研究明確。甲基化研究方面,僅有14例(18.9%)的食管鱗癌組織及1例食管鱗癌細胞系(EC9706)存在PTEN啟動子的甲基化；PTEN甲基化與各臨床病理因素及臨床預(yù)后無明顯相關(guān)性；詳細分析PTEN甲基化狀態(tài)及PTEN mRNA/蛋白的關(guān)系發(fā)現(xiàn)PTEN甲基化是PTEN失表達(mRNA及蛋白水平)的一種可能機制,經(jīng)5-氮雜胞苷處理后,PTEN的甲基化狀態(tài)被逆轉(zhuǎn),且PTEN的mRNA及蛋白表達水平明顯升高,此在細胞水平上證實了PTEN甲基化與PTEN表達水平的關(guān)系。結(jié)論及意義：食管鱗癌組織中存在PTEN的低表達情況且比較普遍；盡管PTEN蛋白陰性表達不是患者生存率及淋巴結(jié)復(fù)發(fā)率的獨立危險因素,但是PTEN蛋白陰性表達與食管鱗癌患者生存率及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率有明顯相關(guān)性,未來PTEN蛋白陰性表達可能作為預(yù)測食管鱗癌預(yù)后的一種有效的分子標(biāo)記物；臨床分析及細胞試驗均表明食管鱗癌中PTEN甲基化是PTEN低表達的一種可能機制,但是因為PTEN啟動子甲基化率在食管鱗癌中比較低,其可能不是食管鱗癌中導(dǎo)致PTEN低表達的主要機制,可能其他的一些機制,如轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)或者翻譯水平調(diào)節(jié)等是導(dǎo)致PTEN低表達的主要機制,其仍需進一步的研究進行證實。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李勁松;楊琨;王建軍;;PTEN蛋白在食管癌中的表達及臨床意義[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

2 吳顏暉,陳漢春,劉新發(fā),李新梅,曹燕飛;中國人食管鱗癌10q23微衛(wèi)星不穩(wěn)定和雜合性缺失初步探討[J];中國腫瘤臨床;2004年08期

3 安繼業(yè),王立東,賀新偉,王啟鳴,范宗民,高珊珊,郭花芹;河南食管癌高發(fā)區(qū)食管和賁門癌組織中PTEN蛋白的表達[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年06期

，

本文編號：2367144