【摘要】：研究背景結直腸癌是最常見的腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率較高,預后較差[l]。我國結直腸癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤中位于第5位[2]。結直腸癌的發(fā)生發(fā)展與遺傳物質的改變相關,在過去的30年間,分子遺傳學研究揭示了結直腸癌發(fā)病機制中的一些重要發(fā)現(xiàn)[3],新的癌基因和抑癌基因均參與了結直腸癌形成與進展。DNA元件百科全書計劃(Encyclopedia of DNA elements, ENCODE)揭示了人類基因組中只有不到2%的基因為編碼基因,其余均為非編碼基因[4]。根據核苷酸長度是否大于200 nt,非編碼RNA(non-protein coding RNA, ncRNA)分為長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和小的ncRNA。目前已發(fā)現(xiàn)一些腫瘤易感性與腫瘤相關基因座位上的lncRNA有關[5],lncRNA的差異表達能夠影響到腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究目的探討長鏈非編碼RNA Linc00467(long intergenic non-protein coding RNA 467)和ZFAS1(ZNFX1 antisense RNA 1)在結直腸癌中的表達和生物學功能實驗方法通過實時熒光定量PCR實驗在11對人結直腸癌組織和癌旁正常組織中檢測25條候選lncRNA在結直腸癌組織中的表達水平,確定差異表達較明顯的lncRNA Linc00467和ZFAS1作為目標基因進行研究。進一步擴大樣本量,在總共67對人結直腸癌組織和癌旁正常組織以及8株結腸癌細胞系和1株結腸上皮細胞系中檢測Linc00467的表達水平。統(tǒng)計納入的67例患者的臨床病理資料,分析Linc00467的表達水平與患者臨床病理學特征之間的關系。通過Transwell遷移實驗、MTS實驗和克隆形成實驗檢測Linc00467對結腸癌細胞遷移、增殖和集落形成等行為的影響。在67對人結腸癌組織和癌旁正常組織以及8株結腸癌細胞系和1株結腸上皮細胞系中檢測ZFAS1的表達水平。統(tǒng)計納入的67例患者的臨床病理資料,分析ZFAS1的表達水平與患者臨床病理學特征之間的關系。通過Transwell遷移實驗、MTS實驗和克隆形成實驗檢測ZFAS1對結腸癌細胞遷移、增殖和集落形成等能力的影響。敲低ZFAS1,檢測ZFAS1的潛在靶基因ZNFX1 (zinc finger,NFX1-type containing 1)在結腸癌細胞系中的mRNA水平及蛋白水平的表達量。過表達ZNFX1,通過Transwell遷移實驗、MTS實驗和克隆形成實驗檢測ZNFX1對結腸癌細胞遷移、增殖和集落形成等能力的影響。截短法構建ZNFX1含有AAA結構域的基因克隆,過表達該載體后進行Transwell遷移實驗、MTS實驗和克隆形成實驗,通過檢測ZNFX1不同區(qū)段發(fā)揮功能的情況來推測哪個區(qū)段在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到作用。實驗結果我們從組織和細胞水平證明Linc00467和ZFAS1在結直腸癌中高表達。但并沒有發(fā)現(xiàn)Linc00467和ZFAS1的表達豐度與結直腸癌患者的臨床病理特征之間存在顯著相關性。通過克隆形成實驗證明Linc00467和ZFAS1可以促進結腸癌細胞的集落形成能力；通過MTS實驗證明Linc00467和ZFAS1可以促進結腸癌細胞的增殖能力;通過Transwell實驗證明Linc00467和ZFAS1可以促進結腸癌細胞的遷移能力。ZFAS1是ZNFX1的反義轉錄本,兩者為頭對頭轉錄。ZFAS1可以潛在調控ZNFX1的表達,敲低ZFAS1引起ZNFX1的表達量增加。ZNFX1在結腸癌細胞系中表達下調,過表達ZNFX1可以抑制結腸癌細胞的遷移、增殖和集落形成能力。實驗結論Linc00467和ZFAS1在結直腸癌中高表達,可以促進結腸癌的遷移和生長。ZFAS1的作用可能與抑制其臨近基因ZNFX1的表達與生物學功能相關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：2345591