【摘要】：研究背景結(jié)直腸癌是最常見(jiàn)的腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率較高,預(yù)后較差[l]。我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤中位于第5位[2]。結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展與遺傳物質(zhì)的改變相關(guān),在過(guò)去的30年間,分子遺傳學(xué)研究揭示了結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制中的一些重要發(fā)現(xiàn)[3],新的癌基因和抑癌基因均參與了結(jié)直腸癌形成與進(jìn)展。DNA元件百科全書(shū)計(jì)劃(Encyclopedia of DNA elements, ENCODE)揭示了人類(lèi)基因組中只有不到2%的基因?yàn)榫幋a基因,其余均為非編碼基因[4]。根據(jù)核苷酸長(zhǎng)度是否大于200 nt,非編碼RNA(non-protein coding RNA, ncRNA)分為長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和小的ncRNA。目前已發(fā)現(xiàn)一些腫瘤易感性與腫瘤相關(guān)基因座位上的lncRNA有關(guān)[5],lncRNA的差異表達(dá)能夠影響到腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究目的探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA Linc00467(long intergenic non-protein coding RNA 467)和ZFAS1(ZNFX1 antisense RNA 1)在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)方法通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)在11對(duì)人結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中檢測(cè)25條候選lncRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平,確定差異表達(dá)較明顯的lncRNA Linc00467和ZFAS1作為目標(biāo)基因進(jìn)行研究。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,在總共67對(duì)人結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織以及8株結(jié)腸癌細(xì)胞系和1株結(jié)腸上皮細(xì)胞系中檢測(cè)Linc00467的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)納入的67例患者的臨床病理資料,分析Linc00467的表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、MTS實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Linc00467對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移、增殖和集落形成等行為的影響。在67對(duì)人結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織以及8株結(jié)腸癌細(xì)胞系和1株結(jié)腸上皮細(xì)胞系中檢測(cè)ZFAS1的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)納入的67例患者的臨床病理資料,分析ZFAS1的表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、MTS實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZFAS1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移、增殖和集落形成等能力的影響。敲低ZFAS1,檢測(cè)ZFAS1的潛在靶基因ZNFX1 (zinc finger,NFX1-type containing 1)在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)量。過(guò)表達(dá)ZNFX1,通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、MTS實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZNFX1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移、增殖和集落形成等能力的影響。截短法構(gòu)建ZNFX1含有AAA結(jié)構(gòu)域的基因克隆,過(guò)表達(dá)該載體后進(jìn)行Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、MTS實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn),通過(guò)檢測(cè)ZNFX1不同區(qū)段發(fā)揮功能的情況來(lái)推測(cè)哪個(gè)區(qū)段在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們從組織和細(xì)胞水平證明Linc00467和ZFAS1在結(jié)直腸癌中高表達(dá)。但并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)Linc00467和ZFAS1的表達(dá)豐度與結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征之間存在顯著相關(guān)性。通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)證明Linc00467和ZFAS1可以促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的集落形成能力；通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)證明Linc00467和ZFAS1可以促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖能力;通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)證明Linc00467和ZFAS1可以促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移能力。ZFAS1是ZNFX1的反義轉(zhuǎn)錄本,兩者為頭對(duì)頭轉(zhuǎn)錄。ZFAS1可以潛在調(diào)控ZNFX1的表達(dá),敲低ZFAS1引起ZNFX1的表達(dá)量增加。ZNFX1在結(jié)腸癌細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào),過(guò)表達(dá)ZNFX1可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移、增殖和集落形成能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)論Linc00467和ZFAS1在結(jié)直腸癌中高表達(dá),可以促進(jìn)結(jié)腸癌的遷移和生長(zhǎng)。ZFAS1的作用可能與抑制其臨近基因ZNFX1的表達(dá)與生物學(xué)功能相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險(xiǎn)因素分析:復(fù)發(fā)和非復(fù)發(fā)結(jié)直腸癌的比較[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2001年12期

2 蘇森;患結(jié)直腸癌婦女后代癌癥的危險(xiǎn)性增加[J];中國(guó)腫瘤;2001年06期

3 汪一虹;在確定的法國(guó)人群中年齡<45歲結(jié)直腸癌病人與≥45歲結(jié)直腸癌病人的比較[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));2002年01期

4 李會(huì)晨;結(jié)直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2003年03期

5 李志霞;結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

6 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結(jié)直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

7 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結(jié)直腸癌臨床病理分析[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2004年01期

8 章江;;監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌非常必要[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2004年04期

9 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細(xì)胞粘附分子變異體在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及預(yù)后[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2005年07期

10 Nozawa T. ,Enomoto T. ,Koshida Y. ,M. Kuranami,王志宇;人結(jié)直腸癌黏膜下血小板源性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子特異性增強(qiáng)表達(dá)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(胃腸病學(xué)分冊(cè));2005年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 鄭樹(shù);;結(jié)直腸癌預(yù)后與轉(zhuǎn)移相關(guān)因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議全國(guó)大腸癌轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的診治研討會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結(jié)直腸癌免疫治療新進(jìn)展[A];第十一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合大腸肛門(mén)病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結(jié)直腸癌治療的進(jìn)展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結(jié)直腸癌治療的困惑之我見(jiàn)[A];第九屆全國(guó)腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會(huì)暨2011年黑龍江省醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)年會(huì)報(bào)告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結(jié)直腸癌預(yù)防[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)肛腸學(xué)會(huì)第五屆學(xué)術(shù)交流會(huì)暨新技術(shù)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會(huì)林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結(jié)直腸癌診療體會(huì)(附42例報(bào)告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

7 王啟遠(yuǎn);周長(zhǎng)江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與結(jié)直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第八屆組稿會(huì)暨急診醫(yī)學(xué)首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結(jié)直腸癌靶向治療進(jìn)展[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結(jié)直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤外科規(guī)范化診治學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 萬(wàn)德森;;進(jìn)一步提高結(jié)直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)主任委員 顧晉;分期不精確 致結(jié)直腸癌過(guò)度治療[N];健康報(bào);2012年

2 本報(bào)記者 賈巖;跨線(xiàn)治療成結(jié)直腸癌最后防線(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2012年

3 本報(bào)記者 賈巖;跨線(xiàn)治療構(gòu)筑結(jié)直腸癌最后防線(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2012年

4 本報(bào)記者 林琳;結(jié)直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結(jié)直腸癌發(fā)病高于全國(guó)[N];深圳商報(bào);2013年

6 本報(bào)記者 孫剛;預(yù)防結(jié)直腸癌：請(qǐng)管住嘴[N];解放日?qǐng)?bào);2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結(jié)直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實(shí)習(xí)生 陰浩;專(zhuān)家呼吁：結(jié)直腸癌應(yīng)多學(xué)科規(guī)范化診療[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 ;降低結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)有新療法[N];人民日?qǐng)?bào);2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結(jié)直腸癌[N];健康報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調(diào)控關(guān)系在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 任翡;MYBL2基因在結(jié)直腸癌的表達(dá)及機(jī)制的初步探討[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 吳朋;結(jié)直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學(xué)特性探究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調(diào)控結(jié)直腸癌生物學(xué)行為的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 徐興遠(yuǎn);低分子肝素對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響及相關(guān)機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 梁洪亮;miR-454在結(jié)直腸癌中的功能及其作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

7 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的作用及SEPT9檢測(cè)結(jié)直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標(biāo)志物研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

9 周智航;SEMA3F通過(guò)下調(diào)ASCL2-CXCR4軸而抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 王林;MiRNA-300對(duì)結(jié)直腸癌腫瘤侵襲和增殖的影響及其調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 顏斐斐;術(shù)后結(jié)直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

2 李斌;結(jié)直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學(xué);2009年

3 葉建杰;慈溪市結(jié)直腸癌危險(xiǎn)因素病例對(duì)照研究[D];浙江大學(xué);2008年

4 趙波;結(jié)直腸癌危險(xiǎn)因素及臨床流行病學(xué)特征的調(diào)查與分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 黎江;Oct4B1在結(jié)直腸癌干細(xì)胞中的表達(dá)及其與Twist的相關(guān)性研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

8 羅佳;二代測(cè)序分析散發(fā)性結(jié)直腸癌和息肉的基因突變[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

9 崔慧鵬;精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1）高表達(dá)與結(jié)直腸癌惡性進(jìn)展的相關(guān)性研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

10 崔娟娟;p53和nm23在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：2345591