【摘要】：目的:Hippo-YAP通路是調(diào)節(jié)細胞增殖,細胞間接觸抑制以及組織器官大小的關(guān)鍵通路之一,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。該通路中共轉(zhuǎn)錄因子YAP1由于缺少DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域,可通過結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子TEAD4從而靶定并調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄,從而實現(xiàn)對細胞增值和組織器官發(fā)育的調(diào)控作用。YAP1作為Hippo-YAP通路中的核心因子,是已經(jīng)有很多報道的原癌基因,也是目前臨床診斷和治療癌癥的重要靶點,對其細胞生物功能進行分子機制層面的深入探討,發(fā)現(xiàn)新的具有拮抗作用的信號通路具有重要意義。在現(xiàn)有的模型中,Hippo通路主要是通過蛋白磷酸化和泛素化降解機制來調(diào)控的。除此之外,在RNA調(diào)控水平上,一些Hippo通路的重要組成成分受到了選擇性剪接的調(diào)控。RNA選擇性剪接是決定蛋白多樣性的重要原因。選擇性剪接的發(fā)生依賴基因順式作用元件及其招募的反式作用因子,其中剪接因子的細胞特異性和組織特異性表達,細胞核內(nèi)外定位,及其活性影響著剪接事件的最終結(jié)果。選擇性剪接異常會導(dǎo)致蛋白功能異常,與眾多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。越來越多的證據(jù)表明RNA的異常剪接可以影響腫瘤的重要表型特征,但剪接異常的生物學(xué)影響特別是在腫瘤中的生物學(xué)影響仍然少有報道。在本實驗室前期研究中發(fā)現(xiàn),剪接因子RBM4在腫瘤中的異常表達可以促使TEAD4產(chǎn)生一種短的剪接本,命名為TEAD4-S。TEAD4-S和經(jīng)典剪接本TEAD4-FL的蛋白結(jié)構(gòu)域的不同,很可能影響到Y(jié)AP1的促癌功能。本文的研究旨在從RNA剪接調(diào)控的層面闡明TEAD4異常剪接在腫瘤中的功能及其調(diào)控Hippo-YAP通路的具體機制。方法:1.通過PCR和Western blot的實驗方法檢測TEAD4-S在H157細胞和不同組織器官中的表達情況。2.通過免疫熒光實驗技術(shù)觀察TEAD4-S的細胞定位。3.構(gòu)建四環(huán)素誘導(dǎo)穩(wěn)定表達RBM4的HEK293T細胞系,在四環(huán)素的誘導(dǎo)下通過PCR和Western blot的方法檢測RBM4對TEDA4剪接的影響。以及在不同的過表達RBM4的腫瘤細胞系中檢測其對TEAD4剪接的影響。4.通過構(gòu)建剪接報告基因、引入突變、RIP等實驗方法闡述RBM4影響TEAD4剪接的具體靶定位點。5.用免疫共沉淀實驗證明TEAD4-S是否與YAP存在相互作用。6.通過染色質(zhì)免疫共沉淀實驗驗證TEAD4-S是否仍然具有靶向DNA的功能。7.通過瞬時轉(zhuǎn)染,免疫共沉淀實驗驗證TEAD4-S是否影響了TEAD4-FL與YAP的結(jié)合能力。8.使用熒光素酶報告系統(tǒng)等方法驗證TEAD4-S對YAP共轉(zhuǎn)錄活性的影響。9.通過軟瓊脂、平板克隆、Western blot實驗評估TEAD4-S對H157,A549細胞系增殖和EMT的影響。10.建立動物模型,驗證TEAD4-S在體內(nèi)環(huán)境下對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。結(jié)果:1.TEAD4-S在H157細胞和不同組織器官中均有表達。2.TEAD4-S在核質(zhì)中均勻表達,TEAD4-FL則主要定位在細胞核中。3.RBM4的表達調(diào)控了TEAD4-S的產(chǎn)生。4.RBM4是通過CGGCCGG基序來實現(xiàn)對TEAD4剪接調(diào)控的。5.TEAD4-S C端依然具有和YAP結(jié)合的功能。6.TEAD4-S N端失去了靶向靶基因的功能。7.TEAD4-S的存在破壞了TEAD4-FL和YAP的相互作用。8.TEAD4-S可以通過拮抗TEAD4-FL來影響YAP的活性。9.TEAD4-S的過表達能夠抑制腫瘤細胞的增殖和遷移。10.在小鼠移植瘤模型中,TEAD4-S的表達可以抑制腫瘤的增長。TEAD4-S在人的腫瘤中是低表達的,并且TEAD4-S表達量高的腫瘤病人有更長的總體生存期。結(jié)論:抑癌剪接因子RBM4的高表達可以上調(diào)TEAD4-S,TEAD4-S失去了DNA靶向功能但依然可以結(jié)合YAP,進而通過拮抗TEAD4-FL抑制了YAP的活性,從而抑制了腫瘤的生長。據(jù)目前我們了解所知,這是首次報道Hippo-YAP通路可以受到RNA剪接的調(diào)控。該研究模型為我們提供了一種全新的腫瘤研究思路和策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R730.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;Hippo signaling:A hub of growth control,tumor suppression and pluripotency maintenance[J];遺傳學(xué)報;2011年10期

2 許傳銘;萬福生;;哺乳動物Hippo信號通路:腫瘤治療的新標(biāo)靶[J];遺傳;2012年03期

3 李敏睿;張盛洪;鐘碧慧;;Hippo信號通路在惡性腫瘤及干細胞中的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2013年04期

4 朱忠勝;張春林;;腫瘤中Hippo-TAZ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年03期

5 史夢婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關(guān)性研究進展[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2014年03期

6 李桂蘭;張麗;閆華超;;Hippo信號通路與腫瘤發(fā)生相關(guān)性研究進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年09期

7 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學(xué)進展;2014年03期

8 Jiliang Zhou;;An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J];The Journal of Biomedical Research;2014年04期

9 Masato Enomoto;Tatsushi Igaki;;Deciphering tumor-suppressor signaling in flies:Genetic link between Scribble/Dlg/Lgl and the Hippo pathways[J];遺傳學(xué)報;2011年10期

10 張靖;朱金水;;Hippo-YAP信號通路與胃癌相關(guān)性研究[J];國際消化病雜志;2011年04期

相關(guān)會議論文 前3條

1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 記者 胡德榮;我學(xué)者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質(zhì)YAP抑制劑[N];健康報;2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調(diào)控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 劉歡;Hippo通路效應(yīng)蛋白YAP調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的機制與功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 劉鵬;HBV preS2 通過miR-338-3p 調(diào)控Hippo通路效應(yīng)分子TAZ促進肝細胞肝癌作用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 朱國華;上調(diào)miR-130b通過滅活Hippo信號通路來增強膠質(zhì)瘤干細胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓笑;Hippo信號通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 郭鵬達;RARγ的缺失通過調(diào)控Hippo-Yap信號通路促進結(jié)直腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[D];蘇州大學(xué);2016年

7 周菁;YAP在哮喘發(fā)生過程中的表達情況及其功能探討[D];南昌大學(xué);2016年

8 鄧軍;CUL4A通過調(diào)控Hippo通路促胃癌細胞增殖和侵襲的分子機制[D];南昌大學(xué);2016年

9 李佳;Hippo信號通路在調(diào)節(jié)卵巢生殖干細胞功能和延緩卵巢衰老中的作用[D];南昌大學(xué);2016年

10 劉乃華;磷酸二酯酶5/PKG通過Hippo/TAZ信號調(diào)控前列腺癌腫瘤干細胞干性及其分子機制研究[D];浙江大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王小燕;Alcf八個氨基酸差異選擇性剪接對核定位功能的影響及其抗體制備[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陸亞紅;家蠶BmYki不同剪接體的功能研究[D];蘇州大學(xué);2016年

3 宋春暖;家蠶Hippo通路成員的全基因組鑒定與分析[D];西南大學(xué);2016年

4 王日遠;家蠶Hippo通路主基因BmYki的克隆、表達及功能初探[D];西南大學(xué);2016年

5 王曉霞;E-cadherin介導(dǎo)的麥冬皂苷B調(diào)控非小細胞肺癌Hippo通路的機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 朱羽桐;癌基因TBC1D3的功能研究[D];浙江大學(xué);2016年

7 車聰;炎性因子通過抑制胃上皮細胞中Hippo-YAP信號通路促進胃黏膜發(fā)生EMT改變[D];青島大學(xué);2016年

8 武亞楠;Hippo/TAZ信號通路在骨肉瘤耐藥過程中的機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

9 孟煥然;Hippo通路相關(guān)蛋白在卵巢癌組織中的表達及其臨床意義[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

10 蓋江南;Hippo通路在乳酸促進肺腺癌轉(zhuǎn)移中作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號：2342877