【摘要】：研究背景:肺癌是全球發(fā)病率和死亡率排在首位的癌癥,其中占絕大部分(85%)類型是非小細胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)。第一代可逆性表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs),其中最為人熟知的兩種藥物為厄洛替尼(erlotinib)和易瑞沙(gefitinib),在含有EGFR活性突變的NSCLC患者中,取得了可喜的療效,但敏感突變患者中亦有20%-30%對EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥,EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥在很大程度上限制了其在臨床上的應用。因此,如果能發(fā)現(xiàn)克服TKIs原發(fā)性耐藥的有效治療措施,對于提高療效,減輕藥物毒副反應,改善患者預后具有非常重要的科學意義和臨床價值。我們研究團隊前期完成的基礎研究發(fā)現(xiàn),二甲雙胍可以通過下調(diào)IL-6/STAT3信號途徑,進而克服獲得性耐藥NSCLC細胞和裸鼠移植瘤對厄洛替尼和吉非替尼的耐藥,IL-6/STAT3信號通路是可逆性EGFR-TKIs產(chǎn)生獲得性耐藥的重要機制,二甲雙胍可以作用于該信號途徑從而發(fā)揮克服耐藥的作用。后續(xù)我們發(fā)現(xiàn),在原發(fā)性耐藥肺癌細胞中,p-STAT3較敏感細胞表達量無明顯差異,IL-6/STAT3信號途徑在原發(fā)性耐藥機制中并不重要。而有研究發(fā)現(xiàn),首次接受EGFR-TKIs治療迅速出現(xiàn)疾病進展的肺癌患者,取其腫瘤活組織進行免疫組織細胞學檢測發(fā)現(xiàn)存在IGF-1R高表達的情況;我們也發(fā)現(xiàn)原發(fā)性耐藥H1975(L858R/T790M)肺癌細胞較敏感細胞相比,p-IGF1R水平顯著升高。而抑制IGF-1R活化可以克服H1975細胞對EGFR-TKIs的耐藥。因此,IGF-1R信號途徑參與了EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥的發(fā)生和發(fā)展,其可能是導致原發(fā)耐藥的重要機制。二甲雙胍,老式的降糖藥物,具有安全性好和價格低廉的優(yōu)勢。越來越多的研究報道,二甲雙胍可以延緩體內(nèi)腫瘤的進展和殺傷體外癌細胞的增殖。令人感到有趣的是,二甲雙胍阻遏體外腫瘤細胞生長的機制與抑制IGF-1R信號通路活化有關。因此,二甲雙胍有望與EGFR-TKIs聯(lián)用,通過抑制IGF-1R信號通路的激活,達到克服原發(fā)性耐藥的目的。但這種聯(lián)合用藥模式所產(chǎn)生的效應尚且需要驗證,具體相關機制仍未得到闡明和驗證。本研究進一步證實二甲雙胍聯(lián)合吉非替尼克服原發(fā)性耐藥的效應,闡明相關機制。目的:對于基因檢測出含有EGFR敏感突變的NSCLC患者使用一代EGFR-TKIs,如吉非替尼或者厄洛替尼,能夠顯示出相當好的臨床獲益率。但是,有20%-30%檢測出活性突變的肺癌患者對可逆性EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥。已有研究報道,EMT進程參與了EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥的發(fā)生發(fā)展,同時靶向EGFR和IGF-1R有望克服原發(fā)性耐藥。本研究進一步探討IGF-1R信號通路以及EMT在de novo T790M突變所致EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥中所扮演角色的重要性;二甲雙胍是否能夠增效可逆性EGFR-TKIs抗原發(fā)性耐藥的作用,其增效機制是否與阻斷IGF-1R信號通路和逆轉EMT轉變有關。方法:本研究主要通過MTT、BrdU、克隆形成實驗、侵襲實驗、遷移實驗、流式細胞凋亡檢測、免疫熒光、Western blot、RNA干擾等實驗方法檢測在de novo T790M突變所致原發(fā)性耐藥NSCLC細胞中,抑制IGF-1R信號通路以及逆轉EMT對可逆性EGFR-TKIs的協(xié)同增效作用;二甲雙胍在體外通過阻斷IGF-1R信號通路和逆轉EMT對可逆性EGFR-TKIs的協(xié)同抑制作用。結果:1.對比EGFR-TKIs獲得性耐藥肺癌細胞(PC-9GR,H1650-M3)以及EGFR-TKIs敏感肺癌細胞(PC-9,HCC827),原發(fā)性耐藥肺癌H1975細胞的IGF1-R磷酸化蛋白水平明顯增加;對比EGFR-TKIs敏感肺癌細胞(PC-9,HCC827),EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥肺癌H1975細胞的上皮細胞相關蛋白降低,間質相關蛋白升高,即發(fā)生了EMT表型的變化。2.下調(diào)IGF-1R的活性或者干擾IGF-1R RNA表達能夠有效增加吉非替尼抑制H1975細胞的增殖活性以及誘導H1975細胞的凋亡效應,其機制是通過抑制下游AKT活化、激活促凋亡蛋白BIM以及促進間質上皮樣轉化。3.本研究證實了二甲雙胍作為被廣泛應用的抗糖尿病藥物,在體外聯(lián)合吉非替尼可以有效地協(xié)同抑制EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥肺癌H1975細胞的增殖、侵襲、轉移和誘導凋亡。其協(xié)同增效機制是通過抑制IGF-1R信號通路的激活以及逆轉EMT進程。結論:我們研究發(fā)現(xiàn):IGF-1R信號軸和上皮向間質樣的轉變在EGFR-TKIs原發(fā)性耐藥中扮演著至關重要的角色。二甲雙胍聯(lián)用EGFR-TKIs是克服原發(fā)性耐藥的經(jīng)濟、安全、有效聯(lián)合用藥模式,其作用機制是通過抑制IGF-1R信號軸的激活以及逆轉EMT進程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：2336710