【摘要】：肺癌是世界上發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤,雖然在過去幾十年中,肺癌在診斷、治療、發(fā)病機(jī)制等方面都取得了較大的進(jìn)步,但總生存率仍然沒有明顯改善,目前非小細(xì)胞肺癌總體5年生存率為17.1%,而對(duì)于那些Ⅳ期患者,5年生存率僅為3.6%。因此,深入探討肺癌的發(fā)病機(jī)制,尋找新的治療靶點(diǎn),對(duì)肺癌疾病的診療具有重要意義。microRNA是長度為19-24個(gè)核苷酸的單鏈非編碼小RNA,其在生物進(jìn)化過程中表現(xiàn)出高度保守的特性,其主要作用機(jī)制是與靶基因mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)的堿基互補(bǔ)結(jié)合,引起靶基因mRNA降解或抑制靶基因翻譯。目前發(fā)現(xiàn)microRNA也可以通過與靶基因的啟動(dòng)子元件結(jié)合而促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄,這種現(xiàn)象被稱為RNA活化。MicroRNAs可以作為癌基因或抑癌基因,在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。在非小細(xì)胞肺癌中已被證實(shí)有多種microRNAs的表達(dá)發(fā)生變化,并參與腫瘤的形成與進(jìn)展。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)miR-652-3p在非小細(xì)胞肺癌患者血清中顯著升高,可以作為一個(gè)新的肺癌輔助診斷血液分子標(biāo)志物。本研究中,我們檢測(cè)并發(fā)現(xiàn),與遠(yuǎn)癌正常肺組織相比,miR-652-3p在非小細(xì)胞肺癌組織及細(xì)胞系中表達(dá)水平顯著升高；而且miR-652-3p的高表達(dá)與肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān),并且miR-652-3p高表達(dá)的肺癌患者術(shù)后生存時(shí)間顯著短于低表達(dá)患者。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí),轉(zhuǎn)染nim-652-3p上調(diào)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中miR-652-3p的表達(dá)水平,促進(jìn)了細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,抑制了細(xì)胞凋亡的發(fā)生；轉(zhuǎn)染/mti-652降低非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞miR-652-3p的表達(dá)水平,則抑制了細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力,促進(jìn)了細(xì)胞凋亡。在非小細(xì)胞肺癌組織和細(xì)胞中,miR-652-3p的水平都與Lgl1蛋白水平呈負(fù)相關(guān)；并且在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中miR-652-3p明顯抑制了Lgl1蛋白的表達(dá)水平,提示LLGL1是miR-652-3p的下游靶基因之一。進(jìn)一步的熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明,在轉(zhuǎn)染報(bào)告基因pMIR-WT(包含野生型LLGL1 mRNA 3'UTR序列)的細(xì)胞中,上調(diào)或降低miR-652-3p表達(dá)能有效抑制或促進(jìn)熒光素酶的表達(dá)和活性；miR-652-3p結(jié)合位點(diǎn)缺失突變的3'UTR序列則有效消除了miR-652-3p對(duì)熒光素酶表達(dá)的調(diào)節(jié)。這一結(jié)果證明,在非小細(xì)胞肺癌中,LLGL1是niR-652-3p的下游靶基因之一。進(jìn)一步在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染不含3'UTR序列的Lgl1表達(dá)載體,回復(fù)miR-652-3p過表達(dá)細(xì)胞中Lgl1蛋白的表達(dá),有效阻礙了niR-652-3p促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲能力的活性。這一結(jié)果進(jìn)一步表明,miR-652-3p促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的活性至少一部分是通過對(duì)Lgl1表達(dá)的調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)的。綜上所述,本研究結(jié)果證實(shí),miR-652-3p在非小細(xì)胞肺癌組織和細(xì)胞系中存在普遍高表達(dá)現(xiàn)象,miR-652-3p通過抑制Lgl1蛋白表達(dá)發(fā)揮其促進(jìn)腫瘤生長、侵襲和遷移的作用。因此,miR-652-3p在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮癌基因的作用,并有可能成為非小細(xì)胞肺癌治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Lung cancer is a malignant tumor with the highest morbidity and mortality in the world. Although lung cancer has made great progress in diagnosis, treatment and pathogenesis in the past few decades, the overall survival rate has not been significantly improved. The overall 5-year survival rate was 17. 1% for NSCLC patients, but only 3. 6% for those patients with stage IV lung cancer. Therefore, it is important for the diagnosis and treatment of lung cancer to explore the pathogenesis of lung cancer and find new therapeutic targets. MicroRNA is a single strand non-coding small RNA, with a length of 19-24 nucleotides. It has a highly conserved nature in the course of biological evolution, and its main mechanism is that it is complementary to the 3 'untranslated region (3'UTR) of target gene mRNA, resulting in the degradation of target gene mRNA or inhibition of target gene translation. At present, it has been found that microRNA can also promote transcription by binding to the promoter element of target gene. This phenomenon is called RNA activation. MicroRNAs can be used as oncogene or tumor suppressor gene, and it plays an important role in the occurrence and development of many kinds of malignant tumors. It has been proved that many kinds of microRNAs expression changes in non-small cell lung cancer and participate in the formation and progression of tumor. Our previous study found that miR-652-3p was significantly elevated in the serum of patients with NSCLC, and could be used as a new molecular marker for the auxiliary diagnosis of lung cancer. In this study, we detected and found that the expression of miR-652-3p in non-small cell lung cancer (NSCLC) tissues and cell lines was significantly higher than that in normal lung tissues of distant carcinoma. Moreover, the high expression of miR-652-3p was significantly correlated with lymph node metastasis and TNM stage of lung cancer patients, and the survival time of lung cancer patients with high expression of miR-652-3p was significantly shorter than that of patients with low expression of miR-652-3p. Cell experiments showed that transfection of nim-652-3p upregulated the expression of miR-652-3p in NSCLC cells, promoted cell proliferation, migration and invasion, and inhibited apoptosis. Transfection / mti-652 decreased the expression of miR-652-3p in NSCLC cells, inhibited cell proliferation, migration and invasion, and promoted cell apoptosis. In non-small cell lung cancer (NSCLC), the level of miR-652-3p was negatively correlated with the level of Lgl1 protein. Moreover, miR-652-3p significantly inhibited the expression of Lgl1 protein in NSCLC cells, suggesting that LLGL1 is one of the downstream target genes of miR-652-3p. Further experiments of luciferase reporter gene showed that up-regulation or down-regulation of miR-652-3p expression could effectively inhibit or promote luciferase expression and activity in cells transfected with reporter gene pMIR-WT (including wild-type LLGL1 mRNA 3'UTR sequence). The 3'UTR sequence with deletion mutation of miR-652-3p binding site effectively eliminated the regulation of luciferase expression by miR-652-3p. These results suggest that LLGL1 is one of the downstream target genes of niR-652-3p in non-small cell lung cancer. Further transfection of Lgl1 expression vector without 3'UTR sequence in non-small cell lung cancer cells and reversion of the expression of Lgl1 protein in miR-652-3p overexpression cells effectively hindered the activity of niR-652-3p in promoting cell migration and invasion. These results further suggest that the activity of miR-652-3p in promoting the migration and invasion of NSCLC cells is at least partly mediated by the regulation of Lgl1 expression. In conclusion, the results of this study confirm that miR-652-3p is generally overexpression in non-small cell lung cancer tissues and cell lines, and miR-652-3p plays a role in promoting tumor growth, invasion and migration by inhibiting the expression of Lgl1 protein. Therefore, miR-652-3p plays the role of oncogene in non-small cell lung cancer and may become a new target for the treatment of non-small cell lung cancer.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 許運(yùn)龍,郭昭揚(yáng),張?jiān)婆d,許賢榮;血管內(nèi)皮生長因子在人非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

2 王繼營,高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國肺癌雜志;2000年02期

3 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢(shì)[J];中國肺癌雜志;2000年05期

4 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國肺癌雜志;2000年05期

5 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2000年11期

6 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

7 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場(chǎng)將達(dá)20億美元[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年02期

8 張利偉,劉樹秋,陳海英,萬錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

9 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

10 朱堯武,楊宇飛;非小細(xì)胞肺癌的術(shù)后輔助治療[J];中國臨床醫(yī)生;2001年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛;邊海蓉;盧振國;楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對(duì)中國非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長海醫(yī)院呼吸科 夏陽 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測(cè)用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

4 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

8 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

10 周菊;HPV-16感染對(duì)非小細(xì)胞肺癌和A549細(xì)胞的影響及miRNAs表達(dá)改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

2 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對(duì)比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 石姣姣;基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 胡世霖;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李曉霞;非小細(xì)胞肺癌ERCC1、RRM1和TUBB3表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 史曉熠;PTP4A1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 張旭;LncRNA h19在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2335551