【摘要】：目的探究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中miR-125b基因的表達(dá)情況、甲基化水平并進(jìn)一步分析其臨床意義;探究miR-125b在髓系白血病細(xì)胞中的生物學(xué)意義。方法應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)方法檢測33例正常人與114例AML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中miR-125b的轉(zhuǎn)錄本水平。應(yīng)用甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技術(shù)對(duì)miR-125b啟動(dòng)子的甲基化水平進(jìn)行檢測,應(yīng)用亞硫酸鹽測序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)方法進(jìn)行驗(yàn)證;以質(zhì)粒為載體,構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)miR-125b的白血病細(xì)胞株K562,通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法與流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測miR-125b對(duì)白血病細(xì)胞增殖、生存、凋亡等生物學(xué)功能的影響;通過檢測細(xì)胞對(duì)地西他濱藥物的半數(shù)抑制濃度(Inhibitory concentration50%,IC50)和加入地西他濱藥物處理后細(xì)胞生存實(shí)驗(yàn)探討miR-125b參與白血病細(xì)胞對(duì)地西他濱耐藥性作用。結(jié)果44/114例(38.6%)AML患者存在miR-125b的過表達(dá),與33例對(duì)照組相比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。MiR-125b高、低表達(dá)組與患者的性別、血紅蛋白量、血小板計(jì)數(shù)、10種基因突變等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但miR-125b高表達(dá)組的患者年齡小于miR-125b低表達(dá)組(P=0.05),外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)與原始細(xì)胞計(jì)數(shù)低于miR-125b低表達(dá)組(P=0.041和P=0.016)。MiR-125b高、低表達(dá)組間的FAB分型、WHO分型、不同核型以及染色體危險(xiǎn)程度分型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在FAB-M3型患者中,miR-125b表達(dá)量顯著高與對(duì)照組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與其他亞型分組[29%(28/97)]比較,M3型分組中miR-125b高表達(dá)的頻率顯著升高[94%(16/17)](P0.01)。而在非M3患者(non-M3-AML)中,miR-125b的表達(dá)水平與年齡、性別、血紅蛋白量、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、染色體分組及10種基因突變等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在總體AML患者中,miR-125b高表達(dá)組的化療后完全緩解(complete remission,CR)率高于miR-125b低表達(dá)組(分別為59%和34%,P=0.017)。在non-M3-AML患者中miR-125b高、低表達(dá)組間的CR無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析顯示miR-125b高表達(dá)組患者的總體生存時(shí)間(overall survival,OS)高于miR-125b低表達(dá)組(中位數(shù)分別為13個(gè)月和6個(gè)月,P=0.046)。然而,Cox多因素分析表明總體AML患者中miR-125b表達(dá)并非是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素(P=0.213)。在non-M3-AML患者與正常核型AML(cytogenetically normal AML,CN-AML)患者中,miR-125b高、低表達(dá)組間的OS均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。miR-125b在對(duì)照組與AML患者之間啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)�；蜣D(zhuǎn)染技術(shù)獲得穩(wěn)定過表達(dá)miR-125b的K562白血病細(xì)胞株。體外細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)證明miR-125b促進(jìn)K562白血病細(xì)胞的增殖、生存能力,抑制K562白血病細(xì)胞的凋亡。細(xì)胞對(duì)地西他濱藥物的IC50和加入地西他濱藥物處理后細(xì)胞生存曲線表明miR-125b并沒有改變K562細(xì)胞對(duì)地西他濱藥物的反應(yīng)性。結(jié)論(1)MiR-125b的過表達(dá)是AML中一個(gè)常見的分子事件,并且與FAB-M3型AML患者密切相關(guān)。(2)MiR-125b過表達(dá)與AML患者預(yù)后無關(guān)。(3)AML患者中miR-125b啟動(dòng)子無異常甲基化,miR-125b表達(dá)水平不受其啟動(dòng)子甲基化調(diào)控。(4)MiR-125b促進(jìn)白血病細(xì)胞K562增殖、生存能力,抑制其凋亡能力。(5)MiR-125b沒有改變K562細(xì)胞對(duì)地西他濱藥物的反應(yīng)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R733.71

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本文編號(hào)：2334735