【摘要】：研究背景及目的胰腺癌是惡性程度最高的腫瘤之一,發(fā)病隱匿、進展迅速、手術(shù)切除率低、放化療效果不佳,預(yù)后極差,總體5年生存率大約為6%,在全球癌癥發(fā)病率占第13位,死亡率占第7位。篩選合適的預(yù)后標志物,對于臨床醫(yī)師選擇恰當(dāng)?shù)闹委煼桨?避免不必要的治療帶來的毒副作用,具有重要的意義。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucose-regulated protein 78, GRP78),又稱免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(Immunoglobulin heavy chain binding protein, BIP),是熱休克蛋白70家族的一員,位于正常細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi),是調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、參與未折疊蛋白反應(yīng)(Unfolded protein response, UPR)的重要分子。GRP78在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中具有促進蛋白質(zhì)的正確折疊,維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的作用,在細胞處于缺氧、低糖、低鈣等應(yīng)激狀態(tài)時,提高細胞的生存能力,并參與多種病理生理過程,如神經(jīng)系統(tǒng)病變、炎癥、腫瘤等。GRP78在腫瘤細胞中的作用已引起了眾多研究團隊的注意。多個研究顯示：GRP78在卵巢癌、彌漫大B淋巴瘤、腎細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、前列腺癌細胞中的表達與癌癥細胞的增殖、轉(zhuǎn)移、患者的預(yù)后等惡性行為密切相關(guān),并表現(xiàn)出了組織特異性的特點。GRP78在胰腺癌中的表達與胰腺癌患者臨床病理學(xué)特點和預(yù)后的關(guān)系尚未見報道。本研究擬通過臨床觀察及體外細胞實驗檢測GRP78的表達及其在胰腺癌發(fā)生、進展中表達變化及與胰腺癌病人臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系,并探索GRP78基因的單核苷酸多態(tài)性與胰腺癌病人預(yù)后的相關(guān)性。研究內(nèi)容1.研究胰腺癌組織中GRP78的表達情況及與胰腺癌病人臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。2.研究不同胰腺癌細胞株細胞中GRP78的表達及對胰腺癌細胞株細胞增殖、侵襲及遷移的影響及相關(guān)機制。3.檢測GRP78在小鼠胰腺癌發(fā)生及演進過程中的表達。4.探索GRP78單核苷酸多態(tài)性與胰腺癌手術(shù)病人總生存期的關(guān)系。方法：1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(1mmunohistochemistry, IHC)檢測手術(shù)切除經(jīng)病理診斷為胰腺癌的組織標本中GRP78的表達情況,分析GRP78與胰腺癌臨床病理特點及胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。2. Western blot技術(shù)檢測各胰腺癌細胞株細胞中GRP78的基礎(chǔ)表達情況。應(yīng)用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低高表達細胞株中的GRP78表達,利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對低表達細胞株進行過表達,并設(shè)置相應(yīng)的對照組。CCK8法檢測GRP78對胰腺癌細胞增殖的影響,利用流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡,western blot檢測GRP78促進胰腺癌細胞增殖的具體作用形式；利用transwell法檢測GRP78對胰腺癌細胞侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系,western blot檢測可能的作用機制；3.應(yīng)用二甲基苯并蒽(9,10-dimethyl-1,2-benzanthracene, DMBA)原位埋入C57BL/6小鼠的胰腺實質(zhì)建立癌前病變和胰腺癌發(fā)生進程的模型,利用免疫組化染色技術(shù)分別檢測GRP78在正常胰腺導(dǎo)管上皮、胰腺上皮內(nèi)瘤變(Pancreatic intraepithelial neoplasia, PanIN)和胰腺癌中的表達,探討GRP78與胰腺癌發(fā)生及演變的關(guān)系。4.收集10家合作單位的胰腺癌手術(shù)病例,質(zhì)譜法檢測胰腺癌病人外周血單核細胞DNA中的rs430397位點突變；利用病例對照研究調(diào)查漢族人群中單核苷酸位點rs430397突變與胰腺癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：1.與癌旁正常導(dǎo)管細胞相比,GRP78在人胰腺癌癌組織的細胞漿中呈高表達,并與胰腺癌的T分期顯著相關(guān)；GRP78高表達是影響胰腺癌術(shù)后生存期的獨立危險因素,GRP78高表達與胰腺癌患者預(yù)后不良相關(guān)。2.敲低GRP78表達顯著降低胰腺癌細胞株SU86.86與BxPC-3的增殖、侵襲及遷移能力并增加了由吉西他濱誘導(dǎo)的細胞凋亡程度。相反,過表達GRP78后,Capan-1的增殖及侵襲遷移能力顯著增強,并增加了胰腺癌對吉西他濱的耐藥性。Westernblot顯示GRP78通過影響細胞周期蛋白CyclinD1、CDK4/CDK6的表達影響腫瘤的增殖,通過影響cleaved caspse-3和cleaved RARP的表達影響吉西他濱誘導(dǎo)的細胞凋亡。通過一系列上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換相關(guān)蛋白RhoA,ROCKl,JAK2,vimentin,Smad4,p-STAT3影響了腫瘤的侵襲遷移能力。3.小鼠模型胰腺癌組織中GRP78表達顯著高于癌旁正常導(dǎo)管細胞(P0.01)。胰腺癌及高級別PanIN(hi曲grade PanIN,H-PanIN)中的GRP78表達明顯高于低級別PanIN(10w grade PanIn,L-PanIN)和慢性胰腺炎組織中的表達(P0.01)。4.GRP78基因rs430397突變可分為AA、AG及GG型,其中基因型為AA及AG的患者術(shù)后總生存期顯著短于基因型為GG的患者。結(jié)論：GRP78在胰腺癌中高表達,可促進胰腺癌細胞增殖、侵襲遷移及化療耐藥,有可能成為胰腺癌治療的新靶點。GRP78及其單核苷酸多態(tài)性位點rs430397與胰腺癌病理分級及預(yù)后密切相關(guān),有可能成為胰腺癌的預(yù)后指標。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

【參考文獻】

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1 李偉;董虹;劉佳;李雙;盧運萍;馬丁;;應(yīng)用激光掃描細胞儀分析GRP78在食管癌各級病變中的表達情況[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

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1 任金帥;DMBA誘發(fā)小鼠胰腺癌模型的建立及欖香烯乳對鼠胰腺癌細胞體外抑制作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

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本文編號：2326374