【摘要】：目的:探討臍帶血和乳腺癌患者外周靜脈血來(lái)源的CIK細(xì)胞程序性死亡分子-l(programmed cell death-1,PD-1)的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的殺傷作用。方法:采集2015年6月至2015年12月在解放軍第105醫(yī)院住院的健康產(chǎn)婦臍帶血和乳腺癌患者外周靜脈血各5例,分離PBMC,體外培養(yǎng)、擴(kuò)增CIK細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)兩種來(lái)源的CIK細(xì)胞PD-1表達(dá)情況,分別取培養(yǎng)第7、14、21、28天的CIK細(xì)胞與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng),細(xì)胞計(jì)數(shù)(CCK-8)法測(cè)定CIK細(xì)胞對(duì)MCF-7細(xì)胞的殺傷率,吖啶橙-溴化乙啶雙染(AOEB)法觀察共培養(yǎng)后CIK細(xì)胞凋亡變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:隨著體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),臍帶血和乳腺癌患者靜脈血來(lái)源的CIK細(xì)胞PD-1表達(dá)率均逐漸上升,第14天時(shí)臍帶血組CIK細(xì)胞PD-1表達(dá)率低于乳腺癌組[(38.42±4.76)%vs(50.54±3.50)%,P0.05],至第21天后兩組PD-1表達(dá)率均升高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。培養(yǎng)第7、14、21、28天兩組CIK細(xì)胞對(duì)MCF-7細(xì)胞的殺傷率分別為(18.54±3.54)%和(21.74±4.27)%、(71.86±16.86)%和(58.78±24.25)%、(44.32±26.87)%和(43.96±26.04)%、(43.24±24.27)%和(40.28±23.69)%,以培養(yǎng)第14天的臍帶血來(lái)源的CIK細(xì)胞的殺傷活性最強(qiáng)(P0.05)。分析發(fā)現(xiàn),兩種來(lái)源的CIK細(xì)胞PD-1表達(dá)水平與CIK細(xì)胞的凋亡率呈正相關(guān)(r=0.971,r=0.900,均P0.01),與殺傷率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.865,r=-0.885,均P0.01)。結(jié)論:活化的CIK細(xì)胞表面高表達(dá)PD-1,臍帶血較乳腺癌患者靜脈血來(lái)源的CIK細(xì)胞表面PD-1水平低;培養(yǎng)第14天的CIK細(xì)胞凋亡率均較低,其殺傷能力更強(qiáng)。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of programmed death molecule (l (programmed cell death-1,PD-1) in CIK cells from umbilical cord blood and peripheral venous blood of patients with breast cancer and its killing effect on MCF-7 cells of breast cancer. Methods: from June 2015 to December 2015, 5 cases of healthy maternal umbilical cord blood and 5 cases of peripheral venous blood of breast cancer patients were collected from 105 hospitals of PLA. PBMC, was isolated and cultured in vitro to amplify CIK cells. Flow cytometry was used to detect the expression of PD-1 in CIK cells from two different sources at different time points. The CIK cells were cocultured with MCF-7 cells on day 714, 21 and 28, respectively. The cytotoxicity of CIK cells to MCF-7 cells was determined by cell count (CCK-8) method. The apoptosis of CIK cells after co-culture was observed by acridine orange and ethidium bromide double staining (AOEB) method, and the apoptosis rate of CIK cells was detected by flow cytometry. Results: with the prolongation of culture time in vitro, the PD-1 expression rate of CIK cells from umbilical cord blood and breast cancer patients increased gradually. On the 14th day, the PD-1 expression rate of CIK cells in cord blood group was lower than that in breast cancer group [(38.42 鹵4.76)% vs (50.54 鹵3.50)%, P0.05]. But the difference was not statistically significant (P0.05). The cytotoxicity of CIK cells to MCF-7 cells was (18.54 鹵3.54)% and (21.74 鹵4.27)%, (71.86 鹵16.86)% and (58.78 鹵24.25)%, (44.32 鹵26.87)% and (43.96 鹵26.04)%, respectively. (43.24 鹵24.27)% and (40.28 鹵23.69)% respectively. The cytotoxicity of CIK cells from cord blood on the 14th day was the highest (P0.05). It was found that the expression of PD-1 in CIK cells was positively correlated with the apoptosis rate of CIK cells (r = 0.900, all P 0.01), and negatively correlated with the killing rate (r = 0.865, r = 0.885, all P 0.01). Conclusion: the overexpression of PD-1, on the surface of activated CIK cells is lower than that of CIK cells derived from breast cancer, and the apoptotic rate of CIK cells on the 14th day of culture is lower, and the cytotoxicity of CIK cells is stronger.
【作者單位】： 解放軍第105醫(yī)院生物治療中心;安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;安徽省立醫(yī)院腫瘤科;
【基金】：南京軍區(qū)科技創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No:15MS048)~~
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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7 黃國(guó)\

本文編號(hào)：2317479