【摘要】：博來(lái)霉素(Bleomycin,BLM)是一種氨基糖苷類天然產(chǎn)物,由梅澤賓夫等于1966年從輪枝鏈霉菌的培養(yǎng)液分離得到,至今臨床應(yīng)用已經(jīng)50余年,抗癌活性強(qiáng),尤其對(duì)淋巴癌、磷狀細(xì)胞癌、肺癌和生殖系統(tǒng)癌癥具有很好的療效,同時(shí)無(wú)明顯的骨髓抑制,不抑制機(jī)體的免疫功能,使其成為臨床腫瘤化療的重要藥物,但其嚴(yán)重的肺纖維化毒副作用,極大的限制了臨床足量足療程應(yīng)用。因此如何在保證BLM足量足療程應(yīng)用的基礎(chǔ)上,防治肺纖維化是進(jìn)一步改善腫瘤患者預(yù)后的關(guān)鍵。整合素連接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)鑒定獲得的一種具有蛋白激酶活性的新蛋白質(zhì),在多種生長(zhǎng)因子信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用,活化后的ILK可以調(diào)控其下游的靶標(biāo)蛋白,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化、遷移、浸潤(rùn)以及腫瘤血管生成等過(guò)程。上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epitelial-mesenchymal transition,EMT)是肺纖維化的重要過(guò)程,多項(xiàng)研究表明ILK與細(xì)胞的EMT密切關(guān)聯(lián),促進(jìn)EMT發(fā)生發(fā)展。活化后的ILK介導(dǎo)α-平滑肌蛋白表達(dá)上調(diào),從而參與EMT的形成。新近研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路同樣可以參與多器官的纖維化過(guò)程。Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是肺部發(fā)育所必需的分子信號(hào)系統(tǒng),其表達(dá)異常與肺纖維化亦密切相關(guān),該通路參與纖維化主要與β-連環(huán)蛋白的核聚集相關(guān)。當(dāng)β-catenin磷酸化被抑制時(shí),導(dǎo)致其無(wú)法被泛素識(shí)別,從而不能被蛋白酶復(fù)合體降解,進(jìn)而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量集聚并發(fā)生核聚集,導(dǎo)致組織纖維化。新近研究發(fā)現(xiàn)β-catenin與ILK存在重要對(duì)話:β-catenin的核聚集與糖原合成激酶3β(Gkycogen synthase kinase-3beta,GSK-3β)的磷酸化有關(guān),同時(shí)Virchows等研究表明,活化后的ILK亦可以影響GSK-3β的磷酸化,因此二者在肺纖維化中可能存在協(xié)同作用。肺纖維化是一種進(jìn)行性加重的間質(zhì)性肺部病變,病理表現(xiàn)為彌漫性肺泡炎、肺泡單位結(jié)構(gòu)紊亂和肺纖維化,其確切發(fā)病機(jī)制仍不清楚。大致為化學(xué)或其他原因觸發(fā)肺部炎癥,隨后出現(xiàn)滲出、纖維母細(xì)胞增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積,最終導(dǎo)致不可逆性肺損傷,目前雖然仍無(wú)特性藥物治療,但國(guó)內(nèi)外一個(gè)重大突破發(fā)現(xiàn),大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能夠阻止纖維化疾病發(fā)展,甚至可以改善肺功能。何坤等研究發(fā)現(xiàn),紅霉素可以預(yù)防博來(lái)霉素導(dǎo)致的肺纖維化。牛曉娟等研究發(fā)現(xiàn)阿奇霉素能夠減輕肺纖維化大鼠模型中膠原沉積,具有與地塞米松相似的作用,且不良反應(yīng)少。但大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗纖維化的具體機(jī)制仍處于探索之中。目的:本文通過(guò)博來(lái)霉素復(fù)制小鼠肺纖維化模型,予阿奇霉素干預(yù),觀察小鼠肺組織病理改變及ILK和β-catenin含量變化,探討阿奇霉素在肺纖維化中的作用,并為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:選取清潔級(jí)健康昆明小鼠100只,體重18-22g,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為A組(模型組):20只,氣管內(nèi)一次性注入BLM(3.5mg/Kg,以1ml生理鹽水溶解),于造模后第1天生理鹽水1ml灌胃,1次/d,共28天;B組(空白組):20只,氣管內(nèi)注入1ml生理鹽水,于假造模后第1天生理鹽水1ml灌胃,1次/d,共28天。C組(阿奇霉素干預(yù)組Ⅰ):20只,氣管內(nèi)一次性注入BLM(3.5mg/Kg,以1ml生理鹽水溶解),于造模后第1天給予阿奇霉素5mg/Kg(1ml生理鹽水溶解)灌胃,1次/天,共14天。D組(阿奇霉素干預(yù)組Ⅱ):20只,氣管內(nèi)一次性注入BLM(3.5mg/Kg,以1ml生理鹽水溶解),于造模后第15天給予阿奇霉素5mg/Kg(1ml生理鹽水溶解)灌胃,1次/天,共14天。E組(阿奇霉素干預(yù)組Ⅲ):20只,氣管內(nèi)一次性注入BLM(3.5mg/Kg,以1ml生理鹽水溶解),于造模后第1天給予阿奇霉素5mg/Kg(1ml生理鹽水溶解)灌胃,1次/天,共28天。以上各組分別于7、14、21、28天各處死5只。剪斷右側(cè)股動(dòng)脈放血處死,處死后即刻取右肺勻漿,置于-70℃冰箱中,待標(biāo)本收集完成后,運(yùn)用ELISA測(cè)定ILK、β-catenin蛋白含量。左肺組織放于4%甲醛固定液后做HE染色及Masson染色,評(píng)價(jià)肺泡炎癥和肺纖維化的程度。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示,同一時(shí)間點(diǎn),同一指標(biāo)的組間比較在滿足正態(tài)性及方差齊性下進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),不滿足正態(tài)性或方差齊性情況下進(jìn)行獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn),兩變量相關(guān)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以P0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1肺組織病理結(jié)果分析:在相同時(shí)間點(diǎn),A組小鼠肺泡炎及纖維化程度均顯著高于B組;C組和E組小鼠肺均有輕度肺泡炎及纖維化,兩組與A組比較,小鼠肺泡炎及纖維化程度均顯著減輕;D組小鼠肺組織實(shí)驗(yàn)第7天及第14天可見(jiàn)與A組相同時(shí)間點(diǎn)同樣程度的肺泡炎癥及纖維化,給予阿奇霉素干預(yù)后,即第21天及第28天D組小鼠肺組織炎癥及纖維化較A組相同時(shí)間點(diǎn)明顯減輕。各組病理結(jié)果表明肺纖維化分為早期炎癥及晚期纖維化兩個(gè)階段,符合人肺纖維化病理過(guò)程,且炎癥反應(yīng)隨纖維化進(jìn)展逐漸減輕,而纖維化程度逐漸加重。2肺組織中ILK、β-catenin含量:2.1組間比較1)相同時(shí)間點(diǎn):A組小鼠肺組織中的ILK、β-catenin含量較B組均明顯升高,尤以A組第28天升高最為顯著,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);2)相同時(shí)間點(diǎn):C組小鼠肺組織中的ILK、β-catenin含量較A組均明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);3)相同時(shí)間點(diǎn):D組小鼠肺組織中ILK、β-catenin含量在第7天、第14天較A組無(wú)明顯變化,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);在第21天、第28天肺組織中ILK、β-catenin含量較A組均明顯下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);4)相同時(shí)間點(diǎn):E組小鼠肺組織中ILK、β-catenin含量較A組均明顯下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);5)相同時(shí)間點(diǎn):C組小鼠肺組織中ILK、β-catenin含量較E組均無(wú)明顯變化,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2.2組內(nèi)比較1)不同時(shí)間點(diǎn):A組小鼠肺組織中ILK、β-catenin含量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);2)不同時(shí)間點(diǎn):B、C、E三組中,小鼠肺組織ILK、β-catenin含量均無(wú)明顯變化,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);3)不同時(shí)間點(diǎn):D組小鼠肺組織中ILK、β-catenin含量在阿奇霉素干預(yù)前后均有差異,即D組小鼠肺組織ILK、β-catenin含量在第7天、第14天與第21天、28天比較均明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。3肺組織中ILK、β-catenin的相關(guān)性分析:不同時(shí)間點(diǎn)A組博來(lái)霉素模型組中,小鼠肺組織ILK、β-catenin的含量較B組空白組小鼠肺組織ILK、β-catenin的含量均明顯升高,二者呈正性相關(guān),具有統(tǒng)計(jì)數(shù)意義(P0.001,r=0.978)結(jié)論:1阿奇霉素可以阻斷博來(lái)霉素致小鼠肺纖維化發(fā)生、進(jìn)展,可能成為臨床解決腫瘤患者應(yīng)用博來(lái)霉素致肺纖維化的防治方法。2阿奇霉素干預(yù)小鼠肺纖維化的效果與用藥時(shí)機(jī)及藥物療程有關(guān),于肺纖維化早期炎癥階段效果顯著,對(duì)小鼠肺纖維化后期纖維化階段也存在一定效果。3 ILK、β-catenin均參與肺纖維化過(guò)程,二者存在正性相關(guān),提示二者在纖維化過(guò)程中可能存在協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R730.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2317067