【摘要】：研究背景腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤,其惡性程度高、發(fā)病率高,病人預(yù)后差�；熥鳛橹委煇盒阅[瘤的一個重要手段,然而藥物使用一段時間后,絕大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞都會產(chǎn)生耐藥性,從而導(dǎo)致化療的失敗。根據(jù)美國癌癥學(xué)會統(tǒng)計,在死亡的病人當(dāng)中有90%以上的人存在耐藥性,由FDA批準(zhǔn)的治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤化療藥物中替莫唑胺由于其全身毒副作用小,可以很好的透過血腦屏障,被廣泛用臨床一線當(dāng)中。但腫瘤細(xì)胞也不可避免的對其產(chǎn)生了耐藥性,所以篩選和研發(fā)增敏替莫唑胺殺傷作用的藥物是很有必要的。阿維菌素(avermectins,AVMs)是由阿維鏈霉菌產(chǎn)生的一類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。AVMs通常是用來治療寄生蟲感染等疾病,主要是通過觸殺和胃毒作用來發(fā)揮對害蟲的毒殺效果。研究發(fā)現(xiàn)AVMs可以抑制P-糖蛋白對其底物的外排作用,從而降低腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。本課題組在前期預(yù)實驗中也發(fā)現(xiàn)AVMs對膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞、膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖均有明顯抑制作用,且可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,但其作用機制尚未明確。本文就以膠質(zhì)瘤U87、U251和T98細(xì)胞為研究對象,探討AVMs抗腫瘤的作用機制,為阿維菌素抗腫瘤新藥研發(fā)及其臨床應(yīng)用提供堅實的理論基礎(chǔ)。第一部分阿維菌素對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其相關(guān)機制研究研究目的研究阿維菌素對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其相關(guān)機制。研究方法1.分別用不同濃度的 AVMs(0、2μM、4μM、6μM、8μM、1OμM、12μM)處理膠質(zhì)瘤兩種細(xì)胞系(U87和U251)不同時間(24、48、72小時),采用MTT法檢測AVMs對細(xì)胞增殖的影響;2.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時后,用Annexin V-FITC/PI染色膠質(zhì)瘤細(xì)胞,在流式細(xì)胞儀下檢測細(xì)胞凋亡的情況;3.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時采用JC-1法染色各組細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞線粒體膜電位;4.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時后,提取總RNA反轉(zhuǎn)錄并采用Real-time PCR檢測bcl-2、bax、caspase3 mRNA表達(dá)水平;5.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時后,提取總蛋白,用 Western blotting 檢測 bcl-2、bax、caspase3 蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果1.AVMs對膠質(zhì)瘤U87和U251細(xì)胞增殖有抑制作用,并呈現(xiàn)劑量和時間依賴性;2.AVMs可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤U87和U251細(xì)胞的凋亡,實驗組相對于對照組凋亡率均增加了(P0.05);3.AVMs可以U87和U251細(xì)胞的線粒體跨膜膜電位,實驗組相對于對照組紅/綠熒光強度比均增加了(P0.05);4.PCR和Western bloting結(jié)果提示:AVMs可以促進(jìn)U87和U251細(xì)胞中caspase3、bax mRNA和蛋白分子的表達(dá)水平(P0.01),同時降低bc12 mRNA和蛋白分子的表達(dá)水平(P0.01)。研究結(jié)論1.AVMs具有抑制膠質(zhì)瘤U87和U251細(xì)胞增殖的作用;2.AVMs可以促進(jìn)膠質(zhì)瘤U87和U251細(xì)胞的凋亡,其作用機制可能是與觸發(fā)線粒體凋亡途徑有關(guān)。第二部分阿維菌素對替莫唑胺殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞的影響及相關(guān)機制研究研究目的研究阿維菌素對替莫唑胺殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞的影響及其相關(guān)機制。研究方法1.分別用MTT法檢測AVMs、TMZ以及AVMs+TMZ對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤三種細(xì)胞系(U87、U251和T98)增殖的影響,測出它們的IC50;2.采用Chou-Talalay法評估AVMs與TMZ的聯(lián)合效應(yīng);3.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時后,采用RT-PCR檢測ABCB1、ABCG2以及MGMTmRNA分子表達(dá)水平;4.不同濃度的AVMs(0、4μM、8μM)處理細(xì)胞72小時后,采用Western blotting檢測ABC轉(zhuǎn)運蛋白(ABCB1、ABCC1、ABCG2)以及MGMT蛋白分子表達(dá)水平。研究結(jié)果1.AVMs、TMZ以及AVMs+TMZ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖均有抑制作用,并呈現(xiàn)劑量和時間依賴性;2.AVMs+TMZ在IC50的時候?qū)87、U251以及T98細(xì)胞的CI(聯(lián)合指數(shù))分別為:0.85、0.72、0.34;3.RT-PCR和Westernbloting結(jié)果提示:AVMs可以促進(jìn)U87和T98細(xì)胞中ABCB1、ABCG2mRNA和蛋白分子的表達(dá)水平(P0.05),同時也降低T98細(xì)胞中MGMTmRNA和蛋白分子的表達(dá)水平(P0.05)。研究結(jié)論AVMs與TMZ具有協(xié)同作用,其可能的作用機制是通過降低ABCB1、ABCC1、ABCG2以及MGMT蛋白分子表達(dá)水平來增加TMZ對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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1 ZHU Ying-Li;WANG Lin-Yuan;WANG Jing-Xia;WANG Chun;WANG Cheng-Long;ZHAO Dan-Ping;WANG Zi-Chen;ZHANG Jian-Jun;;Protective effects of paeoniflorin and albiflorin on chemotherapy-induced myelosuppression in mice[J];Chinese Journal of Natural Medicines;2016年08期

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本文編號：2316918