【摘要】：背景和目的 肺癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和生命。由于其起病隱匿,多數(shù)患者就診時(shí)已屬中晚期,僅能進(jìn)行姑息治療,預(yù)后較差,生存時(shí)間很短,總的5年生存率約10%-15%。因此迫切需要尋求新的早期診斷標(biāo)志物和有效的治療方法。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外許多專(zhuān)家學(xué)者從基因水平探索肺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制,從而對(duì)相關(guān)基因及其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行干預(yù)將有可能為肺癌的診治開(kāi)辟一個(gè)新的領(lǐng)域。 轉(zhuǎn)膠蛋白(Transgelin)是肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,屬于鈣調(diào)節(jié)蛋白家族成員之一。一些研究表明,在肺癌、結(jié)直腸癌、肝癌及前列腺癌等惡性腫瘤中,均發(fā)現(xiàn)transgelin基因的表達(dá)上調(diào),提示transgelin可能有促進(jìn)這些腫瘤生長(zhǎng)的作用, 本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn),transgelin的表達(dá)水平在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表達(dá)升高,提示transgelin在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起了重要作用。本研究以慢病毒為載體,干擾transgelin在人肺腺癌細(xì)胞A549中的表達(dá),建立transgelin穩(wěn)定沉默的細(xì)胞株,觀察其在裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的生長(zhǎng)情況,探討transgelin在肺腺癌細(xì)胞中的體內(nèi)生物學(xué)效應(yīng)。同時(shí)應(yīng)用組織芯片和免疫組化相結(jié)合方法進(jìn)一步檢測(cè)transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況,同時(shí)分析transgelin的表達(dá)與肺腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的相關(guān)性。因此,干擾transgelin基因的表達(dá)可望成為肺癌治療的一個(gè)有效靶點(diǎn)。 方法 構(gòu)建Transgelin shRNA慢病毒載體,將其轉(zhuǎn)染入人肺腺癌A549細(xì)胞中,并采用Real-Time PCR、Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后trangelin表達(dá)變化。成功建立皮下移植瘤模型18只,按皮下注射細(xì)胞不同分為3組：(1)慢病毒轉(zhuǎn)染transgelin shRNA的A549細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)(2)慢病毒轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)序列的A549細(xì)胞(陰性載體對(duì)照組)(3)未轉(zhuǎn)染任何載體的A549細(xì)胞(空白對(duì)照組)。每5天測(cè)量腫瘤大小,第30天處死所有裸鼠,計(jì)算腫瘤體積,治療前后裸鼠體重變化及抑瘤率。留取組織標(biāo)本,免疫組化法檢測(cè)transgelin和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白在皮下移植瘤組織中的表達(dá)情況。將具備完成臨床資料的75例肺腺癌的癌組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁組織制成150點(diǎn)組織芯片,應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況,同時(shí)分析transgelin的表達(dá)與肺腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的相關(guān)性。 結(jié)果 (1)三組裸鼠皮下均出現(xiàn)皮下移植瘤,成瘤率為100%。與陰性載體對(duì)照組和空白對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下移植瘤瘤體積生長(zhǎng)速度明顯緩慢,體積顯著小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),體積抑瘤率達(dá)69.2%。與陰性載體對(duì)照組和空白對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組腫瘤重量明顯減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),瘤重抑瘤率達(dá)75%。 (2)實(shí)驗(yàn)組transgelin蛋白表達(dá)水平明顯低于陰性載體對(duì)照組及空白對(duì)照組,模型構(gòu)建成功。同時(shí)PCNA蛋白水平顯著低于陰性載體對(duì)照組及空白對(duì)照組。 (3)免疫組化結(jié)果顯示癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率68%(51/75),高于癌旁組織中表達(dá)的40%(30/75)(1)=0.001,x2=11.836)。 (4) Transgelin的表達(dá)在(Ⅰ+Ⅱ)期與(Ⅲ+Ⅳ)期間的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.117,p0.023)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.672,p0.025)；在(高+中)分化組與低分化組間的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.63,p0.014)；Transgelin蛋白的高表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)(p值均0.05)。 結(jié)論： 利用慢病毒trans gelin shRNA載體干擾trans gelin基因表達(dá)能有效抑制人肺腺癌A549在裸鼠腫瘤體積的生長(zhǎng),其中可能的一種機(jī)制是抑制PCNA蛋白表達(dá),即抑制裸鼠體內(nèi)細(xì)胞的增殖有關(guān)。同時(shí)肺腺癌組織中trans gelin蛋白表達(dá)水平明顯高于癌旁組織,transgelin的表達(dá)水平與肺腺癌的臨床病理分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)系,提示trans gelin在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中及促進(jìn)促進(jìn)肺腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面起著重要作用,有可能是判斷肺腺癌預(yù)后及肺癌基因治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2312876