【摘要】：目的探討吉非替尼誘導的p27蛋白表達改變和核轉位及半胱天冬酶(Caspase)8的激活對表皮生長因子受體(EGFR)突變的非小細胞肺癌(NSCLC)細胞周期阻滯和細胞凋亡的影響及作用機制。方法選取存在19號外顯子缺失突變的對吉非替尼敏感的NSCLC細胞系HCC827,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)法和流式細胞術分別檢測吉非替尼在不同濃度和時間下對細胞活性的影響。利用Western印跡檢測p27蛋白和Caspase及其他相關蛋白的相對含量。通過免疫熒光法觀察p27蛋白的亞細胞定位。采用蛋白免疫共沉淀驗證p27蛋白和Caspase8之間的相互作用。結果吉非替尼濃度-時間依賴性促進了HCC827細胞凋亡。當吉非替尼干預18 h后,細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制因子p27蛋白表達開始出現(xiàn)顯著升高(P0.05),且p27蛋白在此過程中伴隨從細胞核到細胞質(zhì)的核轉位現(xiàn)象,而促凋亡蛋白B細胞淋巴瘤(Bcl)-2相關x蛋白(Bax)和Bad及抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl/白血病-x基因長片段(Bcl-xl)在吉非替尼干預后表達并未發(fā)生顯著改變。此外,細胞質(zhì)中p27蛋白與Caspase8的降解中間體p43/p41結合從而抑制其自身細胞質(zhì)向細胞核易位。結論推斷吉非替尼通過調(diào)節(jié)p27蛋白的亞細胞定位及Caspase8之間的相互作用,從而達到促EGFR突變的NSCLC細胞凋亡的效果。
[Abstract]:Objective to investigate the changes of p27 protein expression induced by gefitinib, nuclear translocation and activation of cysteinase (Caspase) 8 on (NSCLC) cell cycle arrest and apoptosis in non-small cell lung cancer (NSCLC) with (EGFR) mutation of epidermal growth factor receptor (EGF). And its mechanism. Methods NSCLC cell line HCC827, sensitive to gefitinib, with exon 19 deletion mutation was selected. The effects of gefitinib on cell activity at different concentrations and time were determined by 3- (4- (4-) -dimethylthiazole-2) -2-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and flow cytometry. The relative contents of p27 protein, Caspase and other related proteins were detected by Western blot. The subcellular localization of p27 protein was observed by immunofluorescence. The interaction between p27 protein and Caspase8 was examined by immunoprecipitation. Results Gifitinib promoted the apoptosis of HCC827 cells in a concentration-time dependent manner. The expression of p27 protein of cyclin dependent kinase (CDK) inhibitor began to increase significantly after 18 h intervention by gifitinib (P0.05), and p27 protein was accompanied by nuclear translocation from nucleus to cytoplasm during the treatment. However, (Bax) and Bad of (Bcl) 2 associated x protein and long fragment of Bcl-2 and Bcl/ leukemic X gene (Bcl-xl) of pro-apoptotic protein B cell lymphoma did not change significantly after intervention by gifitinib. In addition, p27 protein in cytoplasm binds to p43/p41, the degradation intermediate of Caspase8, which inhibits its own cytoplasmic translocation to nucleus. Conclusion it is inferred that gefitinib can promote the apoptosis of EGFR mutant NSCLC cells by regulating the subcellular localization of p27 protein and the interaction of Caspase8.
【作者單位】： 湖北省第三人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科;武漢市第一醫(yī)院病理科;
【分類號】：R734.2

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本文編號：2308310