【摘要】：1研究背景和目的食管癌(esophageal cancer,EC)是全球范圍內(nèi)排名第六的惡性腫瘤,在癌癥相關(guān)致死性腫瘤中位居第四位,預(yù)后極差,中晚期EC的5年生存率僅為15%-25%[1]。中國(guó)是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國(guó)家之一,全球每年新增食管癌患者超過(guò)50萬(wàn)例,其中一半以上發(fā)生在中國(guó)。但是目前可以運(yùn)用于食管癌早期診斷和人群篩查的手段非常有限,各種胃鏡技術(shù)的開(kāi)展對(duì)食管癌的早期診斷有重要貢獻(xiàn)。但是使用胃鏡普查有很多局限性:其一胃鏡對(duì)醫(yī)師操作經(jīng)驗(yàn)的高要求和病人自身的耐受性差等問(wèn)題;其次為胃鏡活檢在無(wú)癥狀人群中操作的盲目性和不規(guī)范現(xiàn)象;再次胃鏡在無(wú)癥狀人群篩查中食管癌及癌前病變的檢出率均較低[2],這使得該項(xiàng)檢測(cè)手段很難在食管癌高發(fā)區(qū)的無(wú)癥狀人群中大范圍開(kāi)展。如何找到一項(xiàng)無(wú)創(chuàng)性的食管癌檢測(cè)手段,即對(duì)于預(yù)測(cè)食管癌患病風(fēng)險(xiǎn)具有較高特異性和敏感性的分子靶標(biāo)對(duì)食管癌的早期發(fā)現(xiàn)、高危人群預(yù)警和精準(zhǔn)篩查都具有十分重要的意義。食管癌的全基因組關(guān)聯(lián)分析(genome-wide association study,GWAS)是從遺傳因素方面對(duì)食管癌發(fā)病機(jī)制的研究,迄今為止已發(fā)現(xiàn)多個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)及相關(guān)易感基因與食管癌(esophageal cancer,EC)高風(fēng)險(xiǎn)易感性有密切關(guān)系[3-5]。但是已被發(fā)現(xiàn)的SNP位點(diǎn)均未能在臨床實(shí)踐中得到廣泛應(yīng)用,如何利用這些易感SNP位點(diǎn)建立食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的分子學(xué)指標(biāo)是后GWAS時(shí)代的重要課題。本課題組著重在食管癌遺傳學(xué)方向進(jìn)行研究,試圖建立高發(fā)區(qū)醫(yī)院患者和無(wú)癥狀人群隊(duì)列,對(duì)入組患者或人群均進(jìn)行食管癌高風(fēng)險(xiǎn)SNP檢測(cè)并計(jì)算遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分(genetic risk score,GRS),通過(guò)定期胃鏡檢查和長(zhǎng)期隨訪,探索GRS與食管癌發(fā)病的關(guān)系,驗(yàn)證SNP對(duì)食管癌高風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警的價(jià)值,以期為臨床食管癌的早期診斷和普查提供適宜的分子指標(biāo)。本研究主要內(nèi)容為建立高發(fā)區(qū)醫(yī)院門診患者和高發(fā)區(qū)無(wú)癥狀人群兩組隊(duì)列,完成入組對(duì)象的SNP檢測(cè)和GRS計(jì)算,然后初步分析兩組隊(duì)列的GRS分布差異,明確SNP對(duì)高危人群預(yù)警中的作用,旨在為課題后續(xù)研究提供可行性依據(jù)。2材料與方法2.1研究對(duì)象2.1.1隊(duì)列1(醫(yī)院門診患者隊(duì)列)醫(yī)院門診患者隊(duì)列來(lái)源于河南省安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院、山西長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院和河北省磁縣人民醫(yī)院門診胃鏡患者(2012-2014年)。所有研究對(duì)象均為漢族人,且均為中國(guó)食管癌高發(fā)區(qū)居民。共入組1834例患者,其中男性879例,女性955例,男女比例為0.92:1;平均年齡為52±12歲,中位年齡為53歲,年齡范圍18-86歲。在1834例研究對(duì)象中,共1503例人群檢測(cè)到SNP位點(diǎn)的完整數(shù)據(jù),其中男性708例,女性795例,男女比例為0.89:1;平均年齡為53±12歲,中位年齡為53歲,年齡范圍23-86歲。2.1.1隊(duì)列2(高發(fā)區(qū)無(wú)癥狀人群隊(duì)列)該隊(duì)列來(lái)源于河南省食管癌重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室下鄉(xiāng)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果,均為河南省新鄉(xiāng)市輝縣區(qū)域內(nèi)無(wú)癥狀人群。研究對(duì)象共3157例,其中男性1484例,女性1673例,男性比例為0.89:1;平均年齡為56±9歲,中位年齡為56歲,年齡范圍23-86歲。在3157例研究對(duì)象中,共3147例人群檢測(cè)到SNPs位點(diǎn)的完整數(shù)據(jù),其中男性1477例,女性1670例,男女比例為0.88:1;平均年齡為56±9歲,中位年齡為56歲,年齡范圍23-86歲。所有患者均為漢族人,且為食管癌高發(fā)區(qū)人群。2.2研究對(duì)象資料的收集和整理在現(xiàn)場(chǎng)對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查問(wèn)卷,包括其年齡、地址、職業(yè)、吸煙、飲酒和家族史等基本情況;所有入選對(duì)象均抽取3-5ml外周靜脈血于EDTA抗凝或枸椽酸鈉抗凝管收集后迅速置于-20℃冰箱冷藏,為后續(xù)DNA提取和SNP檢測(cè)做準(zhǔn)備。2.3本研究中SNP的篩選和基因分型2.3.1 SNP篩選我們首先納入本課題組GWAS研究發(fā)現(xiàn)的9個(gè)SNP位點(diǎn),再對(duì)本室前期GWAS數(shù)據(jù)進(jìn)行imputation分析,與2010.1-2013.12期間基于中國(guó)人群的食管癌GWAS研究所發(fā)現(xiàn)的SNP位點(diǎn)交叉對(duì)比,去除文獻(xiàn)報(bào)道中明確有高度關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn),最終確定34個(gè)SNP位點(diǎn)納入本研究(見(jiàn)表2.2)。2.3.2 SNP基因分型本研究?jī)山M隊(duì)列共4991例樣本均進(jìn)行34個(gè)SNP檢測(cè),采用Sequenom Mass array SNP技術(shù)進(jìn)行這些SNPs的基因分型和等位基因頻率計(jì)算。由于rs1045485、rs2244438和rs3769823檢出率較低,故最終納入31個(gè)SNP基因分型數(shù)據(jù)計(jì)算相應(yīng)參數(shù)。2.4食管癌遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分(genetic risk score,GRS)計(jì)算我們根據(jù)Che研究[6]中GRS的算法,通過(guò)文獻(xiàn)查找風(fēng)險(xiǎn)比例(odds ratio,OR)和最小等位基因頻率(minor allele frequency,MAF),計(jì)算方差可釋性遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分(Explained variance weighted genetic risk score,EV-GRS)。2.5統(tǒng)計(jì)分析方法本研究資料中SNP位點(diǎn)的篩選和EV-GRS的計(jì)算采用PLINK統(tǒng)計(jì)軟件,SPSS 21.0軟件進(jìn)行余下統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,其中隊(duì)列間EV-GRS分布比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),采用X2檢驗(yàn)分析EV-GRS組間差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。3結(jié)果3.1食管癌高發(fā)區(qū)無(wú)癥狀人群胃鏡結(jié)果分析本資料共收集隊(duì)列1患者1834例,檢出各類食管疾病616例,檢出率高達(dá)33.6%。檢出各類食管疾病中,食管炎癥占據(jù)絕大多數(shù)(33.6%,535/1834),其中慢性食管炎的檢出率最高(24.6%,452/1834),其次為反流性食管炎(2.9%,53/1834);食管癌檢出率較高(1.5%,27/1834)。本研究檢出的616例各類食管疾病在不同年齡組間存在差異(P0.05),食管癌在60-69歲組檢出率最高(51.9%),慢性食管炎為50-59歲最高(35.2%),而反流性食管炎和食管平滑肌瘤在40-49歲組檢出率最高(32.1%,36.4%)。3.2 EV-GRS在隊(duì)列1和隊(duì)列2中分布比較3.2.1 EV-GRS在隊(duì)列1和隊(duì)列2中分布隊(duì)列1中,將SNP位點(diǎn)基因分型數(shù)據(jù)均完整的1503例患者計(jì)算EV-GRS,平均值為2.65±0.55,中位值2.65,范圍0.51-5.05。K-S檢驗(yàn)顯示EV-GRS服從正態(tài)分布(Z值=0.964,P值(sig 2-tailed)=0.310);隊(duì)列2中,計(jì)算SNP位點(diǎn)基因分型數(shù)據(jù)均完整的3147例研究對(duì)象的EV-GRS,平均值為2.57±0.52,中位值2.58,范圍0.94-4.36。K-S檢驗(yàn)顯示EV-GRS服從正態(tài)分布(Z值=0.804,P值(sig 2-tailed)=0.537)。3.2.2 EV-GRS在隊(duì)列1和隊(duì)列2中分布差異EV-GRS在兩組隊(duì)列中均服從正態(tài)分布,且兩總體方差齊(F=1.727,P=0.189);采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)顯示隊(duì)列1中患者平均EV-GRS高于隊(duì)列2中的研究對(duì)象(t=3.755,P=0.000,95%CI=0.09-0.03)。本研究中以5%及95%為分界依據(jù)將EV-GRS分為三組,分別為低風(fēng)險(xiǎn)組(EV-GRS1.77)、中風(fēng)險(xiǎn)組(EV-GRS為1.77-3.48)及高風(fēng)險(xiǎn)組(EV-GRS3.48)。隊(duì)列1中高風(fēng)險(xiǎn)患者比例高于隊(duì)列2,同時(shí)低風(fēng)險(xiǎn)患者高于隊(duì)列2中人群,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=8.5,P=0.014)。4結(jié)論1)食管癌高發(fā)區(qū)無(wú)癥狀人群胃鏡篩查中,食管疾病檢出率較高,其中食管炎癥居多數(shù),其各類食管疾病不同年齡間存在明顯差異;2)遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分在高發(fā)區(qū)醫(yī)院門診患者和無(wú)癥狀人群間的分布存在差異,可將高發(fā)區(qū)人群分為不同亞群,本研究為本課題后續(xù)工作奠定作用,通過(guò)隨訪為進(jìn)一步評(píng)價(jià)高風(fēng)險(xiǎn)SNP的意義提供重要基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：2305492