發(fā)布時間：2018-10-29 20:48

【摘要】：目的:探討柯里拉京對肝癌細(xì)胞系SMMC-7721和MHCC97H遷移、侵襲的影響,初步闡明柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞遷移、侵襲的的作用方式及分子機(jī)制。方法:(1)常規(guī)培養(yǎng)SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)中,用不同濃度柯里拉京檢測其抑制細(xì)胞SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的活力作用。(2)采用劃痕實(shí)驗(yàn)法,檢測不同濃度柯里拉京作用于SMMC-7721、MHCC97H細(xì)胞的傷痕愈合寬度。(3)采用transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細(xì)胞的遷移數(shù)目。(4)采用transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn),檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細(xì)胞的侵襲數(shù)目。(5)采用免疫熒光染色,檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細(xì)胞細(xì)胞骨架、絲狀偽足、片狀偽足的影響。(6)采用western blot,檢測柯里拉京作用于SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的EMT相關(guān)蛋白(E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin)以及 MAPK 信號通路相關(guān)蛋白(ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、P38、p-P38)的影響。結(jié)果:(1)MTT實(shí)驗(yàn)顯示柯里拉京對SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞抑制作用的具有濃度依賴關(guān)系,提示兩種細(xì)胞對柯里拉京的敏感性有差異,并且MHCC97H細(xì)胞對柯里拉京更為敏感,并MMC-7721細(xì)胞活力在柯里拉京濃度為300μmol/L時抑制作用明顯,而MHCC97H細(xì)胞活力在200μmol/L明顯被抑制。(2)劃痕遷移實(shí)驗(yàn)顯示,柯里拉京對兩種肝癌細(xì)胞SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的抑制呈現(xiàn)濃度、時間依賴。(3)Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)顯示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的遷移,濃度越高,抑制遷移作用越顯著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L時,對SMMC-7721遷移能力的抑制率分別為45.20%、52.03%、62.09%,與空白組比較,柯里拉京對SMMC-7721細(xì)胞的遷移能力均有明顯的抑制作用(p0.05;柯里拉京在30、60、120μmol/L時,對MHCC97H細(xì)胞遷移能力的抑制率分別為13.62%、51.38%、64.77%,空白組比較,60、120 μnol/L柯里拉京對MHCC97H細(xì)胞的遷移能力有明顯的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京對MHCC97H細(xì)胞遷移能力無明顯影響(p0.05)。(4)Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的侵襲,濃度越高,抑制侵襲作用越顯著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L濃度時,對SMMC-7721侵襲能力的抑制率分別為7.82%、25.23%、60.09%,與空白組比較,50、100、200μmol/L柯里拉京對SMMC-7721細(xì)胞的侵襲能力均有明顯的抑制作用(p0.05);柯里拉京在30、60、120μmol/L濃度時,對MHCC97H細(xì)胞侵襲能力的抑制率分別為25.20%、38.96%、71.19%,與空白組比較60、120μmol/L柯里拉京對MHCC97H細(xì)胞的侵襲能力有明顯的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京對MHCC97H細(xì)胞侵襲能力無明顯影響(p0.05)。(5)利用免疫熒光染色,柯里拉京可使SMCC-7771和MHCC97H中F-actin骨架發(fā)生重塑,濃度越高,細(xì)胞邊緣的絲狀偽足和片狀偽足形成逐漸減少、張力纖維數(shù)目逐漸減少,這種影響在SMMC-7721為200 μmol/L時顯著,而MHCC97H為120μmol/L 為明顯。(6)Western Blot顯示,柯里拉京可顯著下調(diào)SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞EMT中 N-cadherin 和 Vimentin 的表達(dá)(p0.05),而 E-cadherin、β-catenin 蛋白表達(dá)的沒有顯著改變;柯里拉京可下調(diào)SMMC-7721和MHCC97Hp-ERK的表達(dá)(p0.05)、上調(diào) p-P38 表達(dá)(p0.05),p-JNK、JNK,ERK、P38 等表達(dá)的改變沒有顯著改變。結(jié)論:(1)柯里拉京抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721和MHCC97H細(xì)胞的遷移及侵襲。(2)柯里拉京抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721和MHCC97H的遷移及侵襲,其機(jī)制可能是通過抑制EMT中的N-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)影響細(xì)胞骨架重塑來實(shí)現(xiàn)。(3)柯里拉京抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721和MHCC97H的遷移及侵襲,其機(jī)制可能是通過調(diào)控ERK通路介導(dǎo)EMT影響細(xì)胞骨架的重塑的而實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：2298782