【摘要】：目的:探討柯里拉京對肝癌細胞系SMMC-7721和MHCC97H遷移、侵襲的影響,初步闡明柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細胞遷移、侵襲的的作用方式及分子機制。方法:(1)常規(guī)培養(yǎng)SMMC-7721和MHCC97H細胞,MTT實驗中,用不同濃度柯里拉京檢測其抑制細胞SMMC-7721和MHCC97H細胞的活力作用。(2)采用劃痕實驗法,檢測不同濃度柯里拉京作用于SMMC-7721、MHCC97H細胞的傷痕愈合寬度。(3)采用transwell細胞遷移實驗,檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細胞的遷移數(shù)目。(4)采用transwell細胞侵襲實驗,檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細胞的侵襲數(shù)目。(5)采用免疫熒光染色,檢測柯里拉京作用下SMMC-7721、MHCC97H細胞細胞骨架、絲狀偽足、片狀偽足的影響。(6)采用western blot,檢測柯里拉京作用于SMMC-7721和MHCC97H細胞的EMT相關蛋白(E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin)以及 MAPK 信號通路相關蛋白(ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、P38、p-P38)的影響。結果:(1)MTT實驗顯示柯里拉京對SMMC-7721和MHCC97H細胞抑制作用的具有濃度依賴關系,提示兩種細胞對柯里拉京的敏感性有差異,并且MHCC97H細胞對柯里拉京更為敏感,并MMC-7721細胞活力在柯里拉京濃度為300μmol/L時抑制作用明顯,而MHCC97H細胞活力在200μmol/L明顯被抑制。(2)劃痕遷移實驗顯示,柯里拉京對兩種肝癌細胞SMMC-7721和MHCC97H細胞的抑制呈現(xiàn)濃度、時間依賴。(3)Transwell細胞遷移實驗顯示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細胞的遷移,濃度越高,抑制遷移作用越顯著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L時,對SMMC-7721遷移能力的抑制率分別為45.20%、52.03%、62.09%,與空白組比較,柯里拉京對SMMC-7721細胞的遷移能力均有明顯的抑制作用(p0.05;柯里拉京在30、60、120μmol/L時,對MHCC97H細胞遷移能力的抑制率分別為13.62%、51.38%、64.77%,空白組比較,60、120 μnol/L柯里拉京對MHCC97H細胞的遷移能力有明顯的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京對MHCC97H細胞遷移能力無明顯影響(p0.05)。(4)Transwell細胞侵襲實驗顯示,柯里拉京抑制SMMC-7721和MHCC97H細胞的侵襲,濃度越高,抑制侵襲作用越顯著,柯里拉京在50、100、200 μmol/L濃度時,對SMMC-7721侵襲能力的抑制率分別為7.82%、25.23%、60.09%,與空白組比較,50、100、200μmol/L柯里拉京對SMMC-7721細胞的侵襲能力均有明顯的抑制作用(p0.05);柯里拉京在30、60、120μmol/L濃度時,對MHCC97H細胞侵襲能力的抑制率分別為25.20%、38.96%、71.19%,與空白組比較60、120μmol/L柯里拉京對MHCC97H細胞的侵襲能力有明顯的抑制作用(p0.05),但30μmol/L柯里拉京對MHCC97H細胞侵襲能力無明顯影響(p0.05)。(5)利用免疫熒光染色,柯里拉京可使SMCC-7771和MHCC97H中F-actin骨架發(fā)生重塑,濃度越高,細胞邊緣的絲狀偽足和片狀偽足形成逐漸減少、張力纖維數(shù)目逐漸減少,這種影響在SMMC-7721為200 μmol/L時顯著,而MHCC97H為120μmol/L 為明顯。(6)Western Blot顯示,柯里拉京可顯著下調SMMC-7721和MHCC97H細胞EMT中 N-cadherin 和 Vimentin 的表達(p0.05),而 E-cadherin、β-catenin 蛋白表達的沒有顯著改變;柯里拉京可下調SMMC-7721和MHCC97Hp-ERK的表達(p0.05)、上調 p-P38 表達(p0.05),p-JNK、JNK,ERK、P38 等表達的改變沒有顯著改變。結論:(1)柯里拉京抑制肝癌細胞SMMC-7721和MHCC97H細胞的遷移及侵襲。(2)柯里拉京抑制肝癌細胞SMMC-7721和MHCC97H的遷移及侵襲,其機制可能是通過抑制EMT中的N-cadherin、Vimentin蛋白表達影響細胞骨架重塑來實現(xiàn)。(3)柯里拉京抑制肝癌細胞SMMC-7721和MHCC97H的遷移及侵襲,其機制可能是通過調控ERK通路介導EMT影響細胞骨架的重塑的而實現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：2298782