【摘要】：宮頸癌是全球女性中第二最常見的惡性腫瘤,占所有癌癥的9.8%。全球每年約有500000宮頸癌新發(fā)病例,其中一半的人死于宮頸癌,而80%的死亡發(fā)生在發(fā)展中國家。HPV感染一直以來被認(rèn)為是宮頸癌形成的主要致病因素,其中起關(guān)鍵作用的是致癌基因E6、E7。然而,許多研究顯示存在約10%的子宮頸腺癌和一定比例的子宮頸鱗癌HPV檢測為陰性。p53作為一個腫瘤抑制因子,它是控制細(xì)胞增殖的最主要因子之一。HPV E6致癌蛋白通過E6 AP與p53結(jié)合形成復(fù)合物,導(dǎo)致p53的下調(diào);在正常的細(xì)胞中,p16是一個增殖的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,它通過一個負(fù)性反饋環(huán)一旦Rb基因產(chǎn)物失活就使CDK4下調(diào)。E7與p Rb蛋白相互作用可以使這個負(fù)反饋環(huán)失活,導(dǎo)致p16上調(diào),從而促進(jìn)細(xì)胞周期從G1到S期。如今端粒酶的作用也被認(rèn)為是宮頸癌形成或發(fā)展的主要因素。有研究表明在人惡性腫瘤和被轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞系中端粒酶可被激活,從而得出在人惡性腫瘤的形成中端粒酶的激活是一個關(guān)鍵事件。端粒酶包括hTERC和h TERT兩個亞基,前者在端粒延長期間作為模板,后者起催化作用,并具有逆轉(zhuǎn)錄活性。hTERC基因的擴(kuò)增能阻止細(xì)胞凋亡,最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。HPV E6可激活h TERT來維持端粒的長度,從而導(dǎo)致細(xì)胞的永生化,導(dǎo)致腫瘤的形成。然而,臨床實際工作中卻發(fā)現(xiàn)存在HPV DNA及E6/E7mRNA均為陰性的宮頸癌病例。本研究通過對HPV DNA、E6/E7 mRNA及p16、p53、hTERC進(jìn)行檢測,旨在探討HPV檢測陰性SCC的存在,并深入分析三個指標(biāo)在HPV檢測陰性SCC中的表達(dá)及意義。目的通過對HPV DNA、E6/E7mRNA的檢測,從而得出人類乳頭狀瘤病毒(human papilloma viruse,HPV)檢測陰性子宮頸鱗癌的存在;檢測p16、p53、hTERC在HPV檢測陰性子宮頸鱗癌中的表達(dá)情況,探討其與HPV檢測陰性子宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性,為研究HPV檢測陰性子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的方向。材料及方法1.研究對象:本研究收集的樣本均來自河南省人民醫(yī)院(河南省鄭州市)病理科檔案室,為2013年10月-2015年05月經(jīng)福爾馬林溶液固定、石蠟包埋的宮頸組織標(biāo)本。所選的病例其年齡大致在18-65歲之間,其中位年齡約為42歲。這些病例所對應(yīng)的病人之前未曾檢查過或者未發(fā)現(xiàn)患有宮頸疾病。收集宮頸組織蠟塊875例。本研究已通過河南省人民醫(yī)院倫理委員會的同意并取得了病人或病人家屬的同意及簽字。2.研究方法:應(yīng)用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色法對875例石蠟包埋的宮頸組織進(jìn)行處理,染色結(jié)果由三名病理科年資較高的診斷醫(yī)生進(jìn)行評估,最后綜合三名醫(yī)生的評估結(jié)果做出最后診斷,診斷結(jié)果分為四組:225例正�；蜓装Y病變(normal or inflammatory,NNL);低級別宮頸鱗狀上皮病變(The Low Level of Cervical Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)總共有210例,高級別宮頸鱗狀上皮病變(The High Level of Cervical Squamous Intraepithelial Lesion,HSIL)總共有200例,宮頸鱗狀細(xì)胞癌(Squamous Cell Carcinoma of The Cervix,SCC)總共有240例。排除225例NNL病例。分別應(yīng)用PCR-反向雜交法、b DNA技術(shù)對210例LSIL、200例HSIL及240例SCC宮頸組織樣本進(jìn)行HPV型別及E6/E7 mRNA的檢測,隨后對15例HPV(-)(15例DNA-/mRNA-)及25例HPV(+)(包括5例DNA-/mRNA+、20例DNA+/mRNA+)SCC樣本進(jìn)行p53、p16免疫組化染色及hTERC基因的FISH檢測。3.統(tǒng)計學(xué)方法:本研究采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件(美國SPSS公司)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用χ2檢驗、Kruskal-Wallis秩和檢驗等方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,其中P0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.HPV DNA檢測結(jié)果:本研究對650例宮頸組織樣本進(jìn)行HPV DNA檢測及分析。HPV總檢出率是94.62%(615/650);LSIL、HSIL、SCC中,HPV檢出率分別是95.24%(200/210)、100%(200/200)、89.58%(215/240),其中后者較前兩者低,三者之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.00);LSIL組與HSIL組、LSIL組與SCC組、HSIL組與SCC組分別進(jìn)行比較,結(jié)果顯示差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.宮頸組織中E6/E7 mRNA的表達(dá)情況:E6、E7是HPV致癌的關(guān)鍵基因,當(dāng)HPV DNA整合入宿主細(xì)胞基因時可導(dǎo)致E6、E7過表達(dá),因此E6/E7 mRNA的檢測可表明HPV的感染狀態(tài)。本研究數(shù)據(jù)顯示:各病變級別之間,E6/E7 mRNA百分比存在明顯差異,具有正相關(guān)性(r=0.39,P=0.00)。對LSIL組與HSIL組、LSIL組與SCC組、HSIL組與SCC組中的mRNA百分比分別進(jìn)行比較,結(jié)果顯示第一組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.054),LSIL與SCC、HSIL與SCC之間的mRNA百分比均存在明顯差異(P0.001)。3.HPV DNA與E6/E7 mRNA的相關(guān)分析:本研究對SCC病例中HPV DNA及E6/E7 mRNA進(jìn)行分析,結(jié)果顯示存在87.5%DNA+/mRNA+病例、6.25%DNA-/mRNA-病例、2.08%DNA+/mRNA-病例、4.17%DNA-/mRNA+病例。而對于HSIL來說,DNA+/mRNA+病例百分比在SCC中相對較高,而DNA-/mRNA-病例百分比在SCC中相對較低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。4.HPV DNA與E6/E7 mRNA的差異分析:本研究對各宮頸病變級別中的HPV DNA陽性率及E6/E7 mRNA陽性率進(jìn)行對比分析。對于本實驗中650例宮頸組織樣本來說,HPV DNA、E6/E7 mRNA的檢出率分別是94.62%、71.54%,兩者之間進(jìn)行比較分析,結(jié)果是具有統(tǒng)計學(xué)差異的(P0.001)。LSIL中,HPV DNA檢出率大于E6/E7 mRNA檢出率,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001);與LSIL中的差異相類似,HSIL中的HPV DNA檢出率也大于E6/E7 mRNA檢出率,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001);在SCC中,HPV DNA陽性率小于E6/E7 mRNA陽性率,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.008)5.p53、p16及hTERC基因的檢測結(jié)果:本研究對HPV(-)組和HPV(+)組的SCC宮頸組織樣本均進(jìn)行了p53、p16免疫組化染色和hTERC基因的FISH檢測,結(jié)果顯示:p53在HPV(-)組和HPV(+)組的陽性百分比分別為66.67%、40%,兩組之間p53陽性百分比無明顯差異(χ2=2.667,P=0.102);兩組中,p16陽性百分比分別為66.67%、100%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(校正χ2=6.72,P=0.01)。hTERC基因檢測結(jié)果顯示:hTERC基因陽性表達(dá)率分別為66.67%HPV(-)組、80%HPV(+)組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(校正χ2=0.32,P=0.572)。結(jié)論1.存在HPV DNA及E6/E7 mRNA均為陰性的子宮頸鱗狀細(xì)胞癌,即HPV檢測陰性子宮頸鱗狀細(xì)胞癌。2.與HPV檢測陽性SCC相比,HPV檢測陰性SCC的形成中p53、hTERC表達(dá)無明顯差別,而p16表達(dá)較弱,其臨床意義和機(jī)制需要進(jìn)一步的研究。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊懷濤;薛德彬;陶祥;李再波;趙澄泉;;人乳頭狀瘤病毒檢測陰性的子宮頸癌[J];中華病理學(xué)雜志;2015年01期

2 李素紅;劉玲玲;馬海霞;王全紅;白瑋;;宮頸上皮癌變過程中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因擴(kuò)增與人乳頭狀瘤病毒的表達(dá)[J];中華病理學(xué)雜志;2012年02期

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本文編號：2293410