【摘要】：背景:Ras相關(guān)區(qū)域家族10(RASSF10)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中作為抑癌基因而異常表達(dá),并且表達(dá)異常的RASSF10與腫瘤的惡性程度及其患者的臨床轉(zhuǎn)歸及預(yù)后密切相關(guān)。在胃癌中,RASSF10的表達(dá)情況和作用機(jī)制尚不清楚。目的:本研究旨在探討RASSF10基因在人類胃癌中的表達(dá)及與胃癌患者預(yù)后相關(guān)的臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系,為胃癌的臨床診治提供客觀依據(jù)。方法:選取2008年1月至2010年12月在第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院胃癌手術(shù)標(biāo)本共105例。所有患者臨床隨訪時(shí)間至少五年或隨訪至死亡。另取我院2015年3月至2015年6月胃癌組織標(biāo)本及相對(duì)應(yīng)癌旁組織標(biāo)本各15例,于手術(shù)切除后切取一定大小立刻在液氮中進(jìn)行速凍,并保持在-80℃冰箱中行Western blot和q RT-PCR分析。應(yīng)用Western blot、q RT-PCR、免疫組織化學(xué)等方法檢測(cè)RASSF10在胃癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)情況,并分析其在胃癌不同TNM分期中的表達(dá)特點(diǎn),及其與臨床病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用Western blot、q RT-PCR的方法檢測(cè)多株胃癌細(xì)胞株和永生化胃上皮細(xì)胞GES1細(xì)胞中RASSF10的表達(dá)情況。利用去甲基化試劑5-雜氮-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-d C)處理所選取的與GES1細(xì)胞相比表達(dá)差異最明顯的BGC-823細(xì)胞系,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力,通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)胃癌細(xì)胞的增殖能力和活力。最后,運(yùn)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用χ~2檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:在15例冰凍胃癌組織和相對(duì)應(yīng)癌旁組織中,qRT-PCR結(jié)果顯示RASSF10在胃癌組織中的表達(dá)與相匹配的癌旁正常組織相比顯著下降。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了qRT-PCR的結(jié)果,RASSF10在胃癌組織中的表達(dá)水平的確低于相配對(duì)的癌旁正常組織。并且隨著臨床TNM分期的進(jìn)展,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者中該基因表達(dá)水平與Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者相比,呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示在所選取的105例胃癌組織中RASSF10陽性表達(dá)率為38.1%(40/105),陰性表達(dá)率為61.9%(65/105),在所選取的癌旁正常組織中RASSF10的陽性表達(dá)率為61.9%(65/105),陰性表達(dá)率為38.1%(40/105),兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,RASSF10表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(所有p0.05);RASSF10的表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤部位等差別無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(所有p0.05)。通過Kaplan-Meier生存分析顯示RASSF10表達(dá)陰性患者有著更差的預(yù)后(p=0.008)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示:RASSF10表達(dá)(HR=0.528,95%CI:0.286-0.975,p=0.041)與AJCC臨床分期(HR=4.994,95%CI:1.998-12.486,p=0.001)可作為判斷胃癌預(yù)后的獨(dú)立的預(yù)后因子。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,RASSF10在多株胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平均低于正常胃上皮細(xì)胞GES1細(xì)胞。5-Aza-d C處理BGC-823細(xì)胞后,RASSF10的表達(dá)水平升高。細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,去甲基化試劑處理組細(xì)胞的克隆數(shù)較未處理組克隆數(shù)明顯減少。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示處理組的細(xì)胞從周邊遷移到中央的細(xì)胞數(shù)明顯減少,遷移距離明顯縮短。結(jié)論:RASSF10蛋白在胃癌組織中較相應(yīng)癌旁組織表達(dá)明顯下調(diào),并且隨著臨床分期及病理分期的進(jìn)展,RASSF10的表達(dá)水平下調(diào)更加明顯。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,其表達(dá)水平的高低與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)密切相關(guān),且其在胃癌中表達(dá)下降可預(yù)測(cè)不良預(yù)后。這提示我們RASSF10或許可以作為胃癌診斷與預(yù)后的潛在生物標(biāo)記物。在體外機(jī)制研究中,我們發(fā)現(xiàn)RASSF10在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平較GES1細(xì)胞表達(dá)下降,BGC-823細(xì)胞系中下降更加明顯。去甲基化試劑處理后,RASSF10表達(dá)增多,并可明顯減少胃癌細(xì)胞的克隆形成數(shù)以及向劃痕中央遷移的距離,降低胃癌細(xì)胞的增殖能力和活力,并能夠顯著降低胃癌細(xì)胞的遷移能力。
[Abstract]:BACKGROUND: Ras-related regional family 10 (RASSF10) has been found to be abnormally expressed as a tumor suppressor gene in a variety of malignant tumors, and the expression of RASSF10 in abnormal expression is closely related to the degree of malignancy of the tumor and its clinical outcome and prognosis. In gastric cancer, the expression and mechanism of RASSF10 are not clear. Objective: To investigate the relationship between expression of RASSF10 gene in human gastric cancer and the clinical pathological parameters associated with prognosis of gastric cancer patients, and to provide an objective basis for clinical diagnosis and treatment of gastric cancer. Methods: 105 patients with gastric cancer were selected from January 2008 to December 2010. All patients were followed up for at least five years or follow-up to death. In our hospital from March 2015 to June 2015, 15 cases of gastric cancer tissue specimens and 15 adjacent tissue samples were taken, and then frozen in liquid nitrogen at a certain size after surgical resection and maintained at -80 鈩，

本文編號(hào)：2292833