【摘要】：目的本研究旨在探討金屬硫蛋白(metallothioneins, MTs)在低氧誘導(dǎo)甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma, PTC)侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及分子機(jī)制。方法 使用5%O2的低氧培養(yǎng)箱孵育甲狀腺乳頭狀癌BCPAP細(xì)胞,用Western blotting及RT-PCR檢測細(xì)胞中MT、HIF-1α、SIP1、 E-cadherin等相關(guān)蛋白和mRNA表達(dá)；使用Transwell觀察細(xì)胞侵襲遷移的情況。采用免疫組化SP法檢測72例人甲狀腺乳頭狀癌和37例癌旁正常組織中MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9的表達(dá)水平,分析其表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系及表達(dá)的相關(guān)性。將BCPAP細(xì)胞分為常氧、低氧、低氧+Scrambled-siRNA、低氧+過表達(dá)空質(zhì)粒、低氧+MT2AsiRNA和低氧+MT2A過表達(dá)組培養(yǎng)12h后檢測MT、HIF-1α、SIP1、E-cadherin和MMP-9蛋白表達(dá)及侵襲遷移情況。結(jié)果與常氧組相比,低氧處理組BCPAP細(xì)胞MT、HIF-1α、SIP1蛋白質(zhì)表達(dá)水平增高,E-cadherin的蛋白質(zhì)表達(dá)水平下降。MT、SIP1的mRNA表達(dá)水平增高,E-cadherin的mRNA表達(dá)水平明顯下降,HIF-1α無顯著性差異(P0.05)。侵襲與遷移實(shí)驗(yàn)中,低氧組的穿膜與遷移細(xì)胞數(shù)均較常氧組顯著的增多(P0.05)。在72例PTC組織中,MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9的陽性率分別為52.78%、55.56%、51.39%和54.17%,均顯著高于癌旁正常組織(P0.05)。MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9的陽性表達(dá)與患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P0.05),MMP-9的陽性表達(dá)與腫瘤大小有顯著相關(guān)性(P0.05)。MT、HIF-1α及SIP1的表達(dá)呈正相關(guān)。用MT2A-siRNA轉(zhuǎn)染BCPAP細(xì)胞后,低氧誘導(dǎo)的MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9表達(dá)降低,E-cadherin表達(dá)升高。過表達(dá)MT2A后,低氧誘導(dǎo)的MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9表達(dá)升高,E-cadherin表達(dá)則降低。結(jié)論 低氧誘導(dǎo)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞MT、SIP1表達(dá)上調(diào),E-cadherin表達(dá)下調(diào),以及侵襲轉(zhuǎn)移性增強(qiáng)。MT、HIF-1α、SIP1和MMP-9在PTC組織中的表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),且存在相關(guān)性。MT可能對低氧誘導(dǎo)的PTC細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role and molecular mechanism of metallothionein (metallothioneins, MTs) in (Papillary thyroid carcinoma, PTC) invasion and metastasis of papillary thyroid carcinoma induced by hypoxia. Methods BCPAP cells of papillary thyroid carcinoma were incubated with 5%O2 hypoxia incubator. The expressions of MT,HIF-1 偽, SIP1, E-cadherin and mRNA were detected by Western blotting and RT-PCR, and the invasion and migration of the cells were observed by Transwell. The expression of MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9 in 72 cases of human papillary thyroid carcinoma and 37 cases of adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical SP method. BCPAP cells were divided into normoxic and hypoxic Scrambled-siRNA, overexpression plasmids. The expression of MT,HIF-1 偽, SIP1,E-cadherin and MMP-9 protein and invasion and migration were detected in hypoxic MT2AsiRNA and hypoxic MT2A overexpression groups for 12 h. Results compared with the normoxic group, the expression of MT,HIF-1 偽 and SIP1 protein in BCPAP cells was increased, the expression of E-cadherin protein was decreased, the mRNA expression level of MT,SIP1 was increased, the mRNA expression level of E-cadherin was significantly decreased in hypoxia treatment group, and there was no significant difference in HIF-1 偽 expression between hypoxia group and normoxic group (P0.05). In invasion and migration experiment, the number of transmembrane and migration cells in hypoxia group was significantly higher than that in normal oxygen group (P0.05). In 72 cases of PTC, the positive rates of MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9 were 52.7855.56% and 54.1717%, respectively, which were significantly higher than those of adjacent normal tissues (P0.05). The positive expression of MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9 was significantly correlated with cervical lymph node metastasis (P0.05), MMP-9 positive expression was significantly correlated with tumor size (P0.05). The expression of MT,HIF-1 偽 and SIP1 was positively correlated. After transfection of MT2A-siRNA into BCPAP cells, hypoxia induced MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9 expression decreased and E-cadherin expression increased. Overexpression of MT2A increased the expression of MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9, but decreased the expression of E-cadherin. Conclusion the expression of MT,SIP1 is up-regulated, the expression of E-cadherin is down-regulated, and the invasion and metastasis are enhanced. The expression of MT,HIF-1 偽, SIP1 and MMP-9 in PTC tissue is closely related to cervical lymph node metastasis. MT may promote the invasion and metastasis of PTC cells induced by hypoxia.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1

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本文編號：2292546