【摘要】：背景:腫瘤的轉(zhuǎn)移是反映腫瘤惡性程度的重要特征,臨床上90%腫瘤患者的死因都與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前研究認(rèn)為,在腫瘤組織中存在數(shù)量較少但能夠起始腫瘤生長(zhǎng)的一群細(xì)胞,即腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells,CSCs)。正是腫瘤干細(xì)胞的存在導(dǎo)致了臨床上腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。目前已有大量證據(jù)證明,多種血液與實(shí)體腫瘤中均存在腫瘤干細(xì)胞。乳腺癌是女性癌癥患者中新發(fā)癌癥數(shù)量列第一位、死亡人數(shù)列第二位的癌癥,嚴(yán)重威脅女性的生命健康與生活質(zhì)量,且絕大多數(shù)乳腺癌患者的死因都源于乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。乳腺癌干細(xì)胞是最早報(bào)道的實(shí)體腫瘤干細(xì)胞,并可能是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的根源。因此,研究影響乳腺癌干細(xì)胞導(dǎo)致乳腺癌轉(zhuǎn)移的可能細(xì)胞與分子機(jī)制對(duì)靶向阻抑乳腺癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移意義重大。眾多研究提示,能夠引起腫瘤轉(zhuǎn)移的腫瘤干細(xì)胞需要具備一些內(nèi)在的特性,如失巢凋亡抵抗特性。腫瘤干細(xì)胞要發(fā)生轉(zhuǎn)移,必須要克服失巢凋亡的應(yīng)激壓力;而當(dāng)面對(duì)各種應(yīng)激壓力時(shí),腫瘤細(xì)胞會(huì)通過(guò)主動(dòng)改變自我以對(duì)抗應(yīng)激反應(yīng)。例如,腫瘤細(xì)胞在面對(duì)應(yīng)激壓力如化療藥物殺傷或放療殺傷時(shí),可以啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞的重編程機(jī)制,使非干性的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤干細(xì)胞,進(jìn)而獲得生存與轉(zhuǎn)移能力。過(guò)往的研究多數(shù)集中在利用失巢條件富集腫瘤干細(xì)胞,而很少關(guān)注失巢條件對(duì)腫瘤干細(xì)胞的影響。本研究試圖通過(guò)失巢誘導(dǎo)模型探討失巢條件對(duì)腫瘤干細(xì)胞的影響及其可能的細(xì)胞與分子機(jī)制。方法:本研究分為兩個(gè)部分。第一部分:我們利用超低吸附培養(yǎng)板建立乳腺癌失巢誘導(dǎo)模型;使用流式細(xì)胞術(shù)與腫瘤微球體培養(yǎng)技術(shù)檢測(cè)分析失巢與貼壁培養(yǎng)條件下乳腺癌干細(xì)胞比例及功能的改變;通過(guò)流式分選的方法分離出乳腺癌干細(xì)胞與非干性的乳腺癌細(xì)胞,對(duì)比在失巢與貼壁的不同培養(yǎng)條件下兩種細(xì)胞中乳腺癌干細(xì)胞比例的改變情況。第二部分:我們檢測(cè)了失巢凋亡抵抗細(xì)胞中CD147的表達(dá)情況,并建立了穩(wěn)定干涉CD147的乳腺癌細(xì)胞株;通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)與腫瘤微球體培養(yǎng)分析了CD147穩(wěn)定干涉細(xì)胞株其體外增殖能力與微球體形成能力;使用流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)比了失巢與貼壁培養(yǎng)條件下CD147的穩(wěn)定干涉細(xì)胞株中乳腺癌干細(xì)胞比例的變化情況,并采用過(guò)表達(dá)CD147的乳腺癌細(xì)胞模型進(jìn)行驗(yàn)證;最后應(yīng)用western bolt初步檢測(cè)了失巢誘導(dǎo)條件下STAT3信號(hào)通路的活化情況。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),在失巢培養(yǎng)條件下,不論是乳腺癌細(xì)胞系還是乳腺癌惡性胸水標(biāo)本中乳腺癌干細(xì)胞亞群的比例均顯著升高,其腫瘤微球體形成能力提高;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分選的非干性的乳腺癌細(xì)胞在失巢培養(yǎng)條件下能夠重編程為乳腺癌干細(xì)胞。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn),失巢培養(yǎng)條件下,乳腺癌細(xì)胞膜表面CD147的表達(dá)顯著升高,干涉CD147會(huì)顯著降低乳腺癌細(xì)胞的體外增殖能力與腫瘤微球體形成能力,顯著抑制失巢條件下非干性乳腺癌細(xì)胞向乳腺癌干細(xì)胞的重編程;反之,過(guò)表達(dá)CD147則可以促進(jìn)失巢條件下乳腺癌細(xì)胞的重編程。初步分子機(jī)制研究提示,失巢培養(yǎng)條件下,CD147下游的STAT3-Bcl-x L信號(hào)通路被激活。結(jié)論:失巢培養(yǎng)條件可以誘導(dǎo)非干性乳腺癌細(xì)胞重編程為乳腺癌干細(xì)胞,同時(shí)上調(diào)乳腺癌細(xì)胞膜表面CD147的表達(dá);干涉乳腺癌細(xì)胞CD147的表達(dá)則抑制失巢誘導(dǎo)的乳腺癌干細(xì)胞比例上調(diào),過(guò)表達(dá)CD147促進(jìn)失巢誘導(dǎo)的乳腺癌干細(xì)胞比例上調(diào),提示CD147參與了失巢培養(yǎng)下乳腺癌干細(xì)胞的重編程,其可能的分子機(jī)制與STAT3-BCl-x L信號(hào)通路的活化有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2285968