【摘要】：背景:腫瘤的轉(zhuǎn)移是反映腫瘤惡性程度的重要特征,臨床上90%腫瘤患者的死因都與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前研究認為,在腫瘤組織中存在數(shù)量較少但能夠起始腫瘤生長的一群細胞,即腫瘤干細胞(Cancer stem cells,CSCs)。正是腫瘤干細胞的存在導(dǎo)致了臨床上腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。目前已有大量證據(jù)證明,多種血液與實體腫瘤中均存在腫瘤干細胞。乳腺癌是女性癌癥患者中新發(fā)癌癥數(shù)量列第一位、死亡人數(shù)列第二位的癌癥,嚴重威脅女性的生命健康與生活質(zhì)量,且絕大多數(shù)乳腺癌患者的死因都源于乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。乳腺癌干細胞是最早報道的實體腫瘤干細胞,并可能是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的根源。因此,研究影響乳腺癌干細胞導(dǎo)致乳腺癌轉(zhuǎn)移的可能細胞與分子機制對靶向阻抑乳腺癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移意義重大。眾多研究提示,能夠引起腫瘤轉(zhuǎn)移的腫瘤干細胞需要具備一些內(nèi)在的特性,如失巢凋亡抵抗特性。腫瘤干細胞要發(fā)生轉(zhuǎn)移,必須要克服失巢凋亡的應(yīng)激壓力;而當(dāng)面對各種應(yīng)激壓力時,腫瘤細胞會通過主動改變自我以對抗應(yīng)激反應(yīng)。例如,腫瘤細胞在面對應(yīng)激壓力如化療藥物殺傷或放療殺傷時,可以啟動腫瘤細胞的重編程機制,使非干性的腫瘤細胞轉(zhuǎn)化為腫瘤干細胞,進而獲得生存與轉(zhuǎn)移能力。過往的研究多數(shù)集中在利用失巢條件富集腫瘤干細胞,而很少關(guān)注失巢條件對腫瘤干細胞的影響。本研究試圖通過失巢誘導(dǎo)模型探討失巢條件對腫瘤干細胞的影響及其可能的細胞與分子機制。方法:本研究分為兩個部分。第一部分:我們利用超低吸附培養(yǎng)板建立乳腺癌失巢誘導(dǎo)模型;使用流式細胞術(shù)與腫瘤微球體培養(yǎng)技術(shù)檢測分析失巢與貼壁培養(yǎng)條件下乳腺癌干細胞比例及功能的改變;通過流式分選的方法分離出乳腺癌干細胞與非干性的乳腺癌細胞,對比在失巢與貼壁的不同培養(yǎng)條件下兩種細胞中乳腺癌干細胞比例的改變情況。第二部分:我們檢測了失巢凋亡抵抗細胞中CD147的表達情況,并建立了穩(wěn)定干涉CD147的乳腺癌細胞株;通過克隆形成實驗與腫瘤微球體培養(yǎng)分析了CD147穩(wěn)定干涉細胞株其體外增殖能力與微球體形成能力;使用流式細胞術(shù)分析對比了失巢與貼壁培養(yǎng)條件下CD147的穩(wěn)定干涉細胞株中乳腺癌干細胞比例的變化情況,并采用過表達CD147的乳腺癌細胞模型進行驗證;最后應(yīng)用western bolt初步檢測了失巢誘導(dǎo)條件下STAT3信號通路的活化情況。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),在失巢培養(yǎng)條件下,不論是乳腺癌細胞系還是乳腺癌惡性胸水標(biāo)本中乳腺癌干細胞亞群的比例均顯著升高,其腫瘤微球體形成能力提高;通過流式細胞術(shù)分選的非干性的乳腺癌細胞在失巢培養(yǎng)條件下能夠重編程為乳腺癌干細胞。同時我們發(fā)現(xiàn),失巢培養(yǎng)條件下,乳腺癌細胞膜表面CD147的表達顯著升高,干涉CD147會顯著降低乳腺癌細胞的體外增殖能力與腫瘤微球體形成能力,顯著抑制失巢條件下非干性乳腺癌細胞向乳腺癌干細胞的重編程;反之,過表達CD147則可以促進失巢條件下乳腺癌細胞的重編程。初步分子機制研究提示,失巢培養(yǎng)條件下,CD147下游的STAT3-Bcl-x L信號通路被激活。結(jié)論:失巢培養(yǎng)條件可以誘導(dǎo)非干性乳腺癌細胞重編程為乳腺癌干細胞,同時上調(diào)乳腺癌細胞膜表面CD147的表達;干涉乳腺癌細胞CD147的表達則抑制失巢誘導(dǎo)的乳腺癌干細胞比例上調(diào),過表達CD147促進失巢誘導(dǎo)的乳腺癌干細胞比例上調(diào),提示CD147參與了失巢培養(yǎng)下乳腺癌干細胞的重編程,其可能的分子機制與STAT3-BCl-x L信號通路的活化有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2285968