【摘要】：目的死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域DNA結(jié)合蛋白(death effector domain DNA-binging protein,DEDD)可抑制乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,但在乳腺癌多藥耐藥中的作用尚不明確。本研究將探討DEDD在人乳腺癌多藥耐藥中的作用及機(jī)制。方法通過(guò)轉(zhuǎn)染DEDD-shRNA建立穩(wěn)定敲低DEDD表達(dá)的MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株,MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)多柔比星、紫杉醇對(duì)MCF-7WT(Wild type,野生型)、MCF-7control shRNA和MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞活力的影響,Annexin-V和碘化丙啶(propidium iodide,PI)雙染后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在藥物干預(yù)后的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果多柔比星干預(yù)后,半數(shù)抑制濃度IC50的多因素方差分析結(jié)果顯示,不同處理(F=89.49,P0.001)、不同時(shí)間(F=50.81,P0.001)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多柔比星干預(yù)24或48h后,MCF-7DEDD-shRNA的半數(shù)抑制濃度IC50分別為(0.97±0.15)和(0.62±0.09)μmol/L,明顯高于MCF-7 WT(0.46±0.05)和(0.26±0.03)μmol/L和MCF-7control shRNA細(xì)胞(0.39±0.05)和(0.25±0.03)μmol/L,P0.001。紫杉醇干預(yù)后,半數(shù)抑制濃度IC50的多因素方差分析結(jié)果顯示,不同處理(F=15.94,P0.001)、不同時(shí)間組間(F=129.70,P0.001)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紫杉醇干預(yù)24或48h后,MCF-7DEDD-shRNA的半數(shù)抑制濃度IC50為(16.74±2.26)和(9.88±1.47)μmol/L,明顯高于MCF-7 WT(13.39±1.44)和(7.69±0.92)μmol/L(P=0.001)和MCF-7control shRNA細(xì)胞(12.58±1.15)和(7.17±1.12)μmol/L(P0.001)。多柔比星干預(yù)后24h后流式細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,不同處理(F=131.46,P0.001)、不同濃度組間(F=160.95,P0.001)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常培養(yǎng)狀態(tài)下,MCF-7control shRNA細(xì)胞和MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞的凋亡率分別為(14.32±1.47)%和(11.58±1.63)%,而給予0.5μmol/L和1μmol/L多柔比星作用24h后,MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞的凋亡率分別為(21.62±1.97)%和(24.39±2.36)%,明顯低于MCF-7control shRNA細(xì)的(36.26±1.87)%和(38.23±1.46)%,P0.001。同樣,紫杉醇干預(yù)后24h,不同處理(F=124.81,P0.001)、不同濃度組間(F=172.56,P0.001)細(xì)胞凋亡率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給予9.37和18.74μmol/L紫杉醇作用24h后,MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞的凋亡率分別為(30.26±1.63)%和(32.18±2.16)%,明顯低于MCF-7control shRNA組的(53.84±2.17)%和(58.27±2.16)%,P0.001。多柔比星作用后不同時(shí)間BCRP蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,不同處理(F=14.67,P0.001)、不同時(shí)間(F=6.39,P=0.006)組間BCRP蛋白表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給予0.5μmol/L多柔比星作用24h后,3組細(xì)胞的BCRP相對(duì)表達(dá)水平分別為0.87±0.04、1.06±0.02和5.25±0.18。MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞組BCRP蛋白的表達(dá)水平顯著高于MCF-7 WT和MCF-7control shRNA細(xì)胞組,P0.001。多柔比星作用48h后,3組細(xì)胞的BCRP相對(duì)表達(dá)水平分別為1.06±0.01、0.97±0.04和2.98±0.13。MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞組BCRP蛋白的表達(dá)水平出現(xiàn)回落,但仍顯著高于MCF-7WT和MCF-7control shRNA細(xì)胞組,P0.001。同樣,紫杉醇作用后不同時(shí)間BCRP蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,不同處理(F=7.26,P=0.004)、不同時(shí)間(F=8.32,P=0.002)組間BCRP蛋白表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給予9.37μmol/L紫杉醇作用24h后,3組細(xì)胞的BCRP相對(duì)表達(dá)水平分別為0.81±0.05、2.25±0.10和1.78±0.14。其中MCF-7control shRNA組細(xì)胞BCRP表達(dá)水平高于MCF-7WT(P0.001)和MCF-7DEDD-shRNA(P=0.002)組。而紫杉醇作用48h后,3組細(xì)胞的BCRP相對(duì)表達(dá)水平分別為0.73±0.04、1.73±0.05和3.12±0.12,MCF-7DEDD-shRNA細(xì)胞組BCRP蛋白的表達(dá)水平繼續(xù)增高,且顯著高于MCF-7WT和MCF-7control shRNA細(xì)胞組,P0.001。結(jié)論敲低DEDD表達(dá)可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的抗腫瘤藥耐藥性,BCRP的表達(dá)增加可能是低表達(dá)DEDD乳腺癌細(xì)胞多藥耐藥的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【作者單位】： 武警兵團(tuán)指揮部第五支隊(duì);武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院病理科;武警后勤學(xué)院訓(xùn)練部;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院救援醫(yī)學(xué)研究所;武警后勤學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室;武警后勤學(xué)院藥化教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81202105) 天津市自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(13JCQNJC12900)
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;鈣粘素E水平低提示乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)腫瘤;2000年08期

2 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

3 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

3 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

4 劉愛(ài)國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

5 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

6 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

7 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

8 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

10 劉俊;李繼斌;汪洋;;吲哚-3-甲醇抗雌激素效應(yīng)及對(duì)乳腺癌的預(yù)防[A];食物功效成分與健康——達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心第九次學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

3 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

4 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

5 王樂(lè)　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

6 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

7 通訊員 王樂(lè)　沈基飛;乳腺癌耐藥新標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

8 伊遙;乳腺癌藥新舊交替[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2012年

9 記者 鄭曉春;以發(fā)現(xiàn)可促使乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散的蛋白[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

10 李國(guó)軍;三地腫瘤專(zhuān)家共商乳腺癌治療良策[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

5 劉英;叉頭蛋白FOXK2調(diào)控雌激素受體ERα的機(jī)理[D];大連理工大學(xué);2015年

6 姜擴(kuò);單鏈抗體介導(dǎo)的CXCR4 siRNA靶向抑制HER2~+乳腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 徐玉金;Foxp3通過(guò)下調(diào)CD44表達(dá)抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 曾凡才;Nodal及其受體ALK7和ALK4在乳腺癌中的表達(dá)功能和臨床意義[D];電子科技大學(xué);2014年

9 裴靜;ESR基因多態(tài)性與乳腺癌的關(guān)聯(lián)性研究及Meta分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

10 何浪;基于基因表達(dá)譜的乳腺癌外周血與腫瘤局部免疫微環(huán)境關(guān)聯(lián)性研究[D];電子科技大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 單系金;Mfn2磷酸化修飾對(duì)其調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖功能的重要性的研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 徐晶;缺氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞miR-210表達(dá)及侵襲能力的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 李麗;Mfn2對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7侵襲遷移能力的影響及機(jī)制探究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

6 張碩穩(wěn);MTDH、IκB、NF-κB P65在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 嚴(yán)文君;CBX7和EZH2在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

8 張鵬;乙酰肝素酶mRNA在乳腺癌中的表達(dá)及其與乳腺癌病理特征的關(guān)系[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

9 鄭璐;多基因甲基化水平調(diào)控的乳腺癌MCF-7對(duì)他莫昔芬敏感性探究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王旭;YB-1與乳腺癌關(guān)系的Meta分析[D];蘇州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2268115