【摘要】：目的:通過(guò)TIPE3干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SW480結(jié)腸癌細(xì)胞,驗(yàn)證干擾TIPE3表達(dá)對(duì)SW480結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響并探討相關(guān)機(jī)制。方法:構(gòu)建TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干擾質(zhì)粒,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將干擾質(zhì)粒導(dǎo)入SW480細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR、Western blot檢測(cè)重組質(zhì)粒的干擾效率。應(yīng)用CCK-8方法檢測(cè)SW480細(xì)胞生存率。Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。使用Western blot檢測(cè)細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)分子的表達(dá)情況。結(jié)果:成功設(shè)計(jì)、構(gòu)建和篩選具有生物活性且干擾效率最佳的TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干擾質(zhì)粒。CCK-8檢測(cè)證實(shí)干擾SW480結(jié)腸癌細(xì)胞TIPE3表達(dá)可以抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。流式結(jié)果顯示,TIPE3-shRNA3干擾組的凋亡率為(27.99±1.087)%,顯著高于正常細(xì)胞組(12.10±2.213)%及轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組(11.44±0.277 0)%。證實(shí)了降低TIPE3表達(dá)可以增加SW480對(duì)a DR5Sc Fv所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感性。Western blot結(jié)果顯示干擾TIPE3表達(dá)可以活化caspase3蛋白,降低p-AKT、p-PDK1、PCNA等分子的表達(dá)。結(jié)論:干擾TIPE3的表達(dá)對(duì)SW480結(jié)腸癌細(xì)胞具有促進(jìn)凋亡,抑制增殖的作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of interfering TIPE3 expression on the growth of SW480 colon cancer cells by transfection of SW480 colon cancer cells with TIPE3 interference plasmid. Methods: the TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q interference plasmid was constructed, and the interference plasmid was successfully transfected into SW480 cells by liposome transfection. The interference efficiency of the recombinant plasmid was detected by RT-PCR,Western blot. The survival rate of SW480 cells was detected by CCK-8 and apoptosis was detected by Annexin V-FITC/PI flow cytometry. Western blot was used to detect the expression of cell proliferation and apoptosis-related molecules. Results: TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q interference plasmids with biological activity and best interference efficiency were successfully designed, constructed and screened. CCK-8 analysis showed that interfering TIPE3 expression in SW480 colon cancer cells could inhibit cell growth. The apoptotic rate in TIPE3-shRNA3 interference group was (27.99 鹵1.087)%, which was significantly higher than that in normal cell group (12.10 鹵2.213)% and no-load plasmid transfection group (11.44 鹵0.277)%. It was confirmed that decreasing the expression of TIPE3 could increase the sensitivity of SW480 to apoptosis induced by a DR5Sc Fv. The results showed that interfering with TIPE3 expression could activate caspase3 protein and decrease the expression of p-AKTU p-PDK1 protein. Conclusion: interfering with the expression of TIPE3 can promote apoptosis and inhibit proliferation of SW480 colon cancer cells.
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;同濟(jì)大學(xué)第十人民醫(yī)院普通外科;廈門大學(xué)抗癌研究中心 器官移植研究所;廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院病理科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81272720) 福建省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)項(xiàng)目(2016R1102)資助
【分類號(hào)】：R735.35

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