【摘要】：目的:通過TIPE3干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SW480結(jié)腸癌細胞,驗證干擾TIPE3表達對SW480結(jié)腸癌細胞生長的影響并探討相關(guān)機制。方法:構(gòu)建TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干擾質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將干擾質(zhì)粒導(dǎo)入SW480細胞,通過RT-PCR、Western blot檢測重組質(zhì)粒的干擾效率。應(yīng)用CCK-8方法檢測SW480細胞生存率。Annexin V-FITC/PI流式細胞法檢測細胞凋亡。使用Western blot檢測細胞增殖、凋亡相關(guān)分子的表達情況。結(jié)果:成功設(shè)計、構(gòu)建和篩選具有生物活性且干擾效率最佳的TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干擾質(zhì)粒。CCK-8檢測證實干擾SW480結(jié)腸癌細胞TIPE3表達可以抑制細胞生長。流式結(jié)果顯示,TIPE3-shRNA3干擾組的凋亡率為(27.99±1.087)%,顯著高于正常細胞組(12.10±2.213)%及轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組(11.44±0.277 0)%。證實了降低TIPE3表達可以增加SW480對a DR5Sc Fv所誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感性。Western blot結(jié)果顯示干擾TIPE3表達可以活化caspase3蛋白,降低p-AKT、p-PDK1、PCNA等分子的表達。結(jié)論:干擾TIPE3的表達對SW480結(jié)腸癌細胞具有促進凋亡,抑制增殖的作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of interfering TIPE3 expression on the growth of SW480 colon cancer cells by transfection of SW480 colon cancer cells with TIPE3 interference plasmid. Methods: the TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q interference plasmid was constructed, and the interference plasmid was successfully transfected into SW480 cells by liposome transfection. The interference efficiency of the recombinant plasmid was detected by RT-PCR,Western blot. The survival rate of SW480 cells was detected by CCK-8 and apoptosis was detected by Annexin V-FITC/PI flow cytometry. Western blot was used to detect the expression of cell proliferation and apoptosis-related molecules. Results: TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q interference plasmids with biological activity and best interference efficiency were successfully designed, constructed and screened. CCK-8 analysis showed that interfering TIPE3 expression in SW480 colon cancer cells could inhibit cell growth. The apoptotic rate in TIPE3-shRNA3 interference group was (27.99 鹵1.087)%, which was significantly higher than that in normal cell group (12.10 鹵2.213)% and no-load plasmid transfection group (11.44 鹵0.277)%. It was confirmed that decreasing the expression of TIPE3 could increase the sensitivity of SW480 to apoptosis induced by a DR5Sc Fv. The results showed that interfering with TIPE3 expression could activate caspase3 protein and decrease the expression of p-AKTU p-PDK1 protein. Conclusion: interfering with the expression of TIPE3 can promote apoptosis and inhibit proliferation of SW480 colon cancer cells.
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;同濟大學(xué)第十人民醫(yī)院普通外科;廈門大學(xué)抗癌研究中心 器官移植研究所;廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院病理科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81272720) 福建省屬公益類科研院所基本科研專項項目(2016R1102)資助
【分類號】：R735.35

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本文編號：2265770