【摘要】：探討PKM2在白血病NB4細(xì)胞中的分布情況及對c-Myc蛋白的影響。免疫熒光技術(shù)檢測PKM2在NB4細(xì)胞中的分布情況。將含靶點序列的GV248載體、包裝質(zhì)粒Helper 1.0和Helper 2.0共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝慢病毒。收集病毒上清,濃縮純化后感染NB4細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察感染效率,Western blotting檢測PKM2和c-Myc蛋白的表達(dá)變化。CCK-8實驗檢測細(xì)胞增殖情況。結(jié)果顯示,PKM2在NB4細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá),細(xì)胞核中比例較大。成功構(gòu)建LV-PKM2-RNAi病毒,感染的細(xì)胞PKM2和c-Myc表達(dá)下調(diào)(p0.05),細(xì)胞增殖能力降低(p0.05)。這些結(jié)果表明PKM2主要分布在NB4細(xì)胞核,抑制PKM2表達(dá)可明顯抑制NB4細(xì)胞增殖,并抑制c-Myc蛋白表達(dá)。
[Abstract]:To investigate the distribution of PKM2 in leukemic NB4 cells and its effect on c-Myc protein. The distribution of PKM2 in NB4 cells was detected by immunofluorescence technique. The GV248 vector containing target sequence was cotransfected into 293T cells with packaging plasmids Helper 1.0 and Helper 2.0 to package lentivirus. The virus supernatant was collected and then infected with NB4 cells after concentrated and purified. The expression of PKM2 and c-Myc protein was detected by fluorescence microscopy by, Western blotting and the proliferation of cells was detected by CCK-8 assay. The results showed that PKM2 was expressed in the nucleus and cytoplasm of NB4. LV-PKM2-RNAi virus was successfully constructed. The expression of PKM2 and c-Myc was down-regulated (p0.05) and the cell proliferation was decreased (p0.05). These results suggest that PKM2 is mainly distributed in the nucleus of NB4. Inhibiting the expression of PKM2 can significantly inhibit the proliferation of NB4 cells and inhibit the expression of c-Myc protein.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院中心實驗室 重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室重慶市重點實驗室
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81171658) 重慶市自然科學(xué)基金(2011BA5037)共同資助
【分類號】：R733.7

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本文編號：2264302