發(fā)布時間：2018-10-10 16:59

【摘要】：目的:肺癌發(fā)病率在我國已居男性各種腫瘤的首位,然而其發(fā)病機制尚不完全明確。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個基因與肺癌有密切的關(guān)系如:ras、myc、p53等。最近幾年,全基因組關(guān)聯(lián)分析(Genome-wide association study,GWAS)發(fā)現(xiàn)許多新的單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs)與肺癌密切相關(guān),部分SNPs位于基因的內(nèi)含子或基因間區(qū)域,其作用機制尚不明確。因此,我們選取了6個新發(fā)現(xiàn)的與肺癌相關(guān)的SNPs進行關(guān)聯(lián)分析,篩選出與肺癌相關(guān)聯(lián)的SNP位點,進而對與肺癌有關(guān)聯(lián)的SNPs作用機制進行了探討,為更進一步了解肺癌的發(fā)生發(fā)展提供理論基礎,尋找分子治療靶點提供理論依據(jù)。方法:本實驗分為兩部分進行,第一部分主要研究候選SNPs與肺癌的關(guān)聯(lián)分析,篩選出與肺癌相關(guān)聯(lián)的SNP位點,第二部分則主要研究該SNP位點的作用機制。第一部分實驗,通過病例-對照研究,采用SNa Pshot分型技術(shù),在391例病例組和342例對照組人群中,對候選的6個SNPs進行了分型,然后通過統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)與肺癌相關(guān)SNP位點的易感基因。第二部分實驗中,我們過表達了SNAI1,然后采用Luciferase實驗對rs2853677位點所在區(qū)域的序列對TERT基因的調(diào)控功能進行了分析。利用電泳遷移率實驗(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)、染色體免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)實驗證明了SNP位點所在區(qū)域與蛋白質(zhì)的相互作用進行了檢測。最后通過染色體構(gòu)像捕獲(Chromosome Conformation Capture,3C)技術(shù)對rs2853677位點所在區(qū)域與TERT基因轉(zhuǎn)錄起始位點附近區(qū)域的空間構(gòu)象進行了分析。結(jié)果:第一部分實驗,通過對6個SNPs位點rs753955、rs2853677、rs2736100、rs4488809、rs2741354、rs12296850基因分型,對肺癌發(fā)病進行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)rs2853677位點、rs2736100位點和rs12296850位點與肺癌(腺癌)的發(fā)生有關(guān)聯(lián),rs2853677位點上突變的等位基因C和rs2736100位點上突變的等位基因G增加罹患腺癌的風險,而rs12296850位點上突變的等位基因G降低罹患腺癌的風險。上述3個SNPs位點在中國人群中得到證實,其可在中國人群中用于預防腫瘤發(fā)生檢測的標志位點。第二部分實驗,我們選取了rs2853677位點進行進一步分析。Lucifer報告基因表明rs2853677位點上下游1kb區(qū)域具有增強TERT啟動子活性的功能,且其增強TERT啟動子活性的功能受rs2853677位點多態(tài)性影響。EMSA實驗發(fā)現(xiàn)當rs2853677位點為等位基因T時,SNAI1可與該位點附近序列結(jié)合,而該位點為等位基因C時則不結(jié)合;Ch IP實驗則證明在T/T純合的H446細胞系中SNAI1可與rs2853677位點結(jié)合而C/C純合的H209細胞系中SNAI1則不與rs2853677位點結(jié)合,SNAI1與該位點的結(jié)合則可以抑制增強子的活性,從而降低TERT基因的表達水平。染色質(zhì)構(gòu)象捕獲(3C)技術(shù)確認了rs2853677位點與TERT基因啟動子區(qū)存在空間上的相互靠近,更進一步驗證了該區(qū)域存在TERT基因增強子。結(jié)論:通過本研究我們發(fā)現(xiàn)在中國人群中rs2853677位點與肺癌(腺癌)發(fā)生相關(guān),該位點上突變的等位基因C增加罹患肺癌(腺癌)的風險。rs2853677位點所在1kb區(qū)域存在增強子而調(diào)控TERT的表達,同時rs2853677位點可作為轉(zhuǎn)錄因子SNAI1的結(jié)合位點且該SNP位點多態(tài)性可影響轉(zhuǎn)錄因子SNAI1與該區(qū)域的結(jié)合的親和力。SNAI1與該位點的結(jié)合則可有效降低存在于該區(qū)域的TERT基因增強子的活性,從而降低TERT基因的表達水平。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：2262569