【摘要】：第一部分Irx3促進(jìn)肝內(nèi)脂質(zhì)蓄積和肝脂肪變的研究目的：研究Irx3在肝內(nèi)脂質(zhì)代謝中的作用及其分子機(jī)制。方法：通過尾靜脈注射過表達(dá)或沉默Irx3的腺病毒及對照腺病毒的方法,在小鼠體內(nèi)上調(diào)或下調(diào)Irx3的表達(dá),并給予正�；蚋咧嬍�12周,檢測小鼠肝組織學(xué)變化、脂質(zhì)蓄積情況及脂滴相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。在轉(zhuǎn)染Irx3過表達(dá)腺病毒或?qū)φ障俨《镜男∈蟾渭?xì)胞中,下調(diào)Fsp27β或Perilipin 1的表達(dá),并給予400μmol/l油酸誘導(dǎo),檢測肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況。此外,我們使用染色質(zhì)免疫共沉淀和報告基因熒光素酶檢測等分子生物學(xué)的方法,研究Irx3是否能夠轉(zhuǎn)錄激活Fsp27β或Perilipin1的表達(dá)。結(jié)果：上調(diào)肝內(nèi)Irx3的表達(dá)可促進(jìn)肝內(nèi)脂質(zhì)蓄積和肝脂肪變,以及增加Fsp27β和Perilipin 1的表達(dá)；相反,下調(diào)肝內(nèi)Irx3的表達(dá)可抵抗高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變,降低Fsp27β和Perilipin 1的表達(dá)水平。但是脂滴相關(guān)蛋白Cidea、Cideb、Atg1、Cgi-58和Perilipin2-4的表達(dá)不受Irx3表達(dá)變化的影響。與對照腺病毒轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞相比,Irx3過表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加,但是在腺病毒介導(dǎo)的Irx3過表達(dá)的肝細(xì)胞內(nèi)下調(diào)F sp27β或Perilipin 1的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)TG含量顯著性降低。染色質(zhì)免疫共沉淀和報告基因熒光素酶檢測結(jié)果顯示,Irx3能與Fsp27β和Perilipin 1的基因啟動子片段結(jié)合,而過表達(dá)Irx3增強(qiáng)Fsp27pβ和Perilipin 1的基因啟動子報告基因的熒光素酶活性。結(jié)論：Irx3通過轉(zhuǎn)錄激活Fsp27β和Perilipin 1的表達(dá),促進(jìn)肝內(nèi)脂質(zhì)蓄積和肝脂肪變。第二部分IRX3在肝細(xì)胞癌中的作用及表達(dá)調(diào)控研究目的：研究IRX3在肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)中的作用,并從miRNA的角度探討其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。方法：采用qRT-PCR和Western blot方法檢測HCC細(xì)胞系(HepG2和SMMC7721)和永生化肝細(xì)胞系L02中IRX3和miR-377表達(dá)水平：慢病毒轉(zhuǎn)染HCC細(xì)胞構(gòu)建IRX3穩(wěn)定表達(dá)和沉默的穩(wěn)定細(xì)胞株HepG2-shIRX3和SMMC7721-IRX3;采用CCK-8和克隆形成實(shí)驗檢測細(xì)胞的增殖和克隆形成能力；采用劃痕實(shí)驗和Transwell侵襲實(shí)驗檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力;將miR-377 mimics或Control mimics轉(zhuǎn)染入HCC細(xì)胞,QRT-PCR和Western blot方法檢測miR-377對IRX3的調(diào)控作用：運(yùn)用報告基因技術(shù)證實(shí)miR-377是否可直接結(jié)合IRX33'UTR;將]miR-377 mimics轉(zhuǎn)染入SMMC7721-IRX3細(xì)胞,CCK8、克隆形成、劃痕和Transwell實(shí)驗觀察miR-377是否能拮抗IRX3對細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的促進(jìn)作用。結(jié)果：HepG2和SMMC7721細(xì)胞中IRX3 mRNA和蛋白水平均顯著高于L02細(xì)胞；CCK-8實(shí)驗結(jié)果顯示,與陰性對照相比,上調(diào)IRX3顯著提高了SMMC7721細(xì)胞的生長,而下調(diào)IRX3抑制了HepG2細(xì)胞的生長；克隆形成實(shí)驗顯示,SMMC7721-IRX3細(xì)胞比對照細(xì)胞產(chǎn)生了更多的細(xì)胞克隆,HepG2-shIRX3細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞克隆少于對照細(xì)胞；劃痕實(shí)驗和Transwell實(shí)驗顯示,上調(diào)IRX3顯著增強(qiáng)了SMMC7721的遷移和侵襲能力,而下調(diào)IRX3顯著降低了HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲能力；miR-377在HepG2和SMMC7721細(xì)胞中低表達(dá)：與轉(zhuǎn)染Control mimics相比,轉(zhuǎn)染了miR-377 mimics的HepG2和SMMC7721細(xì)胞中IRX3的蛋白表達(dá)水平明顯降低,mRNA水平無明顯差異;報告基因?qū)嶒烇@示,miR-377顯著降低了IRX3-3'UTR-WT的熒光素酶活性,而IRX3-3'UTR-MUT不受miR-377影響；miR-377過表達(dá)消除了過表達(dá)IRX3對SMMC7721細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的促進(jìn)作用。結(jié)論：IRX3在HCC細(xì)胞系中高表達(dá),增強(qiáng)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力：IRX3是niR-377的靶基因;HCC細(xì)胞中miR-377低表達(dá)可能導(dǎo)致了IRX3的高表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5;R735.7

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7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達(dá)預(yù)測肝癌發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報;2004年

8 張金山;要靈活運(yùn)用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細(xì)胞癌的治療[N];科技日報;2006年

10 ;修復(fù)肝細(xì)胞 改善肝功能[N];人民日報海外版;2006年

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5 康富標(biāo);共刺激分子B7-H3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號：2262327